一株绳状青霉及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种从燕麦孢囊线虫的孢囊上分离并筛选出来的生防真菌—绳状青霉(Penicillium funiculosum)S01324。本发明专利技术的绳状青霉S01324菌株对燕麦孢囊线虫有很好的生防效果，能寄生燕麦孢囊线虫孢囊，寄生率达到100％；对孢囊孵化和二龄幼虫有较强的抑制效果。本发明专利技术所提供的绳状青霉S01324菌株防治效果较好且稀释后防效稳定，对环境友好，菌株易培养，大规模生产的发酵工艺简单、生产成本低廉。

【技术实现步骤摘要】
一株绳状青霉及其用途
本专利技术涉及植物病害的生物防治
，具体涉及一株对植物线虫具有寄生和毒杀作用的绳状青霉(Penicilliumfuniculosum)S01324的筛选、发酵、杀线虫活性测定及对小麦孢囊线虫病的防治应用，属于农业生物

技术介绍
植物病原线虫是一类危害严重的植物病害，每年给全世界农业带来近1570亿美元的经济损失。已报道的植物病原线虫达200多属5000余种，其中燕麦孢囊线虫(Heteroderaavenae)是危害小麦等麦类作物的重要病原线虫，欧洲、亚洲、非洲、北美洲、南美洲和大洋洲的40多个国家均有分布，在国内造成的小麦产量损失为10％-30％，最高达70％以上。目前，化学防治仍然是控制植物线虫的重要措施之一，化学杀线剂(如土壤熏蒸剂和非熏蒸剂)具有一定的防治效果，但长期使用剧毒化学杀线剂给环境和人类健康带来的危害日渐显露。由于传统杀线剂(如甲基溴化物和有机磷酸盐)不断被淘汰，研究开发高效低毒的生物杀线剂已成为农业可持续发展的重要问题，而新的真菌资源是研发生物杀线制剂的关键因素。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题，本专利技术第一个目的在于提供一种从燕麦孢囊线虫的孢囊上分离并筛选出来的生防真菌——绳状青霉(Penicilliumfuniculosum)，丰富小麦孢囊线虫病生防真菌菌种资源，为研究开发生物杀线剂奠定基础。本专利技术第二个目的在于提供一种利用上述菌株S01324生产的微生物菌剂。本专利技术第三个目的在于提供上述微生物菌剂的制备方法。本专利技术第四个目的在于提供上述微生物菌剂对燕麦孢囊线虫的生测方法。本专利技术第五个目的在于提供上述菌株S01324防治燕麦孢囊线虫病的室内杯栽试验方法。本专利技术第六个目的在于提供上述菌株S01324防治燕麦孢囊线虫病的田间管栽试验方法。本专利技术第七个目的在于提供上述菌株S01324在防治燕麦孢囊线虫病上的应用。本专利技术第八个目的在于提供上述菌株S01324的鉴定方法。实现本专利技术的技术方案如下所述。一株绳状青霉(Penicilliumfuniculosum)S01324于2016年3月分离自山东省青岛市城阳区上马街道葛家屯社区，于2017年月日保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，，保藏编号为CGMCC14991，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。中国科学院微生物研究所。利用上述绳状青霉S01324生产的微生物菌剂，活性成分为菌体或发酵滤液。上述微生物菌剂的制备步骤如下：带菌平板(菌体)：将菌株S01324转接至PDA平板上，25℃培养，待菌落直径为4-6cm时备用。发酵滤液：(1)菌种活化：将低温保藏的菌株S01324于PDA平板上25℃培养，得到活化的菌种。(2)发酵培养：从活化的菌落边缘用直径为6mm的黄色枪头打出三个菌饼，接种到125mLPD液体培养基中，120r/min，25℃摇培7天后，8000rpm离心10min，取发酵上清，用细菌过滤器过滤，收集发酵滤液，4℃保存备用。PD液体培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，加水定容至1L。250mL三角瓶每瓶分装125mL培养基。带菌麦粒(菌体)：先将小麦粒用清水清洗干净，再用清水浸泡至手指搓捻无实心感，用沸水煮25-30min，至麦粒无白心，滤水装瓶，每250mL瓶装50g，高温灭菌后冷却至室温，在无菌条件下将S01324带菌平板上加5ml无菌水，用手术刀将菌丝和孢子刮下来接种到上述麦粒培养基中，25℃恒温培养15d后备用。本专利技术的有益效果是：本专利技术的绳状青霉S01324菌株对燕麦孢囊线虫有很好的生防效果，能寄生燕麦孢囊线虫孢囊，寄生率达到100％；对孢囊孵化有较强的抑制效果，发酵滤液的原液，以及2倍、4倍、8倍、16倍的稀释液第8天对孢囊孵化抑制率分别达到98.8％，86.0％，69.9％，56.5％，42.0％；对J2有较高的毒杀作用，发酵滤液的原液，以及2倍、4倍、8倍、16倍的稀释液分别在第1d，2d，4d，6d，9d能杀死全部的J2。对杯栽小麦孢囊线虫病防治效果明显，带菌麦粒处理组、菌株发酵滤液原液处理组孢囊减退率分别达到62.1％和50.6％；对管栽小麦孢囊线虫病防治效果明显，带菌麦粒处理组、菌株发酵滤液原液处理组孢囊减退率分别为59％和60.9％。