一种环介导等温扩增技术假阳性污染问题的有效改良方法技术

本发明专利技术涉及为解决上述技术问题，本发明专利技术提供的技术方案为：一种环介导等温扩增技术假阳性污染问题的有效改良方法，包括此方法使用的设备等温扩增装置本体，根据上述装置的使用方法，所述方法包括如下步骤：扩增前准备：打开上盖，在反应管内滴入22‑28微升环介导等温扩增体系的试剂，同时加入0.4‑0.7毫克琼脂糖粉，然后在单向阀腔体内注入1‑2毫升的1000×SYBR Green I染料。本发明专利技术要解决的技术问题是解决LAMP假阳性污染问题，提供一种环介导等温扩增技术假阳性污染问题的有效改良方法，操作简单，步骤合理，有效的消除LAMP假阳性污染的问题。

An improved method of false positive contamination by loop mediated isothermal amplification

In order to solve the above technical problems, the invention provides an effective method for improving the false positive pollution problem of the ring mediated isothermal amplification technology, including the device for isothermal amplification device used by the method, and according to the use method of the device, the method includes the following steps: pre amplification. Preparation: open the upper cover, drop the reagents in the reaction tube with 22 of the 28 microlift ring isothermal amplification system, and add 0.4 0.7 mg of agar powder, and then pour 1 2 ml 1000 * SYBR Green I dye into the unidirectional valve cavity. The technical problem to be solved is to solve the false positive pollution problem of LAMP, and provide an effective improvement method for the false positive pollution problem of the ring mediated isothermal amplification technology, which is simple in operation and reasonable in steps, and effectively eliminates the problem of false positive pollution of LAMP.

【技术实现步骤摘要】
一种环介导等温扩增技术假阳性污染问题的有效改良方法
本专利技术涉及假阳性污染改良
，具体是指一种环介导等温扩增技术假阳性污染问题的有效改良方法。
技术介绍
环介导等温扩增技术(Loop-mediatedisothermalamplificationLAMP)是日本学者Notomi等2000年创建的。LAMP反应需要4条或6条引物共同作用，及具有链置换活性的BstDNA聚合酶完成扩增。反应在60℃-65℃恒温扩增,不需要热循环。该反应有特异性高、灵敏度高、反应时间短、设备要求简单等优点。同时由于LAMP产物量巨大，实验结束后开盖形成气溶胶污染实验室，造成结果假阳性的问题十分严重。因此，研究LAMP假阳性污染问题的改良方法具有重要的意义。目前常用的防止假阳性污染问题的方法主要有以下几种：方法一，使用特定的PCR管，管中有一个固定的小隔板将管分成两个区域，一个加反应液一个加DNA染料，这种方法增加了加液次数，不适用于大批量检测；方法二，将染料包埋在石蜡中，反应结束后高温石蜡融化，释放染料，该方法制备包埋染料，增加检测准备时间。针对这样的情况，有必要研制一种新方法，来解决LAMP假阳性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种环介导等温扩增技术假阳性污染问题的有效改良方法，包括此方法使用的设备等温扩增装置本体(1)，其特征在于：所述等温扩增装置本体(1)上设有上盖(2)和底座(3)，上盖(2)和底座(3)铰接连接，所述底座(3)内固定设有至少两个放置架(4)，所述放置架(4)内设有可更换的透明反应管(5)，所述透明反应管(5)开口处设有水平的支撑条(6)，所述支撑条(6)中心处设有挤压凸起(7)，所述上盖(2)顶部设有气缸腔(8)，所述气缸腔(8)内顶部设有气缸(9)，所述气缸(9)的活塞杆连接设有蒸汽管架(10)，所述蒸汽管架(10)贯通上盖(2)盖壁处设有蒸汽喷头(11)，所述蒸汽管架(10)连通蒸汽喷...

【技术特征摘要】
1.一种环介导等温扩增技术假阳性污染问题的有效改良方法，包括此方法使用的设备等温扩增装置本体(1)，其特征在于：所述等温扩增装置本体(1)上设有上盖(2)和底座(3)，上盖(2)和底座(3)铰接连接，所述底座(3)内固定设有至少两个放置架(4)，所述放置架(4)内设有可更换的透明反应管(5)，所述透明反应管(5)开口处设有水平的支撑条(6)，所述支撑条(6)中心处设有挤压凸起(7)，所述上盖(2)顶部设有气缸腔(8)，所述气缸腔(8)内顶部设有气缸(9)，所述气缸(9)的活塞杆连接设有蒸汽管架(10)，所述蒸汽管架(10)贯通上盖(2)盖壁处设有蒸汽喷头(11)，所述蒸汽管架(10)连通蒸汽喷头(11)，所述蒸汽喷头(11)端部设有单向阀腔体(12)，所述蒸汽管架(10)一端连通设有蒸汽进口(13)，另一端设有泄压阀(14)，所述底座(3)底部中心处设有排水阀(15)，排水阀(15)连通等温扩增装置本体(1)内腔，所述等温扩增装置本体(1)内设有恒温控制器(17)，所述恒温控制器(17)、气缸(9)和排水阀(15)均电性连接控制器(16)；根据上述装置的结构原理，所述使用方法包括如下步骤：1)扩增前准备：打开上盖(2)，在透明反应管(5)内滴入22-28微升环介导等温扩增体系的试剂，同时加入0.4-0.7毫克琼脂糖粉，然后在单向阀腔体(12)内注入1-2毫升的1000×SYBRGreenI染料，环介导等温扩增体系试剂各组分体积分别为：BstDNA聚合酶(8000U/mL)0.75-1.25微...

【专利技术属性】
技术研发人员：李伟昊，
申请(专利权)人：邯郸市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：河北,13