藻蓝蛋白在制备抗胰腺癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及藻蓝蛋白在胰腺癌治疗中的用途。通过体内外实验证实，藻蓝蛋白能显著抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵入，表明能够应用在胰腺癌的治疗以及制备抗胰腺癌的药物中。

Application of phycocyanin in the preparation of anti pancreatic cancer drugs

The present invention relates to the use of phycocyanin in the treatment of pancreatic cancer. In vivo and in vitro experiments confirm that phycocyanin can significantly inhibit the proliferation, migration and invasion of pancreatic cancer cells, indicating that it can be applied in the treatment of pancreatic cancer and in the preparation of anti pancreatic cancer drugs.

【技术实现步骤摘要】
藻蓝蛋白在制备抗胰腺癌药物中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及藻蓝蛋白在制备抗胰腺癌药物中的应用。
技术介绍
胰腺癌(pancreaticcancer，PC)是常见的消化系统恶性肿瘤之一，来源于胰腺组织中的转化细胞，具有发病隐匿、恶性程度高、病程进展快、高致死等特点。该病总体患者的1年相对生存率小于25％，而5年相对生存率小于6％，其中原位癌的5年生存率约为20％，局部晚期和转移性癌的中位生存期分别约是10个月和6个月。有些患者在确诊时就已经病入膏肓，只有数天或数周生存时间。在癌症导致的相关死亡人数中，胰腺癌在美国名列第四，全球第八，并且在主要临床癌症中其死亡率是最高的。目前，胰腺癌的治疗以手术为主，根治性手术切除是现阶段唯一可以治愈胰腺癌的方法。然而由于大多数患者就诊时已属中晚期，失去了手术切除的机会，故非手术治疗(如化疗)在胰腺癌的综合治疗中有着十分重要的地位。化疗是目前胰腺癌的主要辅助治疗手段，吉西他滨是治疗局部进展期及转移性胰腺癌的一线药物。但是吉西他滨存在临床应答率低、固有或获得性耐药等问题，导致吉西他滨单药化疗疗效并不理想。因此，提高胰腺癌的早期诊断率，抑制肿瘤的生长和远处转移，提高药物的治疗效果，成为改善胰腺癌患者预后的关键因素。藻蓝蛋白(phycocyanin，PC)主要存在于蓝藻(Cyanophyta)、红藻(Rhodophyta)、隐藻(Cryptophyta)和少数甲藻(Pyrrophyta)中，是这些藻类进行光合作用的捕光色素之一。分离纯化的藻蓝蛋白在溶液中呈亮蓝色，并发出紫色荧光，在波长620nm具有特异吸收峰，可以A620/A280表示其纯度。藻蓝蛋白既可以作为天然色素广泛应用于食品、化妆品、染料等工业，同时也具有强烈荧光可制成荧光试剂、荧光探针、荧光示踪物质等，用于临床医学诊断、免疫化学及生物工程等研究领域中。藻蓝蛋白的药理活性非常广泛，但目前尚未见有藻蓝蛋白在治疗胰腺癌方面的研究报道及临床应用。
技术实现思路
本专利技术公开了藻蓝蛋白的一种新用途，即在抗胰腺癌药物中的应用。本专利技术通过体内外实验证实，藻蓝蛋白能显著抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵入，表明能够应用在胰腺癌的治疗以及制备抗胰腺癌的药物中。本专利技术的藻蓝蛋白可以来源于蓝藻(Cyanophyta)、红藻(Rhodophyta)或隐藻(Cryptophyta)，优选蓝藻(如螺旋藻等)的新鲜藻体或干藻粉。藻蓝蛋白制备方法如下：藻体悬浮于50mmol/L磷酸盐缓冲中，反复冻融，4℃离心(10000g×10min)，上清加入固体硫酸铵至50％饱和度，4℃静置过夜，离心(10000g×10min)，收集沉淀，溶解于少量磷酸盐缓冲液(10mmol/L，pH7.0)中，并在此缓冲液中充分透析，透析液过滤，上样于上述磷酸盐缓冲液平衡的DEAE-SepharoseFF柱，用含0-1mol/LNaCl梯度的磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱，收集蓝色洗脱液，收集的洗脱液透析后，上样于上述同样缓冲液平衡的羟基磷灰石柱，10-300mmol/L梯度的磷酸盐缓冲液(pH7.0)梯度洗脱，收集A620/A280大于4的蓝色洗脱液，透析后浓缩或冻干即为藻蓝蛋白。