一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒制造技术

目前，传统的重氮法总胆红素检测试剂盒的稳定性存在一定的缺陷，主要表现为，在不偏移检测结果5%左右的条件下，一般只能控制在5天左右，甚至只能控制在2‑3天。本发明专利技术一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒通过糅合了D‑吡喃葡萄糖苷，D‑吡喃葡萄糖，羟基乙叉二磷酸和葡聚糖4种不同的稳定剂，并形成一个囊状结构，将不稳定物质进行包被，待反应时，通过外界有效物质刺激，进行释放，从而有效增强试剂的稳定性，具有更高的市场推广应用价值。

A stable diazo method for total bilirubin detection kit

At present, there are some defects in the stability of the traditional diazonium test kit for total bilirubin detection. The main manifestation is that under the condition of about 5% of the non offset detection results, it can only be controlled for about 5 days, or even only 2 for 3 days. A stable diazonium total bilirubin detection kit is composed of 4 different stabilizers, such as D glucoside, hydroxy ethyl two phosphoric acid and dextran, and a saclike structure, which will be packed with unstable substances and be stimulated by external effective substances when the reaction is to be reacted. Release, thus effectively enhancing the stability of the reagent, has a higher market value.

【技术实现步骤摘要】
一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒
本专利技术涉及临床体外检测试剂
，特别涉及一种检测血清或血浆中的总胆红素含量的检测试剂盒。
技术介绍
胆红素包含游离胆红素和总胆红素两种：总胆红素又可称为结合胆红素，即血液中游离胆红素运输到肝脏后，迅速被肝细胞摄取，胆红素在肝细胞胞浆中主要与Ｙ蛋白和Ｚ蛋白结合（以Ｙ蛋白为主）。然后在内质网中结合葡萄糖醛酸生成水溶性结合胆红素；游离胆红素亦可以成为未结合胆红素，即没有与葡萄糖醛酸结合，未结合的胆红素主要是血红素在单核吞噬系统细胞微粒体血红素加氧酶的作用催化下，形成线性四吡咯的水溶性胆绿素，在细胞液中活性较强的胆绿素还原酶作用催化下，胆绿素进一步还原成胆红素。目前对于总胆红素的检测诊断方法有很多种，主要包括重氮法、高效液相色谱法（HPLC）、氧化酶法、钒酸盐法等。重氮法是最早使用的一种总胆红素检测方法，具有成本低、应用广的特点，但传统的重氮法受多种因素的影响，其结果差异性较大；高效液相色谱法（HPLC）对仪器和设备要求较高，因此不宜作为常规方法推广应用；氧化酶法灵敏度高，抗干扰能力不强，主要是由于酶对温度要求极高，活性只能在一定温度范围内才能发挥最佳作用，而且该种方法试剂价格极高，难于推广；钒酸盐法是上世纪90年代由日本学者提出的一种新型的氧化方法，但是该方法对仪器损伤较大，钒酸盐的氧化性高于高锰酸钾，不利于保存。鉴于以上问题，本专利技术提供了一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒。所述试剂盒中的试剂是由多种稳定剂和保护剂按照不同比例糅合而成，有效改善试剂在运输及储存过程中因环境因素引起的不稳定性，从而为重氮法检测胆红素提供更稳定的试剂盒。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒，该专利技术试剂盒重点解决了重氮法在检测、储存和运输过程中存在的不稳定性和线性问题。基本原理总胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐结合后形成重氮化合物，该化合物在酸性条件下呈现出红色，引起545nm处的吸光光度值的变化，重氮化合物的含量可以通过吸光光度变化来计算，进而计算出血清中总胆红素的含量。应用本专利技术试剂盒测定血清中总胆红素含量方法如下：检测波长为545nm，样本量：试剂R1：试剂R2=10ul：200ul：50ul。本专利技术是一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒，所述试剂盒是包括试剂R1和试剂R2，其成分和浓度如下：试剂R1为：乙二胺四乙酸二钠0.1%-0.5%氨基苯磺酸50mmol/L-100mmol/L氯化钠5g/L-9g/LD-吡喃葡萄糖苷0.05%-0.1%D-吡喃葡萄糖0.075%-0.2%葡聚糖0.3%-0.5%TritonX-4050.125%-0.4%柠檬酸-甘氨酸缓冲液0.1mol/L试剂R2为：2,4-二氯苯胺重氮盐50mmol/L-100mmol/L乙二胺四乙酸0.1%-1%盐酸0.1mol/L-0.4mol/L甘氨酸-盐酸缓冲液0.1mol/LD-吡喃葡萄糖苷0.05%-0.1%D-吡喃葡萄糖0.075%-0.2%葡聚糖0.3%-0.5%羟基乙叉二膦酸10mmol/L-20mmol/L。本专利技术试剂盒一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒包括试剂R1和R2，其中所述试剂R1中各物质选择依据如下：乙二胺四乙酸二钠是一种离子螯合剂，它能有效的螯合金属离子，防止一些杂质离子对检测反应引起不必要的干扰；氨基苯磺酸作为颜色产生物，用于制作偶氮染料；氯化钠用于模拟人体内血液环境，保证反应的进行是在体外相同条件下进行的，从而保证检测的真实性和可靠性；D-吡喃葡萄糖苷、D-吡喃葡萄糖、葡聚糖作为稳定剂物质；TritonX-405作为HLB高达15以上的表面活性剂，其作用大大改善了试剂对样本的处理性能，有效的保证试剂的检测准确性；柠檬酸-甘氨酸缓冲液主要是缓冲作用，保证反应时外环境的稳定，致使检测结果不会受到波动和影响。