用能产生人IgGl重链－k轻链小鼠作为制备人源化单克隆抗体和应用制造技术

生物工程领域中，用能产生人ＩｇＧ１重链－κ轻链的小鼠作为制备人源化单克隆抗体和应用。特征：在小鼠轻链κ恒定区和重链ｇ１恒定区基因位点上分别敲入人κ链和ｇ１恒定区基因；用该小鼠制备的人源化单克隆抗体是抗体的恒定区与人抗体完全相同，而可变区为鼠源，制备步骤：小鼠κ链和ｇ１链基因组的获得；敲入载体的构建；在ＥＳ细胞中进行同源重组；轻、重链转化小鼠的产生；轻、重链小鼠进一步交配，得到完整嵌合基因的小鼠；应用：取抗原免疫嵌合小鼠的脾脏与骨髓细胞进行融合、培养；筛选产生抗原特异性的人源化单克隆抗体的杂交瘤；制备抗原特异性的人源化单克隆抗体。优点：技术操作简便；重组正确率高；不影响抗体表达时可变区的基因重排模式，易获得高亲和力的人－鼠嵌合抗体。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到一种人源化小鼠单克隆抗体的制备和应用，属于生物工程领域。
技术介绍
单克隆抗体在肿瘤、病毒性感染、类风湿性关节炎、心血管疾病以及器官移植等疾病诊断、治疗及预防方面拥有广阔的应用前景，因此成为目前生物技术药物领域最引人注目的研究热点。抗体是动物免疫系统在外来抗原刺激下产生的蛋白质，其特异性取决于抗原分子的决定簇。由于各种抗原分子具有很多决定簇，所以免疫动物产生的抗体实际上是多种抗体的混合物。要通过这种方法制备抗体是不可行的，原因是抗体的含量少、分离也很困难，且动物抗体注入人体会产生严重的过敏反应。通过小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞杂交得到的杂交瘤细胞，能在体外大量生产单一成分的抗体，只识别一种特定的抗原，称为单克隆抗体。单克隆抗体技术由英国生化学家米尔斯坦(Milstein)和德国免疫学家科勒(Kohler)于1975年首度研制。单抗药物包括单抗制品和单抗偶联物，由于单抗对相应靶分子(抗原)具有高度的特异性，所以单抗药物已用于肿瘤、病毒性感染、类风湿性关节炎、心血管疾病以及器官移植中的抗排异反应。研发中的单抗药物大多针对肿瘤，原因在于单抗药物存在的主要问题包括免疫学和药本文档来自技高网...

【技术保护点】
用能产生人ＩｇＧ１重链－κ轻链小鼠作为制备人源化单克隆抗体，包括：基因克隆、载体构建、转化细胞、转化小鼠、表达筛选、小鼠免疫、细胞融合、抗体制备，其特征在于：ａ）所采用的小鼠是在小鼠的Ｉｇ轻链κ恒定区基因和Ｉｇ重链ｇ１恒定区基因位点 上，分别敲入人的Ｉｇκ恒定区和ＩｇＧ１恒定区基因，而培育产生人ＩｇＧ１重链－κ轻链的小鼠；ｂ）所制备的人源化单克隆抗体是，其抗体的恒定区与人抗体完全相同，而与抗原结合的可变区则是与小鼠抗体相同的人－鼠嵌合抗体；ｃ）筛选表达具 有人ＩｇＧ１重链－κ轻链的嵌合抗体鼠；ｄ）通过抗原免疫、细胞融合获得可分泌人源化嵌合型单克隆抗体...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韩华，李元，李别虎，薛小平，黄庆生，王延竹，韩文君，
申请(专利权)人：大连帝恩生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]