一种从北葶苈子中提取的北葶新碱C和北葶新碱D及其制备方法与应用技术

本发明专利技术从北葶苈子中提取的北葶新碱C和北葶新碱D及其制备方法与应用，实现北葶苈子活性成分在制备治疗高脂多糖造成心肌细胞损伤药物中的应用问题。炒北葶苈子水提，浓缩，醇沉，上清液上Dianion HP‑20柱，用水、乙醇洗脱，40%乙醇洗脱液浓缩干燥，过Toyopearl HW‑40柱色谱，用水、10%甲醇洗脱，洗脱液分别为组分B1、组分B2；组分B1醇沉，上清液干燥，过Sephadex LH‑20柱色谱，70%甲醇洗脱，收集流份5ml/管，合并第5‑33管，过ODS柱色谱，用水、甲醇洗脱，30%甲醇洗脱液半制备HPLC分离，收集tR=36.5～37.5min的流份，得北葶新碱D；组分B2过ODS柱色谱，用水、甲醇洗脱，20%甲醇洗脱组分过Sephadex LH‑20柱色谱，用70%甲醇洗脱，收集流份5ml/管，合并第36‑46管，用半制备HPLC分离，收集tR=39.0～40.2min的流份，得北葶新碱C。

A new alkaloid C and D from North Indian SLE seeds and their preparation and Application

The present invention has been used in the preparation and application of the North scape new alkali C and the North scape new base D extracted from the North Sophie seed, and the application of the preparation method to realize the application of the active ingredient of the North scape in the preparation of the drugs for the treatment of high lipopolysaccharide to cause myocardial cell damage. Water extraction, concentration, alcohol precipitation, Dianion HP 20 columns on the supernatant, water and ethanol eluent, 40% ethanol eluent concentrated and dried, Toyopearl HW 40 column chromatography, water, 10% methanol, B1 and B2, respectively, B1 alcohols, dry liquid, and LH 20 column chromatography 70% methanol elution, a collection of 5ml/ tubes, a combination of fifth tubes of 33 tubes, over ODS column chromatography, water, methanol elution, and 30% methanol eluent half prepared by HPLC separation, collecting tR=36.5 to 37.5min flow, and obtaining the D of North scape, B2 over ODS column chromatography, water and methanol elution, and 20% methanol elution components over Sephadex LH 20 column color. The spectra were separated by 70% methanol, and the flow of 5ml/ tube was collected, and thirty-sixth to 46 tubes were combined. The semi HPLC was separated and the flow of tR=39.0 to 40.2min was collected.

