一种黄金枸骨种苗的组织培养快速繁殖方法技术

本发明专利技术提供一种黄金枸骨种苗的组织培养快速繁殖方法，其以2～3年生黄金枸骨健康植株的新稍为外植体，采用不定芽诱导途径，通过茎段长不定芽达到快速繁殖目的，包括以下步骤：外植体的选择和消毒、不定芽的诱导培养、茎段和茎尖增殖培养、生根培养、及试管苗移栽。采用本发明专利技术方法仅需150至180天就能获得黄金枸骨种苗；繁殖过程中不仅外植体污染率低、诱导率及增殖率高，而且增殖后无需进行壮苗培养即可进行后续的生根培养，简化了培养环节、降低了培养成本，进而提高了整个种苗培养的效率；另外，本发明专利技术培养的试管苗健壮、根系发达，且通过驯化炼苗，其环境适应能力较强，从而提高了种苗移栽成活率。

A tissue culture and rapid propagation method of golden Ilex seeds

The invention provides a rapid propagation method for the tissue culture of the golden lentile seedlings. The method uses a new 2~3 year old explant of the healthy plants of the golden sore bone, using the adventitious bud induction approach, through the long adventitious buds of the stem segment, which includes the following steps: the selection and disinfection of explants, the induction and cultivation of adventitious buds, Stem and shoot tip proliferation culture, rooting culture, and Plantlet Transplanting. It takes only 150 to 180 days to obtain the seeds of the golden lash. Not only the contamination rate of the explants is low, the induction rate and the proliferation rate are high, but also the following cultivation can be carried out without the cultivation of the strong seedlings. The cultivation link is simplified, the cultivation cost is reduced, and the whole seedling culture is improved. In addition, the test tube Miao Jianzhuang and the root system developed by the invention are developed, and the environment adaptable ability is stronger by domesticating and refining the seedlings, thus improving the survival rate of seedling transplanting.

【技术实现步骤摘要】
一种黄金枸骨种苗的组织培养快速繁殖方法
本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及一种黄金枸骨种苗的组织培养快速繁殖方法。
技术介绍
黄金枸骨(Ilexattenuata'SunnyFoster')又名狭叶冬青，狭冠冬青，是宏达冬青(Ilexcassine)与美国冬青(Ilexopaca)的天然杂交种。黄金枸骨为国外最新引进的小乔木品种，具有无刺，分枝力强，叶色金黄，果色红艳等特点，光照充足时一直保持金黄色的观赏效果，具有较高的观赏价值，可作为道路、公园、庭院的色块、短篱、孤植绿化等应用，国内种苗市场需求不断增加，对优质种苗的需求迫切。目前黄金枸骨种苗生产主要靠种子播种和扦插繁殖，种子播种出苗率低，扦插繁殖不仅需要大量母株，且存在繁殖率低、生根困难等问题，难以满足市场的需求，种苗供需矛盾十分突出。利用植物组织培养技术可实现黄金枸骨种苗的快速繁殖，从而解决优质种苗供不应求的现状。2008年周喜军等曾报道枸骨(IlexcornutaLindl.ExPaxt.)以种子为外植体，先诱导无菌苗，然后切去顶芽后诱导丛生芽，经丛生芽增殖、生根等环节建立了育苗技术[周喜军，罗玉兰，张冬梅，等.枸骨的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学通讯，2008，44(5)：949]；2011年简大为等报道过以无刺枸骨(IlexcornutaLindl.ExPaxt.varfortunei(Lindl)S.Y.Hu.)的新稍茎段为外植体，先诱导出芽，后经芽增殖、瓶内生根、试管苗扦插生根等环节建立了快速繁殖技术[简大卫，范淑芳，孙爱红，等.无刺枸骨快速繁殖技术研究[J].