本发明专利技术提供一种环状RNA在诊断和/或治疗成釉细胞瘤中的应用，所述环状RNA的circbase ID为：has‑ circRNA‑ 100375，其序列如SEQ NO:1所示，是由如该序列所示的核苷酸序列收尾连接成的环状结构。该环状DNA可作为成釉细胞瘤诊断和/或治疗的分子标志物。本研究在分子机制层面从非编码RNA hsa‑circRNA‑100375入手，验证了其在成釉细胞瘤侵袭性生长中发挥的作用，为成釉细胞瘤的诊断和治疗提供新的发展方向。
Application of a circular RNA in the diagnosis and / or treatment of ameloblastoma
The present invention provides an application of a circular RNA in the diagnosis and / or treatment of ameloblastoma. The circbase ID of the ring RNA is has circRNA 100375, its sequence, as shown by SEQ NO:1, is a ring structure connected by the sequence of nucleotide sequences as shown by the sequence. The cyclic DNA can be used as a molecular marker for the diagnosis and / or treatment of ameloblastoma. This study is based on the molecular mechanism of the non coded RNA HSA circRNA 100375, to verify its role in the invasive growth of ameloblastoma, and to provide a new direction for the diagnosis and treatment of ameloblastoma.
【技术实现步骤摘要】
一种环状RNA在诊断和/或治疗成釉细胞瘤中的应用
本专利技术属于生物医药
，涉及一种环状RNA，具体涉及一种环状RNA在诊断和/或治疗成釉细胞瘤中的应用。
技术介绍
成釉细胞瘤（ameloblastoma，AB）是常见的牙源性肿瘤，在口腔肿瘤中占有重要的地位。世界卫生组织头颈部肿瘤分类将成釉细胞瘤归为良性肿瘤，而ROSAI＆ACKERMAN外科病理学（第十版）将成釉细胞瘤归为交界性（低度恶性）肿瘤，目前治疗方式以手术治疗为主，但是由于其具有侵袭性生长和恶变潜能的生物学行为，术后复发率较高，甚至会发生远隔器官转移，严重影响了患者的生存质量。关于成釉细胞瘤侵袭性生物学行为的研究已成为热点，但成釉细胞瘤侵袭性生长的机理尚未达成一致的结论。因此，深入探讨成釉细胞瘤侵袭机制具有重要意义。环状RNA（circularRNA，circRNA）是近年来RNA研究领域的一颗新星，是一类由特殊的选择性剪切产生且在真核细胞中广泛表达的环形内源性RNA分子，具有闭合环状结构，其特殊的结构特征使其具有特异的生物学功能。研究发现，环状RNA可以发挥microRNA分子海绵作用，同时还可能调节宿主基因表达，与RNA结合蛋白相互作用调控翻译过程，发挥顺式转录调控作用，甚至可以调控可变剪接等，由于环状RNA相对来说还是一个新鲜的事物，对于环状RNA的研究尚处于起步阶段，研究结论均需大量实验验证。部分环状RNA富含microRNA结合位点，可以发挥竞争性内源性RNA作用，作为miRNA分子海绵来解除对其靶基因的抑制效应。为此，研究环状RNA在成釉细胞瘤的侵袭性生长过程中的作用对成釉细胞瘤的诊断和/或治疗具有重大意义。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种环状RNA在诊断和/或治疗成釉细胞瘤中的应用。本专利技术的技术方案为：第一个方面，本专利技术提供一种环状RNA，所述环状RNA的circbaseID为：has-circRNA-100375，其序列如SEQIDNO:1所示，是由如该序列所示的核苷酸序列收尾连接成的环状结构。目前尚未有任何关于环状RNAhas-circRNA-100375功能的报道。第二个方面，本专利技术还提供一种诊断成釉细胞瘤的试剂盒，所述试剂盒包括检测所述环状RNA表达量的试剂。进一步地，所述试剂包括扩增所述环状RNA的引物。进一步地，所述引物序列如SEQIDNO:2所示。进一步地，所述试剂盒还包括从细胞瘤和瘤旁组织中提取及纯化RNA的试剂、进行逆转录及荧光定量PCR的试剂。第三个方面，本专利技术还提供一种治疗成釉细胞瘤的药物组合物，所述药物组合物包括所述环状RNA和下调所述环状RNA表达量的试剂中的至少一种。第四个方面，本专利技术还提供一种治疗成釉细胞瘤的表达载体，所述表达载体表达所述环状RNA。第五个方面，本专利技术还提供所述环状RNA在制备诊断成釉细胞瘤试剂盒中的用途。第六个方面，本专利技术还提供所述环状RNA在制备或筛选治疗成釉细胞瘤的药物中的用途。第七个方面，本专利技术还提供下调所述环状RNA表达量的试剂在制备治疗成釉细胞瘤的药物中的用途。