生物炭负载促生菌的生物肥料及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种生物炭负载促生菌的生物肥料及其制备方法，该方法包括以下步骤：S1、菌悬液的制备：所述菌悬液为IAA产生菌的菌悬液；S2、制备生物炭负载促生菌的生物肥料：在步骤S1所得的IAA产生菌的菌悬液中添加生物炭，混合均匀后于25‑35℃恒温震荡4‑8h制成生物炭负载促生菌的生物肥料；所述生物炭与IAA产生菌的菌悬液的质量体积比为1g：2‑3ml。本发明专利技术利用生物炭作为IAA产生菌的载体材料，将菌株负载到生物炭材料上，成本低廉，却可以显著提高菌株在土壤中的存活率，延长存活时间，更持久的发挥“促生”和“生防”作用。

【技术实现步骤摘要】
生物炭负载促生菌的生物肥料及其制备方法
本专利技术涉及微生物菌剂领域，具体涉及一种基于松木生物炭和两株植物生长促生菌的生物有机肥及其制备方法。
技术介绍
近年来，化肥施用量逐年增长，过量施用化肥不仅会使瓜果不甜，菜不香，更严重的是会产生严重的环境污染的问题(沈振月等，2004)。用微生物肥料代替化学肥料，一方面可以减少化肥的用量，促进作物的生长，也可以减少环境污染的问题(沈阿林等，2004)。因此，为了提高农产品品质，保护环境，发展“无公害农业，绿色农业”，研制出能够降低化学肥料，并符合农业可持续发展要求的微生物肥料十分必要。植物生长素(IAA)是一种重要的植物生长激素，利用IAA产生菌研制的微生物肥料能够促进植物生长(Subashetal.,2016)，但是IAA产生菌在土壤中的存活率是保证微生物菌肥肥效的关键，载体材料可以为微生物提供生存空间，同时也能调节土壤理化性质，从而更适应微生物的生长(Haleetal.,2014)。泥炭和蛭石是一种理想的载体材料，过去曾用泥炭材料作为根际促生菌或者生防菌株的载体，在接菌到载体4-8周后，菌株在载体材料上依旧保持活性(MateronandWeaver,1985；Kishoreetal.,2005)。但是，由于泥炭和蛭石这两种资源有限并且不易采集，成本较高，并没有被广泛的应用(Bashanetal.,2002；HerrmannandLesueur,2013)。其它的载体材料还包括：动物粪便、秸秆、硅藻、脱脂牛奶和生物炭(StephensandRask,2000)。动物粪便虽然含有丰富的养分能够为微生物所利用，但同时也携带致病菌和抗生素，对于植物生长会产生不利影响。利用秸秆作为菌株载体，秸秆中的虫卵、带菌体等一些病虫害，在秸秆直接粉碎过程中无法杀死，施用后，病虫害直接发生或者越冬来年发生(刘长跃，2004)。硅藻独特的二氧化硅为主要物质构成的细胞壁能够很好的吸附菌株，但目前国内缺少对硅藻的研究，将其应用于载体材料的研究还是一大难点(马健荣，2010)。脱脂牛奶含有丰富的微生物所需要的养分，但是考虑其成本较高，很难将其应用于农业生产。与其它载体材料相比，生物炭来源广、制备过程简单，具有较高的孔隙度、比表面积以及能够为微生物提供有效养分等，利用生物炭作为载体材料对于提高微生物菌肥在土壤中的作用效果有着十分重要的意义。同时，高温裂解制备生物炭的过程中也相当于对生物炭进行了灭菌处理，不会引入外源其它的微生物。所以结合生物炭的自身特征，以及对土壤和微生物的有益作用，生物炭可以作为一种理想的IAA产生菌的载体材料。因此，需要对现有技术进行改进。参考文献：BacillusaryabhattaiB8W22参考文献：ShivajiS,ChaturvediP,BegumZ,PindiPK,ManoramaR,PadmanabanDA.ShoucheYS,PawarS,VaishampayanP,DuttCBS,DattaGN,ManchandaRK,RaoUR,BhargavaPM,NarlikarJV.2009.Janibacterhoyleisp.nov.,Bacillusisronensissp.nov.andBacillusaryabhattaisp.nov.,isolatedfromcryotubesusedforcollectingairfromtheupperatmosphere.InternationalJournalofSystematicandEvolutionaryMicrobiology59,2977–2986.AgrobacteriumvitisNBRC15140参考文献：OphelKandKerrA.1990.Agrobacteriumvitissp.nov.forstrainsofAgrobacteriumbiovar3fromgrapevines.InternationalJournalofSystematicandEvolutionaryMicrobiology40:236-241.利用控制OD600值来调节每ml的初始菌悬液中所含有的菌体的数量参考文献：LiuYP,ChenL,ZhangN,LiZF,ZhangGZ,XuY,ShenQR,ZhangRF.2016.MolecularPlant-microbeInteractions.29(4):324-330.
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种生物炭负载促生菌的生物肥料及其制备方法。为了解决上述技术问题，本专利技术一种生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，包括以下步骤：S1、菌悬液的制备：所述菌悬液为IAA产生菌的菌悬液；S2、制备生物炭负载促生菌的生物肥料：在步骤S1所得的IAA产生菌的菌悬液中添加生物炭，混合均匀后于25-35℃恒温震荡4-8h制成生物炭负载促生菌的生物肥料；所述生物炭与IAA产生菌的菌悬液的质量体积比为1g：2-3ml。作为本专利技术的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法的改进，所述步骤S2中制备生物炭负载促生菌的生物肥料的方法具体为：在步骤S1所得的IAA产生菌的菌悬液中按照1g：2.5ml的质量体积比加入生物炭，混合均匀后于30℃恒温震摇6h，将IAA产生菌负载到生物炭上，获得生物炭负载促生菌的生物肥料。作为本专利技术的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法的进一步改进，所述步骤S1中菌悬液的制备的方法具体包括以下步骤：1.1、将IAA产生菌的种子液按0.5-2％的接种量(体积比)接种至LB液体培养基中，于25-35℃，150-200rpm恒温振荡培养箱中培养12-18h，制备获得初始菌悬液；1.2、将步骤1.1所得初始菌悬液的OD600值调节至0.7-0.9(即，每ml的初始菌悬液中所含有的菌体的数量约为5.0*108CFU)；1.3、将步骤1.2所得初始菌悬液进行清洗后获得菌悬液。作为本专利技术的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法的进一步改进，所述步骤1.1中初始菌悬液的具体制备方法为：将IAA产生菌的种子液按1％的接种量(体积比)接种至LB液体培养基中，于30℃，180rpm恒温振荡培养箱中培养16h。作为本专利技术的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法的进一步改进，所述步骤1.3中对初始菌悬液进行清洗后获得菌悬液的方法为：将步骤1.2所得的初始菌悬液于3-5℃，3800-4200rpm离心20-40min后倒掉液体，再用等体积的灭菌后0.85％(质量％)NaCl溶液悬浮菌体，重复进行于3-5℃，3800-4200rpm离心20-40min的清洗两次，之后将洗净的菌体用等体积灭菌后0.85％NaCl溶液悬浮制备菌悬液。作为本专利技术的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法的进一步改进，所述步骤1.3中对初始菌悬液进行清洗后获得菌悬液的具体方法为：将步骤1.2所得的初始菌悬液于4℃，4000rpm离心30min后倒掉液体，再用等体积的灭菌后0.85％NaCl溶液悬浮菌体，重复进行于4℃，4000rpm离心30min的清洗两次，之后将洗净的菌体用等体积灭菌后0.85％NaCl溶液悬浮制备菌悬液。作为本专利技术的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法的进一步改进，所述IAA产生菌为A本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：S1、菌悬液的制备：所述菌悬液为IAA产生菌的菌悬液；S2、制备生物炭负载促生菌的生物肥料：在步骤S1所得的IAA产生菌的菌悬液中添加生物炭，混合均匀后于25‑35℃恒温震荡4‑8h制成生物炭负载促生菌的生物肥料；所述生物炭与IAA产生菌的菌悬液的质量体积比为1g：2‑3ml。

