一种鱼类传染性造血器官坏死病病毒的培养方法技术

本发明专利技术属于生物制品技术领域，涉及一种鱼类传染性造血器官坏死病病毒培养方法。本发明专利技术利用微载体悬浮培养，实现了鱼类传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)病毒感染鲑鱼胚胎细胞(CHSE)在含有微载体的生物反应器中大规模培养，从而获得高滴度的IHNV病毒液，适用于鱼传染性造血器官坏死病病毒繁殖及灭活疫苗制备。

【技术实现步骤摘要】
一种鱼类传染性造血器官坏死病病毒的培养方法
本专利技术属于生物制品
，具体涉及一种鱼类传染性造血器官坏死病病毒的培养方法。
技术介绍
鱼传染性造血器官坏死病是鱼类重要的疾病之一，在野生和人工培育的鳟鱼和鲑鱼石斑鱼中均可发生该疾病，是一种急性的、全身性的、致命性的传染病。传染性造血器官坏死病病毒(InfectioushematopoieticnecrosisVirus,IHNV)是引起该病的病原，IHNV属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)，诺拉弹状病毒属(Novirhabdovirus)。该病给全球范围内的冷水渔业造成了较为严重的经济损失。到目前为止仍未有有效的疫苗用于预防这类病毒的感染和传播。中国专利(CN104189899B)公布了一种制备虹鳟鱼传染性造血器官坏死症灭活疫苗的方法，研磨、过滤和浸毒处理发病但未死亡的稚鱼胰腺和肝脏，接种虹鳟鱼性腺细胞，在14℃条件下盲传，盲传至第十代时五天，收集细胞毒液；接种大鳞大马哈鱼胚胎细胞，从14℃开始传代，每传五代培养温度升高1℃，直至培养温度升高至20℃；用鲤鱼上皮瘤细胞在20℃条件下继续传代，传至第十二代，得到高滴度的病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鱼类传染性造血器官坏死病病毒悬浮培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.取长成单层的CHSE细胞，经胰酶消化后用细胞培养液中和，振摇分散细胞，调整细胞浓度；按4×10

【技术特征摘要】
1.一种鱼类传染性造血器官坏死病病毒悬浮培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.取长成单层的CHSE细胞，经胰酶消化后用细胞培养液中和，振摇分散细胞，调整细胞浓度；按4×108cells/mL的量转接种到含微载体的生物反应器中进行培养，培养条件为：培养温度16-20℃，5％CO2，pH值在7.0-7.5之间，葡萄糖含量不低于330mg/dL，溶氧为40％-60％，搅拌速度为40-60rpm；S2.待步骤S1中细胞密度达到2×106cells/mL细胞时，按体积比1：1000的比例接种含IHNV病毒毒种，并加入细胞生长液，每隔5分钟进行搅拌，16-20℃孵育15-45分钟，然后设置反应器参数：培养温度为16-20℃，5％CO2，维持pH值在7.0-7.5之间，葡萄糖含量不低于450mg/dL，溶氧为40％-60％和搅拌速度30-50rpm，进行持续培养。2.根据权利要求1所述鱼类传染性造血器...

【专利技术属性】
技术研发人员：任政华，卢中正，尹顺义，伍活镰，蒋东阳，赵辉，
申请(专利权)人：广州齐志生物工程设备有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44