湖北林业科技，2011，(169)：30-32]；范淑芳分别在2014年、2015年报道过华中枸骨(Ilexcentrochinensis)顶芽和侧芽不同消毒方式对组织培养的影响，生长素和赤霉素对其试管内生根的影响，优化了华中枸骨组织培养消毒方法，筛选出试管内生根较好的生长调节剂配方[范淑芳.不同消毒方式对华中枸骨组织培养的影响[J].安徽农业科学，2014，42(16)：5007-5008；ShufangFAN.TechnologyResearchofPlantletsRootingandTransplantingonTissueCultureofIlexcentrochinensis.[J].AgriculturalScience&Technology，2015，16(1)：1-2，30]。以上文献中提供的枸骨育苗技术以种子为外植体，但通常存在着如下缺陷：繁殖的种苗种性一致性无法保证，同时需经过种子诱导无菌苗，诱导丛生芽，经丛生芽增殖、生根等过程，育苗过程较繁琐；无刺枸骨、华中枸骨快速繁殖技术外植体污染率较高，且试管苗在瓶内生根后，还需瓶外扦插生根，育苗过程不仅繁琐，且生根率低，繁殖效率较低；而且有关黄金枸骨种苗组织培养繁殖技术还未见报道。由鉴于此，研究建立得到一种操作过程便捷、培养效率与移栽成活率均较为理想的黄金枸骨种苗的组织培养快速繁殖方法，是从业人员迫切希望地。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种黄金枸骨种苗的组织培养快速繁殖方法。本专利技术是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种黄金枸骨种苗的组织培养快速繁殖方法，该方法包括如下具体操作步骤：(1)外植体的制备与消毒：选择2～3年生黄金枸骨健康植株作为母株即外植体对象，将植株1～2年生枝条从中部剪去顶端部分，当新稍萌发至1.0～2.0cm时，进行套袋隔离；待新稍长至8.0～10.0cm时剪下，用自来水冲洗干净，之后在超净工作台上去除叶片后用75％酒精浸泡20～30s，并用无菌水冲洗1～2次；接着转入添加了1～2滴吐温80的1g/LHgCl2水溶液中振荡消毒5～6min，然后用无菌水浸泡清洗4～5次，取出后用无菌吸水纸吸干水分，切割成带1～2个叶基的茎段和茎尖，备用；(2)不定芽的诱导培养：取步骤(1)切割所得茎段和茎尖，并接种到不定芽诱导培养基中进行不定芽诱导培养，培养周期40～50d后诱导获得不定芽；(3)茎段和茎尖的增殖培养：将步骤(2)诱导获得的不定芽切割成带2～3片叶的茎段和茎尖，然后接种到增殖培养基中进行增殖培养，培养周期40～50d，增殖系数达4.5～5.0；接着将增殖培养长出的不定芽切割成带2～3片叶的茎段和茎尖，并接种到新的增殖培养基进行继代增殖培养，继代增殖总次数为8～10次，获得健壮的不定芽；(4)生根培养：将步骤(3)获得的健壮不定芽切割成单芽，并接种于生根培养基上进行培养，培养周期50～60d即获得株高6.0～8.0cm、主根数1～4条的完整植株，生根率达85.0～90.0％；(5)试管苗移栽：移栽前，将步骤(4)获得的瓶苗进行炼苗至适应栽培环境，炼苗完成后用自来水洗苗，洗净根部粘连的培养基，之后将苗置入1.0～2.0g/L杀菌剂水溶液中浸泡消毒3～5min，然后种植于栽培基质中，用添加有生长调节剂的水溶液定根浇水，于22～28℃、相对湿度为80～90％的温室中保湿栽培管理即可；其中，不定芽诱导培养基的组分为：NH4NO31237.5mg/L、KNO31425mg/L、MgSO4·7H2O277.5mg/L、KH2PO4127.5mg/L、CaCl2·2H2O330mg/L、KI0.83mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4·H2O22.3mg/L、ZnSO4·7H2O8.6mg/L、Na2MoO2·2H2O0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/LCoCl2·6H2O0.025mg/L、FeSO4·7H2O27.8mg/L、Na2·EDTA37.3mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、白糖25～30g/L、凝固剂6.0g/L、6-苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L、萘乙酸0.1～0.2mg/L；增殖培养基的组分为：NH4NO31650mg/L、KNO31900mg/L、MgSO4·7H2O370mg/L、KH2PO4170mg/L、CaCl2·2H2O440mg/L、KI0.83mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4·H2O22.3mg/L、ZnSO4·7H2O8.6mg/L、Na2MoO2·2H2O0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/LCoCl2·6H2O0.025mg/L、FeSO4·7H2O27.8mg/L、Na2·EDTA37.3mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、白糖30g/L、凝固剂6.0g/L、6-苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L、及萘乙酸0.05～0.15mg/L；生根培养基的成分为：NH4NO31237.5mg/L、KNO31425mg/L