上述抗癌药物可以是由有效应用量的藻蓝蛋白和药学上的载体组成的药物组合物。上述抗癌药物可以是由有效应用量藻蓝蛋白和药学上的赋形剂组成的药物组合物。通常可以将本专利技术所述藻蓝蛋白配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为4-8，pH值也可随被配制物质的性质以及待治疗的病症有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括但不限于：肌内，腹膜内，皮下、皮内或局部给药。可以将藻蓝蛋白与合适的药学上可接受的载体联用。这类药物组合物含有治疗有效量的药物和药学上可接受的载体或赋型剂。这类载体包括但不限于盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本专利技术的藻蓝蛋白可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。附图说明图1藻蓝蛋白对胰腺癌细胞增殖的抑制作用图2藻蓝蛋白对胰腺癌细胞迁移的抑制作用图3藻蓝蛋白对胰腺癌细胞运动的抑制作用图4藻蓝蛋白对人胰腺癌PANC-1细胞裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用图5藻蓝蛋白对胰腺癌细胞PANC-1在裸鼠中转移的抑制作用具体实施方式以下将通过具体的实施例对本专利技术进行描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本专利技术范围的限制。在本专利技术中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本专利技术。应理解，这些实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。实施例1藻蓝蛋白对胰腺癌细胞增殖的抑制作用胰酶消化对数生长期生长状态良好的胰腺癌细胞PANC-1和Capan-1，分别以10000个/孔的密度接种于96孔板，继续培养24h，然后采用倍比稀释法给予0.15625、0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40(μM)9个浓度梯度的藻蓝蛋白以及不加藻蓝蛋白的对照组处理，继续培养72h后，每孔加入等体积celltiter-gloTM试剂，缓慢振荡平板15min后，以多功能酶标仪读取各孔化学发光信号(CL)；细胞抑制率％(inhibition)＝(1-药物处理组平均CL值/细胞对照孔平均CL值)×100％；采用graphpadprism5.0以细胞抑制率对藻蓝蛋白的浓度对数作四参数非线性回归拟合曲线，计算得到细胞的半数抑制浓度(halfinhibitionconcentration，IC50)。从图1可以看出，在作用72h条件下，随着浓度的升高，藻蓝蛋白对细胞生长的抑制率也逐渐升高，对PANC-1细胞以及Capan-1细胞的IC50分别为13.3μM和9.3μM。实施例2藻蓝蛋白对胰腺癌细胞迁移的抑制作用采用细胞划痕实验。取处于对数生长期生长状态良好的胰腺癌细胞PANC-1，以5×105个细胞/孔，接种于6孔板中，培养过夜；第二天划痕，用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，分别给予5、10、20、40μM藻蓝蛋白(0.2％低血清培养基配制)以及对照组(仅含0.2％无血清培养基)处理，放入37度5％CO2培养箱，培养。按0，24，48，72小时时间点选取细胞孔，拍照记录。从图2可以看出，各个时间点横向比较，随着藻蓝蛋白浓度的提高，细胞迁移的距离越来越小；纵向比较，对照组相随着时间延长，细胞迁移非常明显，72h细胞已达融合，而给予藻蓝蛋白的各组，细胞迁移变化很小，特别是40μM藻蓝蛋白组。由此可见，藻蓝蛋白对胰腺癌细胞迁移具有明显的抑制作用。实施例3藻蓝蛋白对胰腺癌细胞运动的抑制作用将处于对数生长期生长状态良好的PANC-1细胞以2000个/孔接种于黑壁亮底的96孔板上；培养24h后，去掉上清，每孔加入100μL以1640培养液配制的浓度为1μg/mL的CellTrackerTMGreenBODIPY，放入37℃，5％CO2培养箱中负载30min；去除培养液，本文档来自技高网...

【技术保护点】
藻蓝蛋白在制备用于治疗胰腺癌药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.藻蓝蛋白在制备用于治疗胰腺癌药物中的用途。2.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧瑜，廖高勇，方铭瑜，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32