一种东海乌参糖蛋白的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种东海乌参糖蛋白的提取方法，通过将干东海乌参进行前处理、脱脂、粗提以及提纯等步骤，从东海乌参中成功提取到了东海乌参糖蛋白。本发明专利技术中使用的是木瓜蛋白酶对东海乌参中的糖蛋白进行提取，通过将东海乌参中的普通蛋白质分解使得糖蛋白成分能够释放到水溶液中，该方法的反应条件非常温和，无需剧烈的反应，能够使得东海乌参糖蛋白能够不被破坏，从而保障了最终得到的东海乌参糖蛋白的质量。同时，酶解法具有非常高的效率，能够使得蛋白质快速分解，因此提升了最终东海乌参糖蛋白的提取效率与产率。

【技术实现步骤摘要】
一种东海乌参糖蛋白的提取方法
本专利技术涉及一种糖蛋白的提取方法，尤其是涉及一种东海乌参糖蛋白的提取方法。
技术介绍
东海乌参为棘皮门海参纲芋参目尻参科海地瓜属的动物，又名为香参，有“海番薯”的美称。东海乌参主要产于中国海南，浙江等东海沿岸，资源非常丰富，民间经常用来代替海参。它的营养非常丰富，但其作为海洋资源还没有被完全开发利用，因为加工技术等方面存在的局限性，东海乌参加工产业链的开发极为落后，所以即使渔民将其捕获，也会放归大海。东海乌参不单单含有高蛋白，多种人体所必需的氨基酸，微量元素和多种维生外，而且还有可以治愈疾病，预防疾病的药用皂苷和多糖类物质。东海乌参体壁中具有大量的酸性粘多糖与糖蛋白，即含有糖醛酸和氨基酸残基的糖蛋白，为其体壁以及肠道中的重要组成成分。东海乌参糖蛋白具有降血压，抗凝血，抗癌，抑制肿瘤，抗血管新生，提高机体免疫功能等生物活性功能，是一种非常有前景的海洋生物医药产品。当下研究进展表明，海参纲动物中的多糖有两种比较常用的提取方法，一种是碱解法，另一种是酶解法。其中碱提取法是根据蛋白多糖在糖肽键上的不稳定性的原理来提取多糖的，碱处理后易于瓦尔登转化而发生脱硫现象。所以，酶水解法是当下最为理想的提取方法，这种方法可以保证其在蛋白酶水解的前提下，不改变多糖链的结构，如此释放多糖是非常有效的。方崇波对比了碱解法及酶解法这两种方法，结果表明，通过碱水解提取海参多糖可能导致糖基的降解，从而导致多糖结构变化；而后者，由于反应的过程比较不剧烈，这种方法可以使东海乌参的糖蛋白分子结构不被破坏，从而保证了提取率。这些前辈研究为东海乌参糖蛋白的有效提取起到了一个良好的启发作用。
技术实现思路
本专利技术是为了克服现有技术中东海乌参糖蛋白提取效率低，容易导致东海乌参糖蛋白的降解，反应过程剧烈的问题，提供一种能够提高东海乌参糖蛋白提取效率，不易导致东海乌参糖蛋白的降解，反应过程温和的一种东海乌参糖蛋白的提取方法。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种东海乌参糖蛋白的提取方法，所述的提取方法包括以下步骤：(a)前处理：取干东海乌参，使用冷水浸泡12小时，然后除去东海乌参的内脏及身体表面的淤泥，置于阴凉干燥处阴干，然后置于烘箱中烘干，将烘干后的干东海乌参置于万能粉碎机之中进行粉碎，过80目筛，得到东海乌参干粉；(b)脱脂：取步骤(a)中得到的海乌参干粉，然后将其置于索氏提取器中，使用有机溶剂对其对其进行脱脂，脱脂时间为5-10小时，脱脂结束后蒸干有机溶剂得到脱脂东海乌参干粉；(c)粗提：取步骤(b)中得到的海乌参干粉5份，然后加入120-160份PBS缓冲溶液以及0.05-0.55份木瓜蛋白酶，搅拌均匀后水浴反应18-24小时，反应结束后将水浴温度升温至100℃，保持5-10分钟，然后取出静置降至室温，置于离心机中离心分离，收集离心后所得的上清液，得到东海乌参糖蛋白粗提液；(d)精提：取步骤(c)中得到的东海乌参多糖粗提液，向其中加入95％的酒精溶液，静置然后离心分离，取离心所得的沉淀，并将其溶于