【技术特征摘要】
1.生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：S1、菌悬液的制备：所述菌悬液为IAA产生菌的菌悬液；S2、制备生物炭负载促生菌的生物肥料：在步骤S1所得的IAA产生菌的菌悬液中添加生物炭，混合均匀后于25-35℃恒温震荡4-8h制成生物炭负载促生菌的生物肥料；所述生物炭与IAA产生菌的菌悬液的质量体积比为1g：2-3ml。2.根据权利要求1所述的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于所述步骤S2为：在步骤S1所得的IAA产生菌的菌悬液中按照1g：2.5ml的质量体积比加入生物炭，混合均匀后于30℃恒温震摇6h，将IAA产生菌负载到生物炭上，获得生物炭负载促生菌的生物肥料。3.根据权利要求1或2所述的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中菌悬液的制备的方法具体包括以下步骤：1.1、将IAA产生菌的种子液按0.5-2％的接种量接种至LB液体培养基中，于25-35℃，150-200rpm恒温振荡培养箱中培养12-18h，制备获得初始菌悬液；1.2、将步骤1.1所得初始菌悬液的OD600值调节至0.7-0.9；1.3、将步骤1.2所得初始菌悬液进行清洗后获得菌悬液。4.根据权利要求3所述的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于：所述步骤1.1中初始菌悬液的具体制备方法为：将IAA产生菌的种子液按1％的接种量接种...

【专利技术属性】
技术研发人员：李勇，刘晓瑞，李佳，邸洪杰，徐建明，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33