胎盘源基质、其制备方法和其用途技术

本发明专利技术涉及胎盘源基质、其制备方法、和其使用方法。本发明专利技术还涉及使用所述胎盘源基质培养细胞，递送细胞，促进干细胞或组织特异性祖细胞的分化，和修复、替换、再生、填充、减少或抑制缺陷的瘢痕的方法。本发明专利技术进一步涉及在表面上涂覆胎盘源基质或将胎盘源基质注射至目标部位中的方法。

Placental source matrix, preparation method and its use

The present invention relates to a placental source matrix, a preparation method, and a method for using the placenta. The invention also relates to the method of using the placenta derived matrix to culture cells, to deliver cells, to promote differentiation of stem cells or tissue specific progenitor cells, and to repair, replace, regenerate, fill, reduce or inhibit defective scarring. The invention further relates to a method of coating the placental source substrate or injecting the placental source matrix into the target site on the surface.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】胎盘源基质、其制备方法和其用途相关专利申请的交叉引用本申请要求2015年5月29日提交的美国临时申请第62/168,397号的优先权，其全部内容为了全部目的引入本文以作参考。
本专利技术一般性地涉及胎盘源基质、其制备方法和其用途。
技术介绍
胞外基质(ECM)对于在培养物中培养许多细胞类型是必需的，并且显示注射到动物疾病模型(例如心脏局部缺血)中的治疗潜力。ECM可通过多种方法从动物组织制备。然而，异种ECM可引起免疫应答或传播异种人畜共患病(xenozoonoses)，限制临床效用。仍存在对用于临床应用例如用于治疗目的以及生物研究的合适的ECM的需要。
技术实现思路
本专利技术涉及胎盘源基质，和制备或使用胎盘源基质的方法。根据本专利技术的第一方面，提供制备胎盘源基质的方法。所述方法包括(a)去细胞(decellularizing)或失活(devitalizing)至少一块胎盘组织从而产生去细胞的或失活的胎盘组织，和(b)在消化溶液中消化去细胞的或失活的胎盘组织从而产生胎盘源基质。胎盘源基质可具有碱性pH，例如约8.0以上。制备方法可进一步包括调节胎盘源基质的pH至8.0以上。胎盘源基质可实质上没有(例如，小于约10、0.1、0.01或0.001wt％)胶原酶。胎盘源基质可基本上由去细胞的或失活的胎盘组织和消化溶液组成。胎盘组织可源自哺乳动物，例如人、牛科、猪科、鼠科、绵羊科、马科、犬科、和猫科，优选人。去细胞或失活步骤可包括用非变性去污剂(non-denaturingdetergent)处理胎盘组织。非变性去污剂可选自由以下组成的组：N-月桂酰肌氨酸盐、聚氧乙烯醇、聚氧乙烯异醇(polyoxyethyleneisoalcohol)、聚氧乙烯对叔辛基苯酚、聚氧乙烯壬基酚、脂肪酸的聚氧乙烯酯、和聚氧乙烯山梨醇酯。制备方法可进一步包括与消化同时、在消化前或后均化去细胞的或失活的胎盘组织。消化可包括在消化溶液中均化去细胞的或失活的胎盘组织。可均化去细胞的或失活的胎盘组织10秒至72小时。可将去细胞的或失活的胎盘组织在4℃下均化。制备方法可进一步包括在均化前切割胎盘组织，并且仅均化部分胎盘组织。在制备方法中，胎盘源基质可为水凝胶，例如热可逆水凝胶(thermoreversiblehydrogel)。