来源于SART-1的HLA-A2限制性肿瘤抗原肽制造技术

来源于ＳＡＲＴ－１的ＨＬＡ－Ａ２限制性肿瘤抗原肽及其功能上具有同等特性的衍生物；应用肿瘤抗原肽等的肿瘤预防剂或诊断剂；与肿瘤抗原肽相关的重组ＤＮＡ，重组肽和抗体及其应用；提呈肿瘤抗原肽的抗原提呈细胞及其应用；肿瘤抗原肽特异的细胞毒性Ｔ细胞及其应用。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及来源于SART-1的HLA-A2限制性肿瘤抗原肽。更具体而言，本专利技术涉及来源于SART-1的HLA-A2限制性肿瘤抗原肽及其功能上具有同等特性的衍生物，应用这些肿瘤抗原肽及其衍生物的体内、体外肿瘤治疗剂、预防剂或诊断药等。长期以来CTL攻击自身肿瘤细胞的靶分子不明确，但随着最近免疫学和分子生物学的发展逐步得到阐明。即，CTL应用T细胞受体(TCR)，通过识别叫做肿瘤抗原肽的肽与主要细胞相容性复合体Ⅰ类抗原(MHC Ⅰ类抗原，人的叫做HLA抗原)形成的复合体而攻击自身的肿瘤细胞。肿瘤抗原肽是肿瘤所特有的蛋白质，是肿瘤抗原蛋白质在细胞内合成后，经蛋白水解酶在细胞内分解而形成的。生成的肿瘤抗原肽在内质网内与MHC Ⅰ类抗原(HLA抗原)相结合而形成复合体，运输到细胞表面以提呈抗原。肿瘤特异的CTL识别这种以抗原提呈的复合体，通过细胞杀伤作用和淋巴因子的产生而发挥抗肿瘤作用。伴随着这一系列作用的阐明，通过利用肿瘤抗原蛋白质或肿瘤抗原肽的所谓肿瘤疫苗可产生增强肿瘤患者体内肿瘤特异性CTL的治疗方法。肿瘤抗原蛋白质是1991年T.Boon等首次从人黑色素瘤细胞中鉴定出的名为MAGE的蛋白质(Science,254:1643,1991)。其后主要从黑色素瘤细胞中鉴定出几种肿瘤抗原蛋白质。鉴定出的黑色素瘤抗原有黑素细胞组织特异的蛋白质gp100(J.Exp.Med.,179:1005,1994),MART-1(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,91:3515,1994),酪氨酸酶(J.Exp.Med.,178∶489,1993)等黑素体蛋白质,不只在黑素瘤表达的、在各种癌细胞和正常睾丸细胞中表达的MAGE相关蛋白质群(J.Exp.Med.,179:921,1994)，具有肿瘤特异的氨基酸变异的β-カテニン(J.Exp.Med.,183:1185,1996)、CDK4(Science,269:1281,1995)等。另外，鉴定出的黑素瘤以外的肿瘤抗原蛋白质有HER2/neu(J.Exp.Med.,181:2109,1995),p53(突变型)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:14704,1996)等癌基因产物，CEA(J.Natl.Cancer.Inst.,87:982,1995)、PSA(J.Natl.Cancer.Inst.,89:293,1997)等肿瘤标志,HPV(J.Immunol.,154:5934,1995)、EBV(Int.Immunol.,7:653,1995)等病毒蛋白质等。在下列综述中对它们有详细论述-Immunol.Today,18:267,1997；J.Exp.Med.,183:725,1996；Curr.Opin.Immunol.,8:628,1996等。为了应用肿瘤抗原蛋白和肿瘤抗原肽进行肿瘤的治疗和诊断，有必要鉴定出广泛适应于扁平上皮癌(食道癌、肺癌等)的肿瘤抗原，因为这种癌的发生率远远高于黑色素瘤。由此本专利技术者们对编码来源于食道癌扁平上皮癌细胞的肿瘤抗原蛋白质进行了克隆，结果从黑色素瘤以外的肿瘤细胞中首次成功地克隆出编码新型肿瘤抗原蛋白质(SART-1)的基因，通过该SART-1鉴定出几种与HLA-A26抗原或HLA-A24抗原结合而提呈的肿瘤抗原肽部分(J.Exp.Med.,187:277,1998，国际公开第97/46676号)。但是该SART-1是否有与HLA-A2抗原结合而提呈的肿瘤抗原肽部分，即是否存在由SART-1来源的HLA-A2限制性肿瘤抗原肽尚未明了。