本发明专利技术提供一种促凝血酶原激酶试剂，其含有组织因子、磷脂和用作组织因子途径抑制剂（ＴＦＰＩ）阻断剂的多磷酸盐。本发明专利技术还提供一种用于促进凝血的含有多磷酸盐的组合物，以及一种用于凝血试验的试剂，其含有多磷酸盐和凝血的活化剂。本发明专利技术还公开使用含有多磷酸盐的组合物停止或减缓伤口出血和纤溶的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】凝血及纤溶级联系统的调控剂联邦政府资助的研究或发展本申请部分地由以下研究资金和合约资助NIH (NHLBI和NIAID) 资金No. P50 HL45402、 R01 HL47014和R01 AI23259。美国政府可以享 有本专利技术中的权利。
技术介绍
图15为凝血级联系统的示意图。在图中，用罗马数字标示各种凝血 因子(即，用VII表示凝血因子VII)。当血液和某些人造表面接触时，启 动内级联系统(也被称为血液凝固的接触途径)。当血管损伤导致组织因子(TF)(也称为凝血因子m)暴露时启动外途径(也被称为血液凝固的组织因子途径)。虚线箭头表示外途径和内途径之间的交叉点。两条途径在将凝 血因子X活化到Xa的位置处会聚。凝血因子Xa在将凝血因子VII进一 步活化到Vila中起作用。活性的凝血因子Xa使凝血酶原水解并活化为 凝血酶。然后，凝血酶能够活化凝血因子XI、 VIII和V，进一步推进级 联反应。最终，凝血酶的作用是将纤维蛋白原转变为形成凝块的纤维蛋 白。纤溶系统的作用是通过一系列高度调控的酶反应分解纤维蛋白凝 块。除了在止血中的作用外，纤溶系统的组分还涉及到炎症、肿瘤侵袭、 组织修复和血管生成期间胞外基质的降解和细胞的迁移(参见文献)。 图1为纤维蛋白溶解中所涉及的蛋白和其相互作用的示意图。包括两个 主要阶段血纤维蛋白溶酶原的活化以及随后纤维蛋白的降解。血纤维 蛋白溶酶原的活化由两种丝氨酸蛋白酶(即，组织型血纤维蛋白溶酶原活 化剂(tPA)或尿激酶型血纤维蛋白溶酶原活化剂(uPA))中任一种的作用产 生。这些血纤维蛋白溶酶原活化剂的酶活性被血纤维蛋白溶酶原活化剂 抑制剂PAI-1 (serpin (丝氨酸蛋白酶抑制剂)超家族的成员)所抑制。血纤 维蛋白溶酶原活化的产物是丝氨酸蛋白酶(血纤维蛋白溶酶)，其活性由另 一种serpin: a2-抗血纤维蛋白溶酶(ot2-AP)调控。血纤维蛋白溶酶将纤维 蛋白蛋白分解为可溶的纤维蛋白降解产物(FDP)。最近，已经有纤维蛋白 溶解的羧肽酶抑制剂的记载。这种抑制剂用作凝血和纤溶之间的连接， 其主要的生理学活化剂是凝血酶(特别是与血栓调节蛋白 (thrombomodulin)结合的凝血酶)。因此，这种分子被命名为凝血酶活化的 纤溶抑制剂(TAFI)。需要注意的是，由于这种抑制剂是被几个研究组同 时发现的，因此它也被称为羧肽酶U、羧肽酶R和血浆羧肽酶B。 TAFI 以羧肽酶原的形式循环，其通过有限的蛋白水解转化为活性的羧肽酶 (TAFIa)。组织因子途径抑制剂(TFPI)是血液中存在的生理学上重要的凝血抑 制剂之一。当血液凝固开始时，TFPI与凝血因子Xa(FXa)的活性位点非 常紧密的结合，并且抑制其酶活性。然后，被抑制的TFPI: FXa复合物 可以与凝血因子VIIa(FVIIa)和组织因子(TF)的复合物结合，从而得到被 完全抑制的四分子复合物(TF: FVIIa: TFPI: FXa)。这样有效地阻断了 进一步引发血液凝固，这被认为对于在受伤后限制血液凝块的大小很重 要。在体内，只有少量的TFPI以游离TFPI的形式在血浆中循环。(在 血浆中存在另一个TFPI池，其与脂蛋白颗粒共价结合，但是它基本上是 无活性的。)在健康的正常人中，多数活性的TFPI结合于内皮细胞表面 或存在于血小板中。与其他凝血蛋白一样，个体与个体间血浆中TFPI的水平存在差异。 TFPI水平的正常变化通常对常规凝血试验的影响有限，这是由于以下两 个原因。第一，大部分正常的血浆样本所含活性的TFPI的水平相当低 (l-20ng/ml)。第二，当凝固时间较短时，天然凝血抑制剂如TFPI对血浆 凝固时间的影响被减弱。