胎盘源基质可为热可逆水凝胶；并且热可逆水凝胶的溶液至凝胶和/或凝胶至溶液转变温度可为4℃至40℃的温度。胎盘源基质可为热可逆水凝胶；并且热可逆水凝胶可在大约37℃的温度下凝胶化。在一个实施方案中，制备方法不包括加入除了来自胎盘组织的天然交联以外的其他交联。在另一实施方案中，制备方法不包括加入除了来自胎盘组织的天然载体以外的其他载体。在又一实施方案中，制备方法不包括加入光活性剂(photoactiveagent)。在其他实施方案中，制备方法不包括通过非天然存在的键交联去细胞的或失活的胎盘组织和/或胎盘源基质。制备方法可进一步包括冷冻或冷冻干燥所述胎盘源基质从而产生冷冻的或冷冻干燥的胎盘源基质。制备方法可进一步包括将胎盘源基质放置在具有预定形状的模具中，其中胎盘源基质在模具中冷冻或冷冻干燥。制备方法可进一步包括冷冻或冷冻干燥所述胎盘源基质从而产生海绵结构(spongestructure)，并且任选地用水替代剂(waterreplacingagent)处理海绵结构，其中冷冻的或冷冻干燥的胎盘源基质以湿润状态保存。水替代剂可含有选自由以下组成的组的一种或多种：甘油(甘油USP)(glycerol(glycerinUSP))、阿东糖醇(adonitol)、山梨糖醇、核糖醇(ribitol)、半乳糖醇、D-半乳糖、1,3-二羟基丙醇、乙二醇、三甘醇、丙二醇、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、木糖醇、内消旋-赤藓醇(meso-erythritol)、己二酸、脯氨酸、羟脯氨酸、聚乙二醇、醇(乙醇)(alcohol)、和脂质。海绵结构可含有具有平均直径为1μm至4000μm的孔。海绵结构的平均空隙体积(voidvolume)可为10％至95％。制备方法可进一步包括冷冻或冷冻干燥所述胎盘源基质从而产生海绵结构；将海绵结构溶解在溶剂中从而产生胎盘源溶液；和将胎盘源溶液电纺丝(electrospinning)从而产生纳米纤维。制备方法可进一步包括在负静压下处理胎盘源基质的海绵结构从而增加孔隙率。制备方法可进一步包括将胎盘源基质电纺丝从而产生纳米纤维。在制备方法中，可将去细胞的或失活的胎盘组织在37℃下消化。消化溶液可含有胃蛋白酶、酸，或其组合。所述酸可为强酸例如盐酸(HCl)。在一个实施方案中，消化溶液含有胃蛋白酶和HCl；消化溶液中胃蛋白酶的浓度为400至700单位/ml；消化溶液中HCl的浓度为0.01M至1.0M。消化溶液中去细胞的或失活的胎盘组织的浓度可为0.1至40mg/mL。当在酸性pH下(例如约1.5-2.0)、优选在pH2.0下试验时，胎盘源基质中的胃蛋白酶活性可为小于消化溶液中的约10、5、1或0.1％。在制备方法中，在干燥状态下，去细胞的或失活的胎盘组织中的胎盘组织的重量百分比可为50％至100％。在干燥状态下，胎盘源基质中的胎盘组织的重量百分比可为50％至100％。在制备方法中，相比于去细胞或失活步骤前胎盘组织中的DNA量，去细胞的或失活的胎盘组织中的DNA量可减少至少90％。胎盘源基质可含有每mg胎盘源基质干重不多于10μg、1μg、500ng、200ng或100ngDNA。制备方法可进一步包括在植入(implanting)前保存胎盘源基质。胎盘源基质可以以干燥状态保存。胎盘源基质可通过低温贮藏(cryopreservation)保存。制备方法可进一步包括用一种或多种处理溶液处理所述胎盘源基质。处理溶液可含有离子交联剂、酶交联剂、或化学交联剂，光活性剂，或聚合物。离子交联剂可含有选自由以下组成的组的一种或多种：钙、钡、铝、锶、铜、锌、镁、锰、钴、和铁。酶交联剂可含有选自由以下组成的组的一种或多种：转谷氨酰胺酶、乙二胺、赖氨酰氧化酶家族、六亚甲基二异氰酸酯(HMDIC)、辛二亚氨酸二甲酯(dimethylsuberimidate,DMS)、和二甲基-3-3'-二硫代双丙酰亚胺酯(DTBP)。化学交联剂可含有选自由以下组成的组的一种或多种：戊二醛、甘油醛、京尼平(genipin)、葡萄糖或核糖、聚(乙二醇)双环氧化物交联剂、聚(乙二醇)二缩水甘油醚、EDC和NHS、和丙烯酰基叠氮化物(acrylazide)。