【技术实现步骤摘要】
一种从北葶苈子中提取的北葶新碱C和北葶新碱D及其制备方法与应用
本发涉及医药，特别是一种从北葶苈子中提取的北葶新碱C和北葶新碱D及其制备方法与应用。
技术介绍
葶苈子为常用中药材，始载于《神农本草经》，列为草部下品，该药味辛、苦，性大寒，归肺与膀胱经，具有宣泄平喘、行水消肿的功效。2015版《中国药典》收录的“葶苈子”有南北之分，其中十字花科植物独行菜LepidiumapetalumWilld.的干燥成熟种子习称“北葶苈子”，而播娘蒿DescurainiaSophia(L.)WebbexPrantl.的干燥成熟种子习称“南葶苈子”。随着对北葶苈子的深入研究，发现北葶苈子具有很好的药用价值，含有丰富的多种具有药用效果的活性成分，但如何从北葶苈子中制备出不同活性成分，并用于制备治疗不同疾病的药物，是业内一直希望解决的技术问题。
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种从北葶苈子中提取的北葶新碱C和北葶新碱D及其制备方法与应用，可有效解决北葶苈子活性成分的制备，实现在制备治疗高脂多糖(LPS)造成心肌细胞(H9c2)损伤药物中的应用问题。本专利技术解决的技术方案是，一种从北葶苈子中提取北葶新碱C和北葶新碱D，其分子结构式分别为：其制备方法是，取北葶苈子在240℃下炒制5.5min，每次加北葶苈子10倍重量的水煎煮提取三次，每次1.5h，合次三次提取液，减压浓缩至相当于含生药量2g/mL的浸膏状，室温下，浓缩的浸膏用浸膏体积5倍、体积浓度为80％的乙醇醇沉，静置1h，收集上清液，再加入浸膏体积5倍、体积浓度为80％的乙醇醇沉，如此反复操作4次，将所得上清液浓缩至无醇味，上DianionHP-20柱，依次用水、体积浓度20％、40％乙醇梯度洗脱，流速6mL/min，每个部位的流动相用量为柱体积的10倍，收集体积浓度40％乙醇洗脱液，浓缩干燥，得组分A；组分A用水离散溶解，20℃下6000rpm离心15min，然后用滤纸过滤，滤液在45℃下减压浓缩至原体积的28-29分之一，通过ToyopearlHW-40柱色谱，依次用水、体积浓度10％甲醇洗脱，每个洗脱部位用量为柱体积的4倍，流速6ml/min，分别收集水、10％甲醇洗脱组份，标为组分B1、组分B2；组分B1用体积浓度为80％的乙醇醇沉，组分B1与乙醇的体积比为1:5，静置1h，收集上清液，反复操作4次，上清液在20℃下6000rpm离心15min，过滤，滤液在45℃下，减压干燥，标为组分C1，组分C1通过SephadexLH-20柱色谱，用体积浓度70％甲醇等度洗脱，用试管接取流份，每管5ml，流速为1ml/min，采用茴香醛-浓硫酸喷雾检识洗脱终点，合并第5-33管的流份，标为组分D1，组分D1用水溶解，通过ODS柱色谱，依次用水、体积浓度10％、20％、30％甲醇梯度洗脱，流速3ml/min，每个梯度流动相用量为2个柱体积，合并30％甲醇洗脱组分标为组分E4；组分E4用半制备HPLC分离，上规格型号为：250×10mm,粒径5μm,孔径12nm的YMC-PackODS-AA色谱柱，流动相为乙腈︰三氟乙酸水溶液＝14︰86，所述的三氟乙酸水溶液为每1000mL水中加入300μl三氟乙酸混匀制成(以下同)，流速3mL/min，收集保留时间tR＝36.5～37.5min的流份，浓缩干燥，得到化合物北葶新碱D；组分B2用水溶解，通过ODS柱色谱，依次用水、体积浓度10％、20％甲醇梯度洗脱，流速3ml/min，每个梯度流动相用量为2个柱体积，合并20％甲醇洗脱组分标为组分F3；组分F3通过SephadexLH-20柱色谱，用体积浓度70％甲醇洗脱，流速为1ml/min，用试管接取流份，每管5ml，采用茴香醛-浓硫酸喷雾检识洗脱终点，合并第36-46管的流份，标为组分G3；组分G3用半制备HPLC分离，上规格型号为：250×10mm,粒径5μm,孔径12nm的YMC-PackODS-AA色谱柱，流动相为乙腈：流动相为乙腈︰三氟乙酸水溶液＝14︰86，流速2.5ml/min，收集保留时间tR＝39.0～40.2min的流份，浓缩干燥，得到化合物北葶新碱C。从北葶苈子的水提物中从中分离并鉴定了两个新的尿苷类衍生物，即：北葶新碱C和北葶新碱D，具有提高脂多糖(LPS)造成心肌细胞(H9c2)损伤的细胞活力，有潜在的心肌保护作用，可有效用于制备治疗脂多糖(LPS)造成心肌细胞(H9c2)损伤的药物。本专利技术原料丰富，制备方法易操作，科学合理，可有效解决从北葶苈子中提取北葶新碱C和北葶新碱D，并实现北葶新碱C和北葶新碱D在制备脂多糖(LPS)造成心肌细胞(H9c2)损伤的细胞活力药物的应用，开拓了北葶苈子的药用价值和商业价值，经济和社会效益显著。附图说明图1为本专利技术的分子结构式图。图2为本专利技术化合物北葶新碱C的1H-NMR谱(inCD3OD)图。图3为本专利技术化合物北葶新碱C的1H-1HCOSY谱图。图4为本专利技术化合物北葶新碱C的HSQC谱图。图5为本专利技术化合物北葶新碱C的HMBC谱图。图6为本专利技术化合物北葶新碱C的NOESY谱图。图7为本专利技术化合物北葶新碱D的1H-NMR谱(inCD3OD)图。图8为本专利技术化合物北葶新碱D的1H-1HCOSY谱图。图9为本专利技术化合物北葶新碱D的HSQC谱图。图10为本专利技术化合物北葶新碱D的HMBC谱图。图11为本专利技术化合物北葶新碱D的NOESY谱图。具体实施方式以下结合具体情况对本专利技术的具体实施方式作详细说明。本专利技术在具体实施中，一种从北葶苈子中提取北葶新碱C和北葶新碱D，其分子结构式分别为：其制备方法是，取北葶苈子10kg用清炒法在240℃下炒制5.5min，每次加北葶苈子10倍重量的水煎煮提取三次，每次1.5h，合次三次提取液，减压浓缩成5000mL的浸膏状，室温下，浓缩的浸膏用体积浓度为80％的乙醇25L醇沉，静置1h，收集上清液，再加入体积浓度为80％的乙醇25L醇沉，如此反复操作4次，将所得上清液浓缩至无醇味，上DianionHP-20柱，依次用水、体积浓度20％、40％乙醇梯度洗脱，流速6mL/min，每个部位的流动相用量为柱体积的10倍，收集体积浓度40％乙醇洗脱液，浓缩干燥，得组分A；组分A用水离散溶解，20℃下6000rpm离心15min，然后用滤纸过滤，滤液在45℃下减压浓缩至原体积的28-29分之一，通过ToyopearlHW-40柱色谱，依次用水、体积浓度10％甲醇洗脱，每个洗脱部位用量为柱体积的4倍，流速6ml/min，分别收集水、10％甲醇洗脱组份，标为组分B1、组分B2；组分B1用体积浓度为80％的乙醇醇沉，组分B1与乙醇的体积比为1:5，静置1h，收集上清液，反复操作4次，上清液在20℃下6000rpm离心15min，过滤，滤液在45℃下，减压干燥，标为组分C1，组分C1通过SephadexLH-20柱色谱，用体积浓度70％甲醇等度洗脱，用试管接取流份，每管5ml，流速为1ml/min，采用茴香醛-浓硫酸喷雾检识洗脱终点，合并第5-33管的流份，标为组分D1，组分D1用水溶解，通过ODS柱色谱，依次用水、体积浓度10％、20％、30％甲醇梯度洗脱，流速3ml/min，每个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从北葶苈子中提取北葶新碱C和北葶新碱D，其特征在于，分子结构式分别为：