蒸馏水中，配制成饱和溶液，然后再加入95％的酒精溶液沉淀提纯，反复2-3次后得到东海乌参糖蛋白精提液；(e)脱色：去步骤(d)中得到的东海乌参糖蛋白精提液100份，向其中加入活性炭5份，超声辅助脱色1小时，过滤取滤液，得到无色东海乌参糖蛋白精提液；(f)分离纯化：取步骤(f)中得到的无色东海乌参糖蛋白精提液通过一级滤膜，收集一级截留液；用纯净水稀释一级截留液后再通过二级滤膜，收集二级通过液和二级截留液；用纯净水稀释二级通过液后再通过三级滤膜，收集三级截留液；将二级截留液和三级截留液合并得到东海乌参糖蛋白纯化液，然后减压浓缩至原体积的十分之一，然后离心喷雾干燥，得到东海乌参糖蛋白粉末。本专利技术中使用的是木瓜蛋白酶对东海乌参中的多糖进行提取，通过将东海乌参中的蛋白质分解使得多糖成分能够释放到水溶液中，该方法的反应条件非常温和，无需剧烈的反应，能够使得东海乌参糖蛋白能够不被破坏，从而保障了最终得到的东海乌参糖蛋白的质量。同时，酶解法具有非常高的效率，能够使得蛋白质快速分解，因此提升了最终东海乌参糖蛋白的提取效率与产率。作为优选，所述的步骤(a)中烘箱温度为48-55℃，烘干时间为8-12小时。东海乌参在提取前需要进行烘干，能够提升东海乌参糖蛋白的产率。作为优选，所述的步骤(b)中有机溶剂为丙酮、乙醇、异丙醇或乙醚中的一种。这些溶剂能够有效的将东海乌参中的脂肪成分提取出，且不会与东海乌参糖蛋白反应或者溶解，使得油脂不会影响最终东海乌参糖蛋白的品质，也不会降低东海乌参糖蛋白的产率。作为优选，所述的步骤(c)中粗提时的水浴温度为45-55℃。木瓜蛋白酶在该温度范围内具有最高的反应活性，能够使得非糖蛋白的蛋白质分解更加彻底。作为优选，所述的步骤(d)中95％的酒精的体积与东海乌参糖蛋白粗提液比为3-5∶1。在这个体积比的范围内能够有效的将东海乌参糖蛋白沉淀出来，提高提取效率。作为优选，所述的步骤(e)中超声功率为700-800W。作为优选，所述的步骤(f)中离心喷雾干燥进风口温度为180℃、出料温度为40℃。作为优选，所述的步骤(f)中一级滤膜、二级滤膜和三级滤膜的截留分子量分别为5000～10000、50000～80000和20000～40000。因此，本专利技术具有如下有益效果：(1)东海乌参糖蛋白提取效率高；(2)不易导致东海乌参糖蛋白的降解；(3)反应过程温和。附图说明图1是本专利技术的葡萄糖标准曲线。图2是本专利技术的蛋白含量标准曲线。图3是本专利技术硫酸基含量标准曲线。下面通过具体实施例对本专利技术的技术方案作以进一步描述说明。如果无特殊说明，本专利技术的实施例中说采用的原料均为本领域常用的原料，实施例中所采用的方法，均为本领域的常规方法。实施例1一种东海乌参糖蛋白的提取方法，所述的提取方法包括以下步骤：(a)前处理：取干东海乌参，使用冷水浸泡12小时，然后除去东海乌参的内脏及身体表面的淤泥，置于阴凉干燥处阴干，然后置于48℃烘箱中烘干，烘干时间为12小时，将烘干后的干东海乌参置于万能粉碎机之中进行粉碎，过80目筛，得到东海乌参干粉；(b)脱脂：取步骤(a)中得到的海乌参干粉，然后将其置于索氏提取器中，使用丙酮对其对其进行脱脂，脱脂时间为5小时，脱脂结束后丙酮得到脱脂东海乌参干粉；(c)粗提：取步骤(b)中得到的海乌参干粉5份，然后加入120份PBS缓冲溶液以及0.05份木瓜蛋白酶，搅拌均匀后45℃水浴反应18小时，反应结束后将水浴温度升温至100℃，保持5分钟，然后取出静置降至室温，置于离心机中离心分离，收集离心后所得的上清液，得到东海乌参糖蛋白粗提液；(d)精提：取步骤(c)中得到的东海乌参多糖粗提液，向其中加入95％的酒精溶液，静置然后离心分离，取离心所得的沉淀，并将其溶于蒸馏水中，配制成饱和溶液，然后再加入95％的酒精溶液沉淀提纯，反复2次后得到东海乌参糖蛋白精提液