、MgSO4·7H2O277.5mg/L、KH2PO4127.5mg/L、CaCl2·2H2O330mg/L、KI0.83mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4·H2O22.3mg/L、ZnSO4·7H2O8.6mg/L、Na2MoO2·2H2O0.25mg/L、CuS本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种黄金枸骨种苗的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括如下具体操作步骤：(1)外植体的制备与消毒：选择2～3年生黄金枸骨健康植株作为母株即外植体对象，将植株1～2年生枝条从中部剪去顶端部分，当新稍萌发至1.0～2.0cm时，进行套袋隔离；待新稍长至8.0～10.0cm时剪下，用自来水冲洗干净，之后在超净工作台上去除叶片后用75％酒精浸泡20～30s，并用无菌水冲洗1～2次；接着转入添加了1～2滴吐温80的1g/L HgCl2水溶液中振荡消毒5～6min，然后用无菌水浸泡清洗4～5次，取出后用无菌吸水纸吸干水分，切割成带1～2个叶基的茎段和茎尖，备用；(2)不定芽的诱导培养：取步骤(1)切割所得茎段和茎尖，并接种到不定芽诱导培养基中进行不定芽诱导培养，培养周期40～50d后诱导获得不定芽；(3)茎段和茎尖的增殖培养：将步骤(2)诱导获得的不定芽切割成带2～3片叶的茎段和茎尖，然后接种到增殖培养基中进行增殖培养，培养周期40～50d，增殖系数达4.5～5.0；接着将增殖培养长出的不定芽切割成带2～3片叶的茎段和茎尖，并接种到新的增殖培养基进行继代增殖培养，继代增殖总次数为8～10次，获得健壮的不定芽；(4)生根培养：将步骤(3)获得的健壮不定芽切割成单芽，并接种于生根培养基上进行培养，培养周期50～60d即获得株高6.0～8.0cm、主根数1～4条的完整植株，生根率达85.0～90.0％；(5)试管苗移栽：移栽前，将步骤(4)获得的瓶苗进行炼苗至适应栽培环境，炼苗完成后用自来水洗苗，洗净根部粘连的培养基，之后将苗置入1.0～2.0g/L杀菌剂水溶液中浸泡消毒3～5min，然后种植于栽培基质中，用添加有生长调节剂的水溶液定根浇水，于22～28℃、相对湿度为80～90％的温室中保湿栽培管理即可；其中，不定芽诱导培养基的组分为：NH4NO3 1237.5mg/L、KNO3 1425mg/L、MgSO4·7H2O 277.5mg/L、KH2PO4 127.5mg/L、CaCl2·2H2O 330mg/L、KI 0.83mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Na2MoO2·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L CoCl2·6H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2·EDTA 37.3mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、白糖25～30g/L、凝固剂6.0g/L、6‑苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L、萘乙酸0.1～0.2mg/L；增殖培养基的组分为：NH4NO3 1650mg/L、KNO3 1900mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、KI 0.83mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Na2MoO2·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L CoCl2·6H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2·EDTA 37.3mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、白糖30g/L、凝固剂6.0g/L、6‑苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L、及萘乙酸0.05～0.15mg/L；生根培养基的成分为：NH4NO3 1237.5mg/L、KNO3 1425mg/L、MgSO4·7H2O 277.5mg/L、KH2PO4 127.5mg/L、CaCl2·2H2O 330mg/L、KI 0.83mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Na2MoO2·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L CoCl2·6H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2·EDTA 37.3mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、白糖25～30g/L、凝固剂6.0g/L、6‑苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L、吲哚丁酸0.1～0.3mg/L、萘乙酸0.3～0.5mg/L、及活性炭1.0g/L。...