【技术特征摘要】
1.一种从北葶苈子中提取北葶新碱C和北葶新碱D，其特征在于，分子结构式分别为：2.权利要求1所述的从北葶苈子中提取北葶新碱C和北葶新碱D的制备方法，其特征在于，取北葶苈子在240℃下炒制5.5min，每次加北葶苈子10倍重量的水煎煮提取三次，每次1.5h，合次三次提取液，减压浓缩至相当于含生药量2g/mL的浸膏状，室温下，浓缩的浸膏用浸膏体积5倍、体积浓度为80％的乙醇醇沉，静置1h，收集上清液，再加入浸膏体积5倍、体积浓度为80％的乙醇醇沉，如此反复操作4次，将所得上清液浓缩至无醇味，上DianionHP-20柱，依次用水、体积浓度20％、40％乙醇梯度洗脱，流速6mL/min，每个部位的流动相用量为柱体积的10倍，收集体积浓度40％乙醇洗脱液，浓缩干燥，得组分A；组分A用水离散溶解，20℃下6000rpm离心15min，然后用滤纸过滤，滤液在45℃下减压浓缩至原体积的28-29分之一，通过ToyopearlHW-40柱色谱，依次用水、体积浓度10％甲醇洗脱，每个洗脱部位用量为柱体积的4倍，流速6ml/min，分别收集水、10％甲醇洗脱组份，标为组分B1、组分B2；组分B1用体积浓度为80％的乙醇醇沉，组分B1与乙醇的体积比为1:5，静置1h，收集上清液，反复操作4次，上清液在20℃下6000rpm离心15min，过滤，滤液在45℃下，减压干燥，标为组分C1，组分C1通过SephadexLH-20柱色谱，用体积浓度70％甲醇等度洗脱，用试管接取流份，每管5ml，流速为1ml/min，采用茴香醛-浓硫酸喷雾检识洗脱终点，合并第5-33管的流份，标为组分D1，组分D1用水溶解，通过ODS柱色谱，依次用水、体积浓度10％、20％、30％甲醇梯度洗脱，流速3ml/min，每个梯度流动相用量为2个柱体积，合并30％甲醇洗脱组分标为组分E4；组分E4用半制备HPLC分离，上规格型号为：250×10mm,粒径5μm,孔径12nm的YMC-PackODS-AA色谱柱，流动相为乙腈︰三氟乙酸水溶液＝14︰86，所述的三氟乙酸水溶液为每1000mL水中加入300μl三氟乙酸混匀制成(以下同)，流速3mL/min，收集保留时间tR＝36.5～37.5min的流份，浓缩干燥，得到化合物北葶新碱D；组分B2用水溶解，通过ODS柱色谱，依次用水、体积浓度10％、20％甲醇洗脱，流速3ml/min，每个梯度用流动相用量为2个柱体积，合并20％甲醇洗脱组分标为组分F3；组分F3通过SephadexLH-20柱色谱，用体积浓度70％甲醇洗脱，流速为1ml/min，用试管接取流份，每管5ml，采用茴香醛-浓硫酸喷雾检识洗脱终点，合并第36-46管的流份，标为组分G3；组分G3用半制备HPLC分离，上规格型号为：250×10mm,粒径5μm,孔径12nm的YMC-PackODS-AA色谱柱，流动相为乙腈：流动相为乙腈︰三氟乙酸水溶液＝14︰86，流速2.5ml/min，收集保留时间tR＝39.0～40.2min的流份，浓缩干燥，得到化合物北葶新碱C。3.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李孟，曾梦楠，张贝贝，张靖柯，张志广，吕锦锦，郑晓珂，赵璇，冯卫生，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：河南,41