本专利技术所提供的绳状青霉S01324菌株防治效果较好且稀释后防效稳定，对环境友好，菌株易培养，大规模生产的发酵工艺简单、生产成本低廉。根据本专利技术提供的绳状青霉S01324菌体和发酵滤液菌剂可作为单剂或组合制剂利用或施用，这样的制剂可包括农业上合适的助剂、溶剂、载体、表面活性剂或填充剂。本专利技术的菌剂可用于防治各种线虫病害。本专利技术的菌剂可用于防治的线虫实例包括，但不限于燕麦孢囊线虫，这里所使用的线虫是指植物线虫，所述植物线虫意指对植物造成伤害的植物寄生线虫和生活在土壤中的线虫。植物寄生线虫包括，但不仅限于，体外寄生虫，例如剑线虫属、长针线虫属、毛刺线虫属；半寄生物例如穿刺线虫属；迁移性内寄生虫，例如短体属、穿孔线虫属和Scutellonernaspp.；固着性寄生虫，例如异皮线虫属、Globoderalspp.和根结线虫属；茎和叶内寄生虫，例如茎线虫属、滑刃线虫属和Hirshmaniellaspp.。尤其是有害的根寄生性土壤线虫，例如异皮线虫属或球异皮线虫属的孢囊线虫和根结线虫属的根结线虫。然而，这里描述的化合物的使用不局限于这些属或物种，且也以同样的方式扩展到其他线虫。本专利技术中的菌剂可作用的植物并不是特别限制的：例如，谷物(例如水稻、大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉米、高粱等)、豆类(大豆、红豆、菜豆、蚕豆、豌豆、花生等)，果树或水果(苹果、柑橘、梨、葡萄、桃、杏、樱桃、核桃、扁桃、香蕉、草莓等)、蔬菜(甘蓝、西红柿、菠菜、椰菜、生菜、洋葱、葱、胡椒等)、块根作物(胡萝卜、土豆、甘薯、萝卜、莲藕等)、经济作物(棉、麻、油菜、甜菜、甘蔗、橄榄、橡胶、咖啡、烟草、茶叶等)、牧场用植物(果园草、高粱、三叶草、紫花苜蓿等)、草坪用草(高丽草、小糠草等)、调味作物(薰衣草、迷迭香、百里香、香菜、胡椒、姜等)和开花植物(菊花、玫瑰、兰花等)。根据本专利技术的菌剂对植物和植物部位的处理，使用常用的处理方法直接进行或作用于他们的周围、生长地进行，例如通过浸渍、喷涂、雾化、灌溉、挥发、撒粉、撒播、发泡、涂布、浇灌、滴水灌溉等，并且在繁殖材料的情况下，尤其是种子的情况下，还通过一层或多层涂覆等作为用于干燥种子的处理粉末、处理种子的溶液、用于浆液处理的水溶性粉末。也可通过超低容量的办法施用菌剂，或注射菌剂本身到土壤中。附图说明图1为绳状青霉形态；A为菌落正面、B为菌落背面、C为分生孢子梗和分生孢子(标尺：C＝10μm)；图2菌株S01324不同浓度发酵滤液条件下的J2死亡率；图3菌株S01324不同浓度发酵滤液条件下的J2孵化时间动态。具体实施方式在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本专利技术。以下实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。下面实施例用于进一步解释本专利技术，但是不以任何方式构成对本专利技术的限制。下述实施例中的试验方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株绳状青霉(Penicillium funiculosum)S01324，于2017年月日保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC14991，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。中国科学院微生物研究所。

【技术特征摘要】
1.一株绳状青霉(Penicilliumfuniculosum)S01324，于2017年月日保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC14991，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。中国科学院微生物研究所。2.一种权利要求1所述的绳状青霉(Penicilliumfuniculosum)S01324用于防治植物线虫病。3.一种微生物菌剂，其特征在于，活性成分为绳状青霉S01324菌体和/或绳状青霉S01324的发酵滤液。4.根据权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，还包含助剂、溶剂、载体、表面活性剂和/或填充剂。5.根据权利要求3或4所述的微生物菌剂，其特征在于，所述绳状青霉S01324菌体由以下方法制得：将小麦粒用清水清洗干净，再用清水浸泡至手指搓捻无实心感，用沸水煮25-30min，至麦粒无白心，滤水装瓶，高温灭菌后冷却至室温，在无菌条件下将绳状青霉S01324接种...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁晨，赵洪海，宋雯雯，黄晨，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37