聚合物可包含选自由以下组成的组的一种或多种：天然或改性的胶原、明胶、琼脂糖、改性透明质酸、纤维蛋白、壳多糖、生物素、抗生物素蛋白、脱矿质骨基质(demineralizedbonematrix)、蛋白聚糖、层粘连蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白、肝素、甘油、蔗糖八硫酸酯(sucroseoctasulfate)、聚乙二醇、聚甲基丙烯酸甲酯、聚氨酯、丙烯酰吗啉、N,N-二甲基丙烯酰胺、N-乙烯基吡咯烷酮和甲基丙烯酸四氢糠酯、羟磷灰石、聚氨酯、和聚乳酸。制备方法可进一步包括将一种或多种生物活性补充剂(bioactivesupplement)加入至去细胞的或失活的胎盘组织或胎盘源基质。所述一种或多种生物活性补充剂可选自由以下组成的组：FGF家族本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备具有8.0以上的pH的胎盘源基质的方法，其包括：(a)失活胎盘组织从而产生失活的胎盘组织，(b)在消化溶液中消化所述失活的胎盘组织，从而产生胎盘源基质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.29 US 62/168,3971.一种制备具有8.0以上的pH的胎盘源基质的方法，其包括：(a)失活胎盘组织从而产生失活的胎盘组织，(b)在消化溶液中消化所述失活的胎盘组织，从而产生胎盘源基质。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)包括用非变性去污剂处理所述胎盘组织。3.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括均化所述失活的胎盘组织。4.根据权利要求3所述的方法，其中在4℃下均化所述失活的胎盘组织。5.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括冷冻或冷冻干燥所述胎盘源基质从而产生海绵结构。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述海绵结构的平均空隙体积为10％至95％。7.根据权利要求1所述的方法，其中在37℃下消化所述失活的胎盘组织。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述消化溶液包括胃蛋白酶、酸，或其组合。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述消化溶液包括胃蛋白酶和酸，其中所述酸为盐酸HCl，其中所述消化溶液中胃蛋白酶的浓度为400至700单位/ml，其中所述消化溶液中HCl的浓度为0.01M至1.0M。10.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括加入一种或多种生物活性补充剂至所述失活的胎盘组织或所述胎盘源基质。11.一种细胞培养的方法，其包括在通过根据权利要求1-10任一项所述的方法制备的胎盘源基质上或所述胎盘源基质中培养细胞。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述细胞选自由以下组成的组：干细胞、脂肪源干细胞、背根神经节细胞、胰岛细胞、心肌细胞、肝细胞、iPSC、癌细胞、和脐静脉内皮细胞。13.根据权利要求11所述的方法，其进一步包括在所述胎盘源基质上或所述胎盘源基质中保存所述细胞。14.根据权利要求13所述的方法，其中通过低温贮藏保存在所述胎盘源基质上或所述胎盘源基质中的所述细胞。15.一种抑制或减少由于冷冻或冻干造成的蛋白质的生物活性损失的方法，其包括将所述蛋白质暴露于足够抑制或减少由于冷冻或冻干造成的蛋白质的生物活性损失的有效量的通过根据权利要求1-10任一项所述的方法制备的胎盘源基质。16.一种细胞递送的方法，其包括(a)在通...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·弗朗西斯，S·陈，E·布瑞斯韦特，R·罗德里格斯，A·史密斯，A·胡贝尔，J·B·李，
申请(专利权)人：生命网络健康公司，
类型：发明
国别省市：美国,US