由于全球凝血功能的常规筛选试验(例如凝血酶原时间(PT)试验)通 常被设计为非常快速地凝血(PT试验中正常凝血时间的范围通常为 10~15秒)，因此这些试验只是最低限度地被TFPI水平的正常变化所影 响。然而，当血桨样本含有异常高水平的TFPI时，当凝血功能的其他缺 陷延长了凝血时间并使得TFPI具有更大影响时，或者在特殊的凝血试验 中，在体外TFPI对凝血时间的影响可能变得显著。通常采用抗凝血剂对具有血栓形成经历的患者进行治疗。通常，开 始时通过注射肝素对这些患者进行治疗，然后逐渐转换为口服抗凝血剂 治疗(coumadin)以进行长期控制。用Coumadin进行治疗的患者的抗凝血 状态通常通过PT试验进行监控，其结果被用于调整Coumadin剂量。多 种研究已经记载了在肝素和Coumadin治疗之间的转换期间PT结果的潜 在可变性。在对来自进行肝素治疗的患者获得的样本进行的凝血试验中， 一种可能的干扰来源是血浆TFPI水平的提高。出现这种情况是由于给予 肝素导致与内皮结合的TFPI池释放到血浆中。在具有增强的TFPI 活性的患者中，延长的凝血时间会被误解为凝血因子缺陷或者被归因为 口服抗凝血剂(coumadin)治疗的效果。一些研究已经证实，血浆TFPI水平的提高，特别是在进行肝素治疗 的患者中，会严重干扰对血浆凝固数据的正确解释。对于用于测量血浆 凝固因子VIIa水平的基于可溶组织因子的凝血试验而言，尤其是这种情 况。因此，提高的TFPI的抗凝血作用可以延长在这种凝血试验中 所观察到的凝血时间，从而导致血浆凝固因子Vila的测量错误的降低。 抑制的抗-TFPI抗体已经被成功地用于在这种试验中消除来自高水平的 TFPI的干扰。然而，抗-TFPI抗体价格昂贵并且必须以高浓度使 用以完全阻断TFPI功能，这限制了它们的普遍应用。因此，非常需要--种简单、廉价的方法来阻断凝血试验中的TFPI抗凝血功能。凝血酶原时间(PT)试验被广泛地用于监控采用香豆素的口服抗凝血 治疗，其是血液凝固系统的常规筛选试验和特定凝血因子试验的基础。 使用PT所得到的凝血时间主要取决于依赖维生素K的凝血因子II (凝血 酶原)、VII和X的血浆水平以及两种不依赖维生素K的蛋白(即，凝血因 子V和纤维蛋白原)的水平。香豆素治疗抵消维生素K羧化酶/还原酶循 环，从而抑制谷氨酸残基向y-羧基谷氨酸的翻译后转化。依赖维生素K 的凝血因子在其Gla结构域中含有必要的Y-羧基谷氨酸。因此，接受香豆 素治疗的患者产生未羧化的依赖维生素K的凝血因子，其具有降低的促 凝血活性。这延长了PT，其原因主要是由于凝血因子II、 VII和X水平 的降低。成功的香豆素口服抗凝血治疗需要小心监控患者的PT，以获得 有效水平的抗凝血作用，同时最小化出血并发症(参见Hirsh等人的文献多年来，多磷酸盐被广泛用于多种商业应用，包括用于食品添加剂、 食品加工和水软化剂中。多磷酸盐还在牙科中被用于治疗牙周疾病， 并且有报道表明多磷酸盐具有抗菌活性。多磷酸盐已经被用于帮助重 组TFPI的重新折叠。无机多磷酸盐(polyP)是常见的聚合体，其由通过高能磷酐键连接的 磷酸残基形成。polyP可在自然环境中找到，并且已经被发现存在于细菌、 真菌、动物和植物细胞中，但是它在人类细胞中的存在仍然很少被研究 。在细菌和几种单细胞真核生物中，如锥体虫和顶复门寄生虫、绿藻 C/z/amj^/owo"(xy re/w/ an/W禾口禾占f夜菌D/c/yos^本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种促凝血酶原激酶试剂，其含有： （ｉ）ＴＦ， （ｉｉ）磷脂，和 （ｉｉｉ）ｐｏｌｙＰ ＴＦＰＩ阻断剂。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：詹姆斯H莫里西，斯特凡妮A史密斯，罗伯托多卡摩波，尼古拉J马奇，
申请(专利权)人：伊利诺斯大学理事会，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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