人源化抗-CLL-1抗体制造技术

本申请提供了CLL‑1特异性人源化抗体。

Humanized anti -CLL-1 antibody

This application provides CLL 1 specific humanized antibody.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人源化抗-CLL-1抗体相关专利申请的交叉引用本专利申请要求于2015年11月24日提交的美国临时专利申请第62/259,100号的优先权的权益，将其为了所有目的通过引用并入。专利技术背景C型凝集素样分子1(CLL-1)表达于AML细胞和癌症干细胞(CSC)上，所述癌症干细胞是能够产生另外的癌细胞的细胞。化疗的一个主要限制是抗癌药物通常无法区分正常细胞和癌细胞。几乎所有主要类别的抗肿瘤药剂成员对正常细胞都具有相当大的毒性。特异性靶向癌细胞的组合物可避免该问题。然而，现有癌症靶标不靶向CSC。由于这一原因，现有化疗策略并未有效清除癌症，即使当特异性地递送至癌细胞时亦如此。由于存活的CSC可产生新的癌细胞，仍存在复发风险。与造血干细胞(HSC)类似，CSC表达CD34，但是在HSC上不表达CLL-1。这允许能够通过靶向CLL-1来特异性地选择CSC。专利技术概述本文提供了人源化抗-CLL-1抗体，其识别高比例表达CLL-1的细胞，但具有比鼠或嵌合抗体更弱的免疫原性和更好的耐受性。本申请的人源化抗-CLL-1抗体对表达CLL-1的细胞的补体依赖性毒性和抗体依赖性毒性都有效，并抑制表达CLL-1的癌细胞的肿瘤生长。目前所述的抗体为靶向CLL-1相关性病症提供了新的诊断和治疗策略。在一个方面，本文提供了结合CLL-1并且包含可变轻链和可变重链的人源化抗体，其中：a.所述可变轻链还包含鼠M26的CDRL1、CDRL2和CDRL3，以及IgKv1-16的人框架序列，除了其中：i.Kabat残基21可以是鼠的或人的；ii.Kabat残基36可以是鼠的或人的，iii.Kabat残基44可以是鼠的或人的，iv.Kabat残基46可以是鼠的或人的，v.Kabat残基65可以是鼠的或人的，vi.Kabat残基66可以是鼠的或人的，vii.Kabat残基67可以是人的或Ala(“A”)，viii.Kabat残基71可以是鼠的或人的，以及b.所述可变重链包含鼠M26的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及IGHV1-46的人框架序列，除了其中：i.Kabat残基1可以是鼠的或人的，ii.Kabat残基20可以是鼠的或人的，iii.Kabat残基48可以是鼠的或人的，iv.Kabat残基67可以是鼠的或人的，v.Kabat残基69可以是鼠的或人的，vi.Kabat残基71可以是鼠的或人的，vii.Kabat残基73可以是鼠的或人的，viii.Kabat残基93可以是鼠的或人的。在一个实施方案中，可变重链Kabat残基103-113是鼠的。在另一实施方案中，可变重链Kabat残基残基1、20、48、67、69、71、73和93中的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个或八个是鼠的。在另一实施方案中，抗-CLL-1人源化抗体包含可变轻链和可变重链，其中：a.所述可变轻链包含选自HuM26L4、HuM26L4D和HuM26L4DR的序列，以及b.所述可变重链包含序列HuM26VH4。在一个方面，本文提供了结合CLL-1的人源化抗体，其包含可变轻链和可变重链，其中：a.所述可变轻链包含鼠M31的CDRL1、CDRL2和CDRL3，以及X02990的人框架序列，除了其中：i.Kabat残基60可以是人的或D(“Asp”)，以及ii.Kabat残基68可以是鼠的或人的；以及b.所述可变重链包含鼠M31的CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及以下的人框架序列：i.AF174092，除了其中：1.Kabat残基43可以是人的或R(“Arg”)，2.Kabat残基48是鼠的，3.Kabat残基58-65是鼠的，4.Kabat残基66可以是鼠的或人的，5.Kabat残基67可以是鼠的或人的，6.Kabat残基69可以是鼠的或I(“Ile”)，7.Kabat残基71是鼠的，8.Kabat残基75可以是人的或T(“Thr”)，9.Kabat残基82A可以是人的或R(“Arg”)，10.Kabat残基85可以是鼠的或人的，或ii.M17751，除了其中：1.Kabat残基43可以是人的或R(“Arg”)，2.Kabat残基48是鼠的，3.Kabat残基58-65是鼠的，4.Kabat残基66可以是鼠的或人的，5.Kabat残基67可以是鼠的或人的，6.Kabat残基69可以是鼠的或人的，7.Kabat残基71是鼠的，8.Kabat残基75可以是人的或T(“Thr”)，9.Kabat残基82A可以是人的或R(“Arg”)，10.Kabat残基85可以是人的或D(“Asp”)。为了本公开内容的目的，“鼠”框架氨基酸残基分别是图1A-B或2A-C中示出的M26或M31中的那些框架氨基酸残基。M26的“人”框架氨基酸残基是图1A轻链可变链中的“IGKv1-16”以及图1B重链可变链中的“IGHV1-26”所示出的那些，M31的“人”框架氨基酸残基是图2A轻链可变链中的“X02990VL”以及图2B-2C重链可变链中“AF174092_VH”或“M17751_VH”所示出的那些。在另一方面，本公开内容提供了包含可变轻链和可变重链的抗-CLL-1人源化抗体，其中：a.所述可变轻链包含选自HuM31VL1和HuM31VL2的序列；以及b.所述可变重链包含选自HuM31VH1、HuM31VH2、HuM31VH3和HuM31VH4的序列。在本公开内容的抗体的另一实施方案中，所述可变轻链包含HuM26L4。在另一实施方案中，所述可变轻链包含HuM26L4D。在另一实施方案中，所述可变轻链包含HuM26L4DR。