一种预测儿童是否对龋病易感的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种能够预测儿童是否对龋病易感的试剂盒，其包括麦芽糖、α‑甲基‑D‑半乳糖苷、α‑苦杏仁苷、D,L‑α‑磷酸甘油、D‑海藻糖、3‑甲基‑D‑葡萄糖、松二糖、甘氨酰‑L‑脯氨酸、L‑谷氨酰胺和甘氨酰‑L‑谷氨酰胺，共计10种碳源，用于预测儿童患龋齿的风险。该试剂盒能够在医疗机构中甚至家中被使用，在儿童患病之前就能够对患病风险进行预估，因而能够提前预防，大大降低社会对于龋病所投入的资源。

A kit for predicting the susceptibility of children to dental caries

The present invention relates to a kit capable of predicting whether a child is susceptible to caries, including maltose, alpha methylated D galactoside, alpha amygdalin, D, L, D, trehalose, 3 methylated D glucose, pine two sugar, glyamyl L, proline, L, glutamine, and glycyryl L Amidamide, a total of 10 carbon sources, is used to predict the risk of dental caries in children. The kit can be used in medical institutions, even at home, to predict the risk of disease before children are ill, so that they can be prevented in advance and greatly reduce the resources that the community has invested in caries.

【技术实现步骤摘要】
一种预测儿童是否对龋病易感的试剂盒
本专利技术涉及口腔医学
，尤其涉及儿童龋齿患病风险的预测。
技术介绍
低龄儿童龋(ECC),以往称之为奶瓶龋或喂养龋,被认为是儿科以及公共卫生方面世界性的难题。这是一种发生于儿童的慢性疾病，2-5岁时最为好发，但经常被人们所忽视。儿童龋病治疗常常较为困难，成本也较高。全麻下治疗及有资格开展全麻治疗的医院是治疗ECC所需要的。先前的研究都着眼于分类学上的细菌多样性。尽管这些研究为我们提供了很多关于口腔微生物与菌斑之间关系的重要依据，但这限制了我们对于微生物群落生态学上关联的理解深度。这些研究也多仅限于理论上的分析，并没有将结果直接转换到实际应用当中。对于微生物表现型，如代谢的分析，可以更加深入地了解微生物群落结构。首先，代谢过程是确定口腔致病微生物的毒力特性的关键点。另外，内部的协同营养代谢会增加的细菌群落中的多样性，对维持微生物群落的稳定性有重要意义。以Biolog(BiologInc.,Hayward,CA,USA)分析样本的单一碳源利用(SCSU)模式是一种基于功能来鉴别非自养微生物的方法。一块板上有若干个孔，每孔包含四唑紫以及最小量的不同的专有生长介质(单一碳源)，以微生物细胞呼吸还原四唑紫的反应显色来指示细菌的代谢情况。这项分析技术具有灵敏度高、分辨力强、无需分离培养等特点，微生物对碳源的利用有选择性，每种微生物对不同碳源的利用能力不同，故多种SCSU的测定可以得到被测的单一微生物或微生物群落的代谢特征指纹，以鉴别不同微生物(群落)，因此该技术经常被用于土壤微生物检测、生态环境重建评估等环境微生物的测定当中。2014年Zhang等人在PLOSONE杂志上发表关于应用Biolog技术确定牙周炎患者菌斑微生物群落的论文，其中收集被试者菌斑，分析95种单一碳源利用模式，得到可以区别牙周炎组与健康对照组的14种单一碳源。但是关于ECC患者和健康者口内微生物的代谢特点确并没有相关研究报道，更没有基于上述研究的可以应用于实际的产品或者方法。虽然龋病与牙周炎均是菌斑依赖病，但仅仅依靠现有牙周炎的检测模型以及相应结论并不能对获得龋病的相关信息有所帮助，理由包括：牙周炎与龋病的致病菌并不相同；牙周炎与龋病的致病菌互相拮抗，难以共存；牙周炎与龋病两者对于不同碳源的代谢特征指纹不同；针对两者检测样本的处理也会有所不同；与健康者相比，碳源呈现显著差异的时间或者实验中相关模型的其它参数及其最优值也都会不同。鉴于龋病是人类患病率最高的口腔疾病之一，第四次全国口腔健康流行病学调查显示，我国现阶段龋病患病形势也很不乐观，因此，针对低龄儿童龋，不光需要患病机制、致病因素的探究，同时也非常需要一种能够对患病风险进行方便预测的产品，来帮助全社会积极预防。
技术实现思路