；(e)脱色：去步骤(d)中得到的东海乌参糖蛋白精提液100份，向其中加入活性炭5份，700W超声辅助脱色1小时，过滤取滤液，得到无色东海乌参糖蛋白精提液；(f)分离纯化：取步骤(f)中得到的无色东海乌参糖蛋白精提液通过截留分子量为5000～10000的一级滤膜，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种东海乌参糖蛋白的提取方法，其特征是，所述的提取方法包括以下步骤：（a）前处理：取干东海乌参，使用冷水浸泡12小时，然后除去东海乌参的内脏及身体表面的淤泥，置于阴凉干燥处阴干，然后置于烘箱中烘干，将烘干后的干东海乌参置于万能粉碎机之中进行粉碎，过80目筛，得到东海乌参干粉；（b）脱脂：取步骤（a）中得到的海乌参干粉，然后将其置于索氏提取器中，使用有机溶剂对其对其进行脱脂，脱脂时间为5‑10小时，脱脂结束后蒸干有机溶剂得到脱脂东海乌参干粉；（c）粗提：取步骤（b）中得到的海乌参干粉5份，然后加入120‑160份PBS缓冲溶液以及0.05‑0.55份木瓜蛋白酶，搅拌均匀后水浴反应18‑24小时，反应结束后将水浴温度升温至100℃，保持5‑10分钟，然后取出静置降至室温，置于离心机中离心分离，收集离心后所得的上清液，得到东海乌参糖蛋白粗提液；（d）精提：取步骤（c）中得到的东海乌参多糖粗提液，向其中加入95%的酒精溶液，静置然后离心分离，取离心所得的沉淀，并将其溶于蒸馏水中，配制成饱和溶液，然后再加入95%的酒精溶液沉淀提纯，反复2‑3次后得到东海乌参糖蛋白精提液；（e）脱色：去步骤（d）中得到的东海乌参糖蛋白精提液100份，向其中加入活性炭5份，超声辅助脱色1小时，过滤取滤液，得到无色东海乌参糖蛋白精提液；（f）分离纯化：取步骤（e）中得到的无色东海乌参糖蛋白精提液通一级滤膜，收集一级截留液；用纯净水稀释一级截留液后再通过二级滤膜，收集二级通过液和二级截留液；用纯净水稀释二级通过液后再通过三级滤膜，收集三级截留液；将二级截留液和三级截留液合并得到东海乌参糖蛋白纯化液，然后减压浓缩至原体积的十分之一，然后离心喷雾干燥，得到东海乌参糖蛋白粉末。...

【技术特征摘要】
1.一种东海乌参糖蛋白的提取方法，其特征是，所述的提取方法包括以下步骤：（a）前处理：取干东海乌参，使用冷水浸泡12小时，然后除去东海乌参的内脏及身体表面的淤泥，置于阴凉干燥处阴干，然后置于烘箱中烘干，将烘干后的干东海乌参置于万能粉碎机之中进行粉碎，过80目筛，得到东海乌参干粉；（b）脱脂：取步骤（a）中得到的海乌参干粉，然后将其置于索氏提取器中，使用有机溶剂对其对其进行脱脂，脱脂时间为5-10小时，脱脂结束后蒸干有机溶剂得到脱脂东海乌参干粉；（c）粗提：取步骤（b）中得到的海乌参干粉5份，然后加入120-160份PBS缓冲溶液以及0.05-0.55份木瓜蛋白酶，搅拌均匀后水浴反应18-24小时，反应结束后将水浴温度升温至100℃，保持5-10分钟，然后取出静置降至室温，置于离心机中离心分离，收集离心后所得的上清液，得到东海乌参糖蛋白粗提液；（d）精提：取步骤（c）中得到的东海乌参多糖粗提液，向其中加入95%的酒精溶液，静置然后离心分离，取离心所得的沉淀，并将其溶于蒸馏水中，配制成饱和溶液，然后再加入95%的酒精溶液沉淀提纯，反复2-3次后得到东海乌参糖蛋白精提液；（e）脱色：去步骤（d）中得到的东海乌参糖蛋白精提液100份，向其中加入活性炭5份，超声辅助脱色1小时，过滤取滤液，得到无色东海乌参糖蛋白精提液；（f）分离纯化：取步骤（e）中得到的无色东海乌参糖蛋白精提液通一级滤膜，收集一级...

【专利技术属性】
技术研发人员：闻正顺，杜明，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33