【技术特征摘要】
1.一种黄金枸骨种苗的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括如下具体操作步骤：(1)外植体的制备与消毒：选择2～3年生黄金枸骨健康植株作为母株即外植体对象，将植株1～2年生枝条从中部剪去顶端部分，当新稍萌发至1.0～2.0cm时，进行套袋隔离；待新稍长至8.0～10.0cm时剪下，用自来水冲洗干净，之后在超净工作台上去除叶片后用75％酒精浸泡20～30s，并用无菌水冲洗1～2次；接着转入添加了1～2滴吐温80的1g/LHgCl2水溶液中振荡消毒5～6min，然后用无菌水浸泡清洗4～5次，取出后用无菌吸水纸吸干水分，切割成带1～2个叶基的茎段和茎尖，备用；(2)不定芽的诱导培养：取步骤(1)切割所得茎段和茎尖，并接种到不定芽诱导培养基中进行不定芽诱导培养，培养周期40～50d后诱导获得不定芽；(3)茎段和茎尖的增殖培养：将步骤(2)诱导获得的不定芽切割成带2～3片叶的茎段和茎尖，然后接种到增殖培养基中进行增殖培养，培养周期40～50d，增殖系数达4.5～5.0；接着将增殖培养长出的不定芽切割成带2～3片叶的茎段和茎尖，并接种到新的增殖培养基进行继代增殖培养，继代增殖总次数为8～10次，获得健壮的不定芽；(4)生根培养：将步骤(3)获得的健壮不定芽切割成单芽，并接种于生根培养基上进行培养，培养周期50～60d即获得株高6.0～8.0cm、主根数1～4条的完整植株，生根率达85.0～90.0％；(5)试管苗移栽：移栽前，将步骤(4)获得的瓶苗进行炼苗至适应栽培环境，炼苗完成后用自来水洗苗，洗净根部粘连的培养基，之后将苗置入1.0～2.0g/L杀菌剂水溶液中浸泡消毒3～5min，然后种植于栽培基质中，用添加有生长调节剂的水溶液定根浇水，于22～28℃、相对湿度为80～90％的温室中保湿栽培管理即可；其中，不定芽诱导培养基的组分为：NH4NO31237.5mg/L、KNO31425mg/L、MgSO4·7H2O277.5mg/L、KH2PO4127.5mg/L、CaCl2·2H2O330mg/L、KI0.83mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4·H2O22.3mg/L、ZnSO4·7H2O8.6mg/L、Na2MoO2·2H2O0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/LCoCl2·6H2O0.025mg/L、FeSO4·7H2O27.8mg/L、Na2·EDTA37.3mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、白糖25～30g/L、凝固剂6.0g/L、6-苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L、萘乙酸0.1～0.2mg/L；增殖培养基的组分为：NH4NO31650mg/L、KNO31900mg/L、MgSO4·7H2O370mg/L、KH2PO4170mg/L、CaCl2·2H2O440mg/L、KI0.83mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4·H2O22.3mg/L、ZnSO4·7H2O8.6mg/L、Na2MoO2·2H2O0.25...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗远华，钟淮钦，陈裕德，林兵，林榕燕，
申请(专利权)人：福建省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35