针对上述存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种能够预测儿童是否对龋病易感的试剂盒。其能够在医疗机构中甚至家中被使用，在儿童患病之前就能够对患病风险进行预估，因而能够提前预防，大大降低社会对于龋病所投入的资源。具体地，预测儿童是否对龋病易感的试剂盒包括麦芽糖、α-甲基-D-半乳糖苷、α-苦杏仁苷、D,L-α-磷酸甘油、D-海藻糖、3-甲基-D-葡萄糖、松二糖、甘氨酰-L-脯氨酸、L-谷氨酰胺和甘氨酰-L-谷氨酰胺，共计10种碳源，用于预测婴幼儿患龋齿的风险。试剂盒整体为板状结构，板上设有用于放置所述碳源和显色剂的孔，其中不同的孔内放置不同的碳源，每个孔内都装有显色剂。其中所述显色剂优选为四唑紫。试剂盒还可以包括装有水与显色剂的孔和/或内部为空的孔，作为参照。为了进一步使用方便，试剂盒还可以包括磷酸生理盐水缓冲液。所述磷酸生理盐水缓冲液优选为pH值为7.2–7.4的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。试剂盒整体设计方便使用，且能够准确的预测儿童患龋病的风险。附图说明图1：疾病组(-●-)与对照组(--□--)在Biolog厌氧培养板上培养24、48、72、96小时时的平均颜色变化(averagewellcolordevelopment,AWCD)。*P＜0.05图2：疾病组(-●-)与对照组(--□--)的不同碳源代谢模式。*P＜0.05**P＜0.01图3：基于24小时时疾病组(P)与对照组(C)间差异碳源的聚类分析示意图。图4：以培养24小时时的10个差异碳源为变量，对疾病组(▲)与对照组(■)进行主成分分析的示意图。图5:试剂盒结构示意图。具体实施方式下面对本专利技术作进一步说明。(一)实验对象以电脑生成随机数的方式从2014年1月1日至8月31日期间在北京大学医学院第二门诊部儿童牙科门诊接受检查或治疗的儿童中募集受试者。所有儿科受试者家长均在研究开始前签署了书面知情同意书。纳入标准为：年龄48～71个月；无感染性、先天性牙周病或牙脓肿；在牙菌斑收集前一个月内不使用抗生素、涂氟治疗或拔牙。在诊断龋齿方面，一名工作人员的诊断标准参照另一位有经验的同事进行了校准，而后进行了所有的牙科检查。检查用口镜和牙科探针，通过视诊与探诊方法诊断龋齿。用棉球清洁牙齿，但不拍X光片。基于世界卫生组织(1997)龋病诊断标准评估了乳牙龋失补指数(dmft)，即一个人口腔中发生龋病的牙数、因龋病失去的牙数与因龋病做充填治疗的牙数的和。有5个或更多的龋齿的患儿被分在SECC组，或者叫做疾病组。无龋(CF)儿童被分在对照组。以前充填修复的牙按有龋统计。在2015年8月-10月期间所有受试者接受了牙科检查，对照组的儿童保持着无龋状态。总的来说，本研究纳入了20名儿童，其中10名有重度ECC(SECC)，另外10名作为对照对照。(二)样本的收集和处理要求受试者在早餐后不吃更多的食物且不能刷牙。大约在早饭后2小时，要求受试者用清水漱口。对每个儿童，从八颗乳磨牙的完整釉质上取样牙菌斑。标本用无菌挖匙收集，并立即置于含有1ml硫代硫酸钠溶液Eppendorf管中。样品在冰袋中保存于0℃条件下，收集后2小时内送到实验室。(三)Biolog分析样本悬浮在0.01mol/L的11mLpH7.2–7.4磷酸盐缓冲液中，涡旋震荡充分混匀60s，将样本接种在厌氧的Biolog板(AN)上，每孔加样100μL。Biolog的微孔板包含95个独立的单一碳源，和一个水作为空白对照。每个孔中含有四唑紫，还原反应引起的颜色变化以指示细菌代谢。细菌悬液的初始光密度(ODS)在接种前测量。微孔板在5％二氧化碳，37℃的条件下培养4天，Biolog平板放在厌氧袋中。在590nmOD值(OD590nm)用BiologMicroStation以及相关软件测定和分析。(四)数据分析为了校正背景，我们引入了修正的OD值，即实验孔减去控制孔OD。若差值为负，则修正后的OD值为零。微生物群落的整体代谢活性在Biolog板被表示为平均颜色变化(AWCD)，即为单一碳源每孔的校正OD值的平均数。我们的标准化校正OD值为每个孔的校正OD值除以各板块AWCD，因此能够避免由菌斑悬浮液中的微生物群落人工取样差异导致的初始OD值变化。培养四天之后的疾病组与对照组板子的AWCD的差异应用独立样本t检验进行比较。p＜0.05或p＜0.01有统计学意义。测定了两组的碳源的利用情况，基于标准化校正OD值，采用独立样本t检验本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预测儿童是否对龋病易感的试剂盒，其特征在于包括麦芽糖、α‑甲基‑D‑半乳糖苷、α‑苦杏仁苷、D,L‑α‑磷酸甘油、D‑海藻糖、3‑甲基‑D‑葡萄糖、松二糖、甘氨酰‑L‑脯氨酸、L‑谷氨酰胺和甘氨酰‑L‑谷氨酰胺，共计10种碳源，用于预测儿童患龋齿的风险。

【技术特征摘要】
1.一种预测儿童是否对龋病易感的试剂盒，其特征在于包括麦芽糖、α-甲基-D-半乳糖苷、α-苦杏仁苷、D,L-α-磷酸甘油、D-海藻糖、3-甲基-D-葡萄糖、松二糖、甘氨酰-L-脯氨酸、L-谷氨酰胺和甘氨酰-L-谷氨酰胺，共计10种碳源，用于预测儿童患龋齿的风险。2.如权利要求1所述的试剂盒，其整体为板状结构，板上设有用于放置所述碳源和显色剂的孔，其中不同的孔...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈峰，刘云松，赵彦，钟雯婕，张云帆，张倩，
申请(专利权)人：北京大学口腔医学院，
类型：发明
国别省市：北京,11