本专利技术者们为了检测SART-1分子中是否存在HLA-A2限制性的肿瘤抗原肽进行了以下试验。首先，本专利技术者们从组织学分型上属于扁平上皮癌的食道癌手术标本中的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)中建立了HLA-A2限制性的CTL细胞株，将之命名为YK-EC(保藏号FERM BP-6726)。接着，用SART-1 cDNA的重组质粒和HLA-A0201 cDNA的重组质粒共转染VA-13细胞，将其转染。作用于先前的YK-EC后，发现YK-EC活化产生IFN-γ。由该结果可初步表明SART-1中存在HLA-A2限制性的肿瘤抗原肽。本专利技术者们又尝试鉴定与HLA-A2结合而被提呈的SART-1来源的部分肽，结果表明序列号1～序列号6氨基酸序列所示的肽存在肿瘤抗原肽活性。本专利技术是在上述基础上来完成的。即，本专利技术提供(1)来源于SART-1的部分肽、且与HLA-A2抗原结合而被细胞毒性T细胞所识别的肿瘤抗原肽，或者其功能上具有同等特性的衍生物；(2)上述(1)的肿瘤抗原肽或其功能上具有同等特性的衍生物，其选自包含序列号1～34任一氨基酸序列全部或其部分的序列；(3)上述(2)的肿瘤抗原肽或其具有同等功能特性的衍生物，它选自包含序列号1～6任一氨基酸序列的全部或其部分的序列；(4)上述(2)的肿瘤抗原肽衍生物，它选自包括序列号1～34任一氨基酸序列中第2位和/或C末端的氨基酸残基被其它氨基酸残基置换了的序列的全部或其部分的序列； (5)上述(4)的肿瘤抗原肽衍生物，它选自包含序列号1～6任一氨基酸序列中第2位和/或C末端的氨基酸残基被其它的氨基酸所置换了的氨基酸序列的全部或其部分的序列；(6)上述(4)的肿瘤抗原肽衍生物，它选自包含序列号1～34任一氨基酸序列中第2位被亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、异亮氨酸或谷氨酸所替代的和/或C末端的氨基酸残基被缬氨酸或亮氨酸所替代的序列的全部或一部分的序列；(7)上述(6)的肿瘤抗原肽衍生物，它选自包含序列号35～40中任一氨基酸序列的全部或其部分的序列；(8)肿瘤治疗剂或预防剂，它至少有1种有效成分选自上述(1)～(7)任一项中的肿瘤抗原肽及其衍生物；(9)重组DNA，它是至少包含一种编码上述(1)～(7)任一项中肿瘤抗原肽或其衍生物的DNA；(10)使上述(9)中的重组DNA表达而得到的多肽；(11)肿瘤治疗剂或预防剂，它以上述(9)的重组DNA或上述(10)的多肽作有效成分；(12)肿瘤诊断药，它含有上述(1)～(7)任一项中的肿瘤抗原肽或其衍生物，或包含上述(10)的多肽；(13)与上述(1)～(7)任一项中的肿瘤抗原肽或其衍生物特异性结合的抗体；(14)抗原提呈细胞，它能将HLA-A2抗原与上述(1)～(7)任一项中的抗原肽或其衍生物的复合体提呈到来源于肿瘤患者的具有独立的抗原提呈能力的细胞表面；(15)上述(14)的抗原提呈细胞，它是将上述(9)的重组DNA或上述(10)的多肽摄取到肿瘤患者来源的具有独立抗原提呈能力的细胞中而得到的；(16)肿瘤治疗剂，它以上述(14)或(15)的抗原提呈细胞为有效成分；(17)细胞毒性T细胞，它能特异性识别HLA-A2抗原与上述(1)～(7)任一项中的肿瘤抗原肽或其衍生物形成的复合体；(18)肿瘤治疗剂，它以上述(17)的细胞毒性T细胞作有效成分；(19)上述(17)的细胞毒性T细胞YK-EC，其保藏号为FERMBP-6726；以及(20)肿瘤抗原肽或肿瘤抗原蛋白质的鉴定方法，其特征是应用(19)的YK-EC。这里的肽合成可按照通常肽化学中应用的方法进行。该公开的方法可按下列文献中记载的方法肽合成(本文档来自技高网...

【技术保护点】
肿瘤抗原肽或其功能上具有同等特性的衍生物，它是来源于ＳＡＲＴ－１的部分肽，且与ＨＬＡ－Ａ２抗原结合后能被细胞毒性Ｔ细胞所识别。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊东恭悟，小林照忠，
申请(专利权)人：株式会社绿多肽，
类型：发明
国别省市：JP[日本]