一种新的多肽——人核糖体蛋白S18-10和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人核糖体蛋白Ｓ１８－１０，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人核糖体蛋白Ｓ１８－１０的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人核糖体蛋白S18-10，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。蛋白的正确翻译对所有细菌及高等生物都是非常重要的，对蛋白翻译调控机制的研究是从大肠杆菌中得到的。蛋白的翻译过程主要由各种氨酰基-tRNA合成酶、各种tRNA及核糖体共同作用来完成，其中核糖体和其他辅助因子在一起提供了翻译过程的全部酶活性，这些酶活性只有在核糖体整体结构完整的情况下才会具备。因而，核糖体及其组成的各亚单位在生物体内协同作用，起着重要的生理学功能。核糖体是合成蛋白质的细胞器，其唯一功能是按照mRNA的指令由氨基酸合成多肽链，它被称为核糖核蛋白体，简称为核蛋白体或核糖体。核糖体几乎存在于一切细胞内，无论原核还是真核细胞，均有大量的核糖体存在。核糖体是一种颗粒状结构，没有膜包裹，其直径为25nm，主要成分为蛋白质和RNA，核糖体RNA称为rRNA，蛋白质含量约占40％,RNA约占60％。蛋白质分子主要分布在核糖体的表面，而rRNA则位于内部，两者靠非共价键结合在一起。(细胞生物学翟中和高等教育出版社pp122-129)核糖体的功能研究将焦点放到了核糖体RNA上，有很多rRNA功能域决定着核糖体的不同功能。(Annu Rev Biochem 1991；60 191-227)生物有机体细胞内有两种基本类型的核糖体一种是70S(S为Sverdberg沉降系数单位)的核糖体，所有的原核细胞的核糖体均为70S真核细胞线粒体与叶绿体内的核糖体也近似于70S。另一种是80S核糖体，真核细胞的核糖体(除线粒体与叶绿体核糖体外)均为80S。不论70S或80S的核糖体，均由大小不同的两个亚单位构成。核糖体大小亚单位在细胞内常常游离于细胞质基质中，只有当小亚单位与mRNA结合后大亚单位才与小亚单位结合形成完整的核糖体。肽链合成终止后，大小亚单位解离，又游离存在于细胞质基质中。在人的重组cDNA文库内，克隆到一条与编码鼠S18的基因同源的多核苷酸，此蛋白被认为是核糖体蛋白S18。(Nucleic Acids Reseach,1993,Vol 21,No 3 745)S18是核糖体小亚单位的结合蛋白之一，它和同源蛋白存在于绝大多数原核生物和真核生物细胞内。在鼠的重组cDNA文库中发现的40S核糖体小亚单位的组成蛋白S18，对其结构研究发现，S18有152个氨基酸，编码此蛋白的mRNA有大约600个核苷酸。此蛋白的结构与大肠杆菌的S13类似，也与植物线粒体、其他细菌的S13类似。(Biochem Biophys Res Commun 1991 Aug 15；178(3):1212-8)核糖体蛋白S18的作用的研究还不是很清楚，但根据已有的研究结果，推测S18可以结合于核糖体的小亚单位，也可通过与S6相互影响从而起作用。核糖体蛋白S18的作用中最重要的一点是它与核糖体上氨酰基-tRNA的结合有关，对于核糖体的A位点的作用有极其重要的调控意义。(McDougall J.,Choli T.,Kruft V.,Kapp U.,Wittmann-Liebold B.FEBS Lett.245:253-260(1989).)核糖体蛋白S18对于蛋白质的翻译过程有着重要的作用，如果缺失或对其进行化学修饰，或编码它的基因发生突变，都会影响核糖体的功能，降低多肽合成的活性。虽然，对核糖体蛋白S18的功能研究还不够透彻，但根据种种研究结果，可以证明，核糖体蛋白S18的功能包括(1)对rRNA折叠成有功能的三维结构是十分重要的；(2)在蛋白质合成中，核糖体的空间构象发生一系列的变化，核糖体蛋白可能对核糖体的构象起“微调”作用；(3)在核糖体的结合位点上甚至可能在催化作用中，核糖体蛋白与rRNA共同行使功能。该蛋白缺失将导致细胞生长速度减慢。因而，核糖体蛋白S18在由DNA转录、翻译的细胞增殖过程中起着极为重要的作用。其表达异常将导致组织的生长速度减慢，从而引发各种发育紊乱性疾病，如发育迟缓等。通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本专利技术的多肽的表达谱与人核糖体蛋白S18 13的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人核糖体蛋白S18-10。由于如上所述人核糖体蛋白S18-10蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人核糖体蛋白S18-10蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人核糖体蛋白S18-10蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人核糖体蛋白S18-10以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人核糖体蛋白S18-10的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人核糖体蛋白S18-10的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人核糖体蛋白S18-10的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人核糖体蛋白S18-10的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人核糖体蛋白S18-10的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人核糖体蛋白S18-10异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中946-1212位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1529位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人核糖体蛋白S18-10蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人核糖体蛋白S18-10蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人核糖体蛋白Ｓ１８－１０，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]