羊干素及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种羊干素及其制备方法和应用，并公开了其制剂冻干粉的制备方法，该羊干素是通过从人胎盘羊膜组织中分离培养羊膜间充质干细胞，用人血小板裂解液培养扩增，再通过收集人羊膜间充质干细胞的培养上清，浓缩后收集制得，解决了AMSCs细胞倍增时间长和多分化潜能差的问题，可以对羊干素活性成分定性、定量分析，可以提高羊干素中的活性成分如抗氧化剂和多种生长因子等，且使其活性成分避免降解。动物实验和临床试验结果表明，本技术制备的羊干素可用于延缓衰老、防治骨质疏松和皮肤衰老、促进皮肤创伤愈合。

The preparation and application of goats

【技术实现步骤摘要】
羊干素及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物工程领域，更具体地，涉及一种羊干素制剂的制备方法及其在抗衰老药物中的应用。
技术介绍
新近研究发现：80％以上的人羊膜间充质干细胞(AmnioticMembraneMesenchymalStemcell,AMSCs)移植治疗作用是通过其旁分泌作用实现的。干细胞释放的所有分子被称为干细胞释放分子组，能够通过旁分泌途径发挥免疫调节，促进血管发生，抗氧化和抗凋亡，促进组织再生修复等作用。人羊膜间充质干细胞释放分子(AmnioticMembraneMesenchymalStemcellReleaseMolecules,ASRM)，简称为羊干素。目前，国外各研究机构虽然已经明确干细胞释放分子作为干细胞产业领域非细胞治疗新策略的重要地位，但是尚无各种来源干细胞释放因子分泌组的产品上市。羊干素中ASRM成分研究尚不完善，羊干素治疗衰老相关退行性疾病的新药研发尚不成熟。如何提高羊干素中活性成分(抗氧化剂和多种生长因子等)以及如何进行羊干素剂型制备以使其活性成分避免降解是目前需要解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对以上问题，公开了一种羊干素及其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种羊干素，其特征在于是通过从人胎盘羊膜组织中分离培养羊膜间充质干细胞，用人血小板裂解液培养扩增，再通过收集人羊膜间充质干细胞的培养上清，浓缩后收集制得。

【技术特征摘要】
1.一种羊干素，其特征在于是通过从人胎盘羊膜组织中分离培养羊膜间充质干细胞，用人血小板裂解液培养扩增，再通过收集人羊膜间充质干细胞的培养上清，浓缩后收集制得。2.根据权利要求1所述的羊干素，其特征在于所述羊干素与药学可接受的辅料制成制剂，优选制剂的剂型为冻干粉。3.一种权利要求1所述的羊干素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)胎盘羊膜组织中分离培养和扩增人羊膜间充质干细胞：从胎盘剥离羊膜，即刻浸泡于含200U/ml青霉素及200μg/ml链霉素的α-MEM基础培养液中，4℃暂时保存，于12小时内进行原代培养；将羊膜取出，经含200U/ml青霉素及200μg/ml链霉素的PBS清洗，去除血迹，转移至2-4mlEP管中剪碎，再将多管混合至50ml离心管中，按羊膜组织体积加入10倍体积的内含0.02％EDTA的0.5mg/mlTrypsin，于无菌恒温摇床37℃175-200rpm/min震荡30mins，2000rpm离心5-10mins后弃该消化液，反复2次；再加入内含0.05g/LDNAase的0.5mg/mlCollagenaseⅡ，37℃175-200rpm/min震荡90-120mins，2000rpm离心5-10mins后弃该消化液，以PBS洗重悬后离心沉淀，反复清洗2-3次，再次离心后弃上清，以α-MEM+15％胎牛血清+50μg/mlVitaminC+2mML-glutamine完全培养液，37℃，5％CO2培养箱中培养，每隔3-4天收集未贴壁组织及培养液，以2000rpm离心10mins后，以上述完培重新接种培养，显微镜观察，原代细胞经内含0.02％EDTA的0.05mg/mlTrypsin消化传代至第2代进行质量检测，随后利用含5％人血小板裂解物培养人羊膜间充质干细胞进行扩增培养，上述操作均为无菌条件下；(2)人羊膜间充质干细胞质量检测：1)病原微生物及生化检测取步骤(1)中第3代人羊膜间充质干细胞，①通过直接接种法检测需氧菌、厌氧菌；②ELISA法检测HbsAg、HbcAb、HcvAb、抗-HIV(I+II)、CMV-IgM、梅毒抗体、EBV抗体；PCR法检测HTLV-I/II、支原体；③速率法检测ALT；④鲎试剂法检测内...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗登顺，靳建亮，胡梓轩，陶建国，王嵘，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32