在另一实施方案中，所述抗体包含HuM31VH2(SEQIDNO:16)和HuM31VL2(SEQIDNO:12)，或HuM31VH3(SEQIDNO:17)和HuM31VL2(SEQIDNO:12)。在另一实施方案中，所述抗体还包含选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的人恒定区。在一个实施方案中，所述抗体是双特异性抗体，其包含结合CLL-1的第一臂以及结合第二靶抗原如，CD33、CD123、IL1Rap、GPR114的第二臂。在另一实施方案中，所述抗体是双特异性抗体，其包含结合CLL-1的第一臂以及结合T细胞上的CD3抗原的第二臂。在另一实施方案中，所述抗体是半胱氨酸取代的抗体。还提供了结合CLL-1的抗体，所述抗体包含：含有SEQIDNO:21的可变轻链，其中SEQIDNO:21中的至少一个可变位点是来自SEQIDNO:6中相同位点的氨基酸；以及含有SEQIDNO:23的可变重链，其中SEQIDNO:23中的至少一个可变位点是来自SEQIDNO:9中相同位点的氨基酸。在一些实施方案中，i.所述可变轻链包含SEQIDNO:22，ii.所述可变重链包含SEQIDNO:24，或iii.所述可变轻链包含SEQIDNO:22并且所述可变重链还包含SEQIDNO:24。在一些实施方案中，可变重链Kabat残基1、20、48、67、69、71、73和93中的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个或八个是鼠的。在一些实施方案中，可变重链Kabat残基1、20、48、67、69、71、73和93中的至少一个、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.结合CLL‑1的抗体，所述抗体包含：含有SEQ ID NO:21的可变轻链，其中SEQ ID NO:21中的至少一个可变位点是来自SEQ ID NO:6中相同位点的氨基酸；以及含有SEQ ID NO:23的可变重链，其中SEQ ID NO:23中的至少一个可变位点是来自SEQ ID NO:9中相同位点的氨基酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.24 US 62/259,1001.结合CLL-1的抗体，所述抗体包含：含有SEQIDNO:21的可变轻链，其中SEQIDNO:21中的至少一个可变位点是来自SEQIDNO:6中相同位点的氨基酸；以及含有SEQIDNO:23的可变重链，其中SEQIDNO:23中的至少一个可变位点是来自SEQIDNO:9中相同位点的氨基酸。2.如权利要求1所述的抗体，其中i.所述可变轻链包含SEQIDNO:22，ii.所述可变重链包含SEQIDNO:24，或iii.所述可变轻链包含SEQIDNO:22并且所述可变重链包含SEQIDNO:24。3.如权利要求1所述的抗体，其中可变重链Kabat残基1、20、48、67、69、71、73和93中的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个或八个是鼠的。4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中轻链Kabat残基65-67是NRA或NGA。5.如权利要求1所述的抗体，其中所述可变轻链包含SEQIDNO:3；SEQIDNO:4或SEQIDNO:5，以及所述可变重链包含SEQIDNO:8。6.如权利要求1所述的抗体，其中所述可变轻链包含SEQIDNO:3。7.如权利要求1所述的抗体，其中所述可变轻链包含SEQIDNO:4。8.如权利要求1所述的抗体，其中所述可变轻链包含SEQIDNO:5。9.结合CLL-1的抗体，所述抗体包含：含有SEQIDNO:25的可变轻链，其中SEQIDNO:25中的至少一个可变位点是来自SEQIDNO:13中相同位点的氨基酸；以及含有以下的可变重链：SEQIDNO:26，其中SEQIDNO:26中的至少一个可变位点是来自SEQIDNO:19中相同位点的氨基酸，或SEQIDNO:27，其中SEQIDNO:27中的至少一个可变位点是来自SEQIDNO:20中相同位点的氨基酸。10.如权利要求9所述的抗体，其中所述可变轻链包含SEQIDNO:11或SEQIDNO:12；以及所述可变重链包含SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17或SEQIDNO:18。11.如权利要求10所述的抗体，其包含SEQIDNO:16和SEQIDNO:12；或者SEQIDNO:17和SEQIDNO:12。12.如权利要求1-11中任一项所述的抗体，其还包含选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的人恒定区。13.如权利要求1-12中任一项所述的抗体，其是双特异性抗体，所述双特异性抗体包含结合CLL-1的第一臂，以及结合第二靶抗原如CD33、CD123、IL1Rap、GPR114的第二臂。14.如权利要求1-12中任一项所述的抗体，其是双特异性抗体，所述双特异性抗体包含结合CLL-1的第一臂，以及结合T细胞上的CD3抗原的第二臂。15.如权利要求1-12中任一项所述的抗体，其是半胱氨酸取代的抗体。16.如权利要求1-15中任一项所述的抗体，其与细胞毒性剂连接。17.如权利要求16所述的抗体，其中所述细胞毒性剂是苯二氮类。18.如权利要求17所述的抗体，其中所述苯二氮类选自吡咯并苯二氮吲哚啉苯二氮和异喹啉苯二氮或者它们的杂二聚体或同二聚体。19.嵌合抗原受体，其包含：靶标结合结构域，其结合CLL-1并且包含选自权利要求1-11中任一项所述的可变轻链和可变重链的结合部分(如scFv结构域)；铰链区；跨膜结构域(TM)；以及胞内结构域，其包含至少一...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋英萍，杰格塔·R·祖奴图拉，伦纳德·G·普雷斯塔，鹤下直哉，
申请(专利权)人：塞勒兰特治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US