所述试剂R2中各物质选择依据如下：2,4-二氯苯胺重氮盐作为反应底物，与总胆红素结合形成重氮盐，在偶氮染料存在时，呈现红色，引起545nm处吸光光度值的变化，通过吸光光度值的变化间接计算总胆红素的含量；乙二胺四乙酸二钠是一种离子螯合剂，它能有效的螯合金属离子，防止一些杂质离子对检测反应引起不必要的干扰；盐酸，提供一种强酸性环境；甘氨酸-盐酸缓冲液主要是缓冲作用，保证反应时外环境的稳定，致使检测结果不会受到波动和影响；D-吡喃葡萄糖苷、D-吡喃葡萄糖、葡聚糖和羟基乙叉二膦酸作为稳定剂物质。本专利技术可以应用到迪瑞、迈瑞、日立、东芝等系列的全自动化分析仪中进行自动化检测。应用本专利技术进行体外样本诊断检测时，操作方法如下，设置波长为545nm，终点法，样本量：试剂R1：试剂R2=10ul：200ul：50ul。样本针吸取样本后于试剂R1中进行孵育，以保证反应环境外界条件的稳定，然后读取吸光光度值为ΔA1，进而加入试剂R2，样本中的总胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐结合形成重氮盐，重氮盐与氨基苯磺酸产生颜色反应显示红色，引起波长545nm处吸光光度值的变化，37℃反应5-10分钟左右读取吸光光度值为ΔA2，通过计算吸光光度值的变化，进而计算出总胆红素的含量。计算公式如下：总胆红素含量=标准液浓度*吸光光度值（ΔA2-ΔA1）。相对于目前市场流通的重氮法总胆红素检测试剂盒，本专利技术试剂盒稳定性较好，且精密度高，重复性好，抗干扰能力强，适用于全自动生化分析仪，临床使用价值较大。附图说明图1是本专利技术试剂与对照试剂稳定性检测结果。图2是本专利技术试剂盒与对照试剂盒抗干扰实验结果。图3是本专利技术试剂盒与对照试剂盒临床样本检测结果。图4是本专利技术试剂盒与对照试剂盒临床相关性图谱。具体实施方式以下结合图，实施例对本专利技术进行说明。实施例1本专利技术在具体实施中，所述试剂R1为：乙二胺四乙酸二钠0.1%-0.5%氨基苯磺酸50mmol/L-100mmol/L氯化钠5g/L-9g/LD-吡喃葡萄糖苷0.05%D-吡喃葡萄糖0.075%葡聚糖0.3%TritonX-4050.125%-0.4%柠檬酸-甘氨酸缓冲液0.1mol/L试剂R2为：2,4-二氯苯胺重氮盐50mmol/L-100mmol/L乙二胺四乙酸0.1%-1%盐酸0.1mol/L-0.4mol/L甘氨酸-盐酸缓冲液0.1mol/LD-吡喃葡萄糖苷0.05%D-吡喃葡萄糖0.075%葡聚糖0.3%羟基乙叉二膦酸20mmol/L。实施例2试剂R1为：乙二胺四乙酸二钠0.1%-0.5%氨基苯磺酸50mmol/L-100mmol/L氯化钠5g/L-9g/LD-吡喃葡萄糖苷0.075%D-吡喃葡萄糖0.125%葡聚糖0.4%TritonX-4050.125%-0.4%柠檬酸-甘氨酸缓冲液0.1mol/L试剂R2为：2,4-二氯苯胺重氮盐50mmol/L-100mmol/L乙二胺四乙酸0.1%-1%盐酸0.1mol/L-0.4mol/L甘氨酸-盐酸缓冲液0.1mol/LD-吡喃葡萄糖苷0.05%D-吡喃葡萄糖0.075%葡聚糖0.3%羟基乙叉二膦酸15mmol/L。实施例3试剂R1为：乙二胺四乙酸二钠0.1%-0.5%氨基苯磺酸50mmol/L-100mmol/L氯化钠5g/L-9g/LD-吡喃葡萄糖苷0.1%D-吡喃葡萄糖0.2%葡聚糖0.5%Triton本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒，其特征在于：本专利技术是一种液体型双试剂检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和R2；所述试剂R1包括：乙二胺四乙酸二钠          0.1%‑0.5%氨基苯磺酸                50mmol/L‑100mmol/L氯化钠                    5g/L‑9g/LD‑吡喃葡萄糖苷            0.05%‑0.1%D‑吡喃葡萄糖              0.075%‑0.2%葡聚糖                    0.3‑0.5%Triton X‑405              0.125%‑0.4%柠檬酸‑甘氨酸缓冲液       0.1mol/L所述试剂R2包括：2,4‑二氯苯胺重氮盐        50mmol/L‑100mmol/L乙二胺四乙酸              0.1%‑1%盐酸                      0.1mol/L‑0.4mol/L甘氨酸‑盐酸缓冲液         0.1mol/LD‑吡喃葡萄糖苷            0.05%‑0.1%D‑吡喃葡萄糖              0.075%‑0.2%葡聚糖                    0.3%‑0.5%羟基乙叉二膦酸            10mmol/L‑20mmol/L。...

【技术特征摘要】
1.稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒，其特征在于：本发明是一种液体型双试剂检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和R2；所述试剂R1包括：乙二胺四乙酸二钠0.1%-0.5%氨基苯磺酸50mmol/L-100mmol/L氯化钠5g/L-9g/LD-吡喃葡萄糖苷0.05%-0.1%D-吡喃葡萄糖0.075%-0.2%葡聚糖0.3-0.5%TritonX-4050.125%-0.4%柠檬酸-甘氨酸缓冲液0.1mol/L所述试剂R2包括：2,4-二氯苯胺重氮盐50mmol/L-100mmol...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建营，温肖燕，胡晓飞，
申请(专利权)人：济南桥欣生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37