与现有技术相比，本专利技术的特点和有益效果是：我们结合HumanCircularRNA表达谱芯片技术和生物信息学技术，首次发现了一个新的环状RNA分子（hsa_circRNA_100375），其在成釉细胞瘤中高表达，hsa_circRNA_100375的表达与成釉细胞瘤复发密切相关。下调hsa_circRNA_100375的表达水平，可以显著抑制人永生化成釉细胞瘤细胞系AM-1细胞迁移及侵袭能力，提示hsa_circRNA_100375可能主要通过促进成釉细胞瘤的侵袭性生长发挥作用，为成釉细胞瘤的诊断和治疗提供分子基础。附图说明图1为本专利技术实施例1中hsa_circRNA_100375在细胞瘤和瘤旁组织中的相对表达量图。图2为本专利技术实施例1中细胞瘤原发组和复发组hsa_circRNA_100375的相对表达量图。图3为本专利技术实施例2中hsa-circRNA-100375-siRNA转染效果的qRT-PCR验证图，其中Control代表空白对照组；NC代表阴性对照组（siRNAcontrol组）；Si-1，Si-2，Si-3分别代表转染合成的3个siRNA组；***代表p值<0.0001，差异非常显著。图4为本专利技术实施例2中抑制hsa-circRNA-100375表达对AM-1细胞迁移及侵袭能力的影响图，其中图4-1为空白对照组的细胞迁移结果，图4-2为阴性对照组的细胞迁移结果，图4-3为hsa-circRNA-100375-siRNA转染组的细胞迁移结果，图4-4为空白对照组的细胞侵袭结果，图4-5为阴性对照组的细胞侵袭结果，图4-6为hsa-circRNA-100375-siRNA转染组的细胞侵袭结果，图4-7为三组的迁移能力影响结果的对比图，图4-8为三组的侵袭能力影响结果的对比图。具体实施方式为更好地说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。实施例1：hsa_circRNA_100375在成釉细胞瘤中的表达情况1.1组织标本收集2014年1月至2015年12月中国医科大学口腔医院颌面外科26例AB手术切除标本(包括AB和瘤旁NOM)，患者年龄8-82岁，其中男性16例，女性10例；上颌骨14例，下颌骨12例。病理组织学分型：囊实型26例。原发组15例，复发组11例，随访时间6-30个月。其中6例AB及瘤旁组织用于环状RNA芯片分析，肿瘤患者相关临床资料详见表1。所有患者均未行术前放化疗。手术切除的标本经过预冷生理盐水冲洗干净后立即放入-80℃冰箱冻存。本研究获得中国医科大学伦理委员会的批准。表1成釉细胞瘤患者临床资料1.2主要试剂1.2.1RNA提取及纯化试剂TRIzol：美国Invitrogen公司氯仿：北京鑫鼎鹏飞科技发展有限公司无水乙醇：北京瑞泽康科技有限公司异丙醇：东西仪（北京）科技有限公司1.2.2实时定量PCR试剂iScriptcDNAsynthesiskit：美国BIO-RAD公司ABIPowerSYBRGreenPCRMasterMix：美国ABI公司引物合成：上海康成生物有限公司1.2.3PCR引物序列（hsa_circRNA_100375引物序列如SEQIDNO:2所示，β-actin引物序列如SEQIDNO:3所示）表21.3主要仪器NanodropND-1000紫外分光光度计：美国Nanodrop公司高速低温离心机：美国sigma公司ABI7500型实时PCR系统：美国ABI公司1.4组织总RNA提取、质量及浓度检测100mg组织样品中加入1ml的TRIZOL试剂，电动匀浆器将其匀浆。30℃孵育5min，每1ml的TRIZOL试剂匀浆的样品中加入0.2ml的氯仿，剧烈振荡管体15s，30℃孵育2-3min。4℃12,000g离心15min。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层和上层的无色的水相。RNA全部被分配于水相中。将水相转移到新离心管中。水相与异丙醇混合以沉淀RNA，加入1mlTRIZOL试剂的同时加0.5ml异丙醇。混匀后30℃孵育10min后，4℃12本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种环状RNA，其特征在于，所述环状RNA的circbase ID为：has‑ circRNA‑ 100375，其序列如SEQ NO:1所示，是由如该序列所示的核苷酸序列收尾连接成的环状结构。
【技术特征摘要】
1.一种环状RNA，其特征在于，所述环状RNA的circbaseID为：has-circRNA-100375，其序列如SEQNO:1所示，是由如该序列所示的核苷酸序列收尾连接成的环状结构。2.一种诊断成釉细胞瘤的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测所述环状RNA表达量的试剂。3.根据权利要求2所述的一种诊断成釉细胞瘤的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括扩增所述环状RNA的引物。4.根据权利要求3所述的一种诊断成釉细胞瘤的试剂盒途，其特征在于，所述引物序列如SEQNO:2所示。5.根据权利要求2所述的一种诊断成釉细胞瘤的试剂盒...
【专利技术属性】
技术研发人员：钟鸣，刘洁，杨静，王珺婷，黄碧莹，王小玢，康媛媛，王冠楠，孙妍，
申请(专利权)人：中国医科大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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