一种克服滞后污染的PCR方法技术

一种能克服滞后污染的聚合酶链式反应方法，其步骤依次包括：　　　　（１）用限制性内切酶处理ＰＣＲ反应液；　　　　（２）ＤＮＡ模板变性解链；　　　　（３）引物与模板退火；　　　　（４）在ＤＮＡ聚合酶催化下延伸合成互补ＤＮＡ链；　　　　（５）按步骤（２）－（４）循环进行合成反应；　　　　在设计正引物或者反引物时引进错配碱基，使扩增产物含有目标基因所没有的限制性内切酶识别顺序。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学技术，特别是涉及聚合酶链式反应方法。
技术介绍
聚合酶链式反应(PCR)是一种快捷、高效的扩增特定DNA的方法。根据PCR的基本原理经过25-30循环扩增目标基因片段将增加800万至2亿5千万倍。由于扩增产物和样品中的目标基因均可作为扩增模板，痕迹量乃至几个拷贝扩增产物DNA片段的滞后污染，即会造成比交叉污染严重得多的麻烦。为了减少滞后污染的机会通常需采取严格的物理防范措施(J.L.Hartley等，PCR Method andapplications，1993，3，S10-S14)，例如将PCR反应液制备区与PCR产物检测区分开甚至分二个房间，应用专门的PCR操作箱和专用的移液管，应用带气雾阻挡物的PCR专用移液头，用特制的能破坏DNA的试剂清洁操作台表面及各种器具等等。为了减少气流振荡造成微量反应液扩散，有人甚至主张在PCR反应完成后，先将试管冷冻至液体结成冰，然后再打开管盖。各种物理措施尽管必要，但滞后污染仍防不胜防，为此发展了各种化学和生物化学方法，如光敏DNA交联剂、核酸酶和脱氧尿嘧啶糖苷酶(UDG)方法等。至今，在试剂盒中被采用的是UDG方法，该本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐定邦，朱德芬，谢文凯，徐文慧，
申请(专利权)人：徐定邦，徐文慧，
类型：发明
国别省市：