一种用于修复骨缺损的细胞层/纤维膜复合膜片的制备方法技术

本发明专利技术属于骨组织工程领域，具体涉及一种用于修复骨缺损的细胞层/纤维膜复合膜片的制备方法，通过静电纺丝法制备PLLA/明胶纳米纤维，再用交联剂使纳米纤维网交联，然后在纤维膜上种植扩增骨髓间充质干细胞制备细胞层从而获得细胞层/纤维膜复合膜片，并对多层CSM膜片进行复合得到三维结构。本发明专利技术解决了目前纳米纤维网造成大面积的骨缺损以及细胞难以渗入密集纤维网，具有良好的亲水性和良好的降解率。

Preparation of a cell layer / fibrous membrane composite membrane for repairing bone defects

The invention belongs to the field of bone tissue engineering, in particular to a cell layer for bone fiber membrane composite membrane preparation method, preparation of PLLA/ gelatin nanofibers by electrospinning, then crosslinking agent make nanometer fiber net crosslinking, then in fiber membrane implant amplification of bone marrow mesenchymal stem cell preparation cell layer to obtain cell layer / fiber membrane composite diaphragm, and the diaphragm are three-dimensional structure of multilayer CSM composite. The invention solves the defect of large scale bone defect caused by the current nanofiber net, and the cell is hard to penetrate into dense fiber net, so it has good hydrophilicity and good degradation rate.

【技术实现步骤摘要】
一种用于修复骨缺损的细胞层/纤维膜复合膜片的制备方法
本专利技术属于骨组织工程领域，具体涉及一种用于修复骨缺损的细胞层/纤维膜复合膜片的制备方法。
技术介绍
目前临床上用于修复或替换缺损骨缺损的治疗方法有三种：自体骨移植、异体骨移植和骨组织工程。自体骨移植会带来新的创伤和无法满足大范围骨缺损需求。异体骨移植因免疫排斥以及供体严重不足受到限值，骨组织工程的方法可以避免以上两种问题，不仅可以在体外大量复制，合适的材料选择可以减轻甚至抑制排异和炎症反应。目前骨组织研究主要集中于生物支架材料、种子细胞及因子的研究。正确的支架设计对骨组织工程的成功至关重要，理想的骨修复材料支架应具有互通的多孔结构，保证细胞的渗透和成长：支架形态应促进(充质干细胞)MSC的诱导分化；良好的生物相容性和可降解性，降解产物无毒。为了使纳米纤维结构模拟天然骨细胞外基质(ECM)，静电纺丝技术被广泛应用于生物支架材料制备。然而纳米纤维网也暴露了一些缺点，包括制造大面积的骨缺损和细胞难以渗入密集的纳米纤维网中。主要原因是因为纤维的密度和电纺纤维膜的清水性和低降解率的原因。近年来，构建三维组织最有吸引力的方法是多层细胞片，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于修复骨缺损的细胞层/纤维膜复合膜片的制备方法，其特征在于：其制备方法按照如下步骤：s1，将高分子聚合物聚(L‑丙交酯)(PLLA)和明胶溶于有机溶液中，配制成质量百分浓度为20‑50％(W/V)的高分子混合溶液，室温连续搅拌24h制得共混溶液；s2，将共混溶液分别装入10个10ml注射器中，加上5号不锈钢针头，溶液推进速度0.5‑5mL/h，电压10‑30KV，接收距离10‑25cm，采用铜板或者铜网格作为接收器，分别得到随机纳米纤维膜和巢状纳米纤维膜，室温真空干燥24‑48小时，得到纤维膜材料；s3，将纤维膜材料浸泡于含有交联剂的溶液中，2‑24小时后，取出材料，室温真空干燥24‑4...

【技术特征摘要】
1.一种用于修复骨缺损的细胞层/纤维膜复合膜片的制备方法，其特征在于：其制备方法按照如下步骤：s1，将高分子聚合物聚(L-丙交酯)(PLLA)和明胶溶于有机溶液中，配制成质量百分浓度为20-50％(W/V)的高分子混合溶液，室温连续搅拌24h制得共混溶液；s2，将共混溶液分别装入10个10ml注射器中，加上5号不锈钢针头，溶液推进速度0.5-5mL/h，电压10-30KV，接收距离10-25cm，采用铜板或者铜网格作为接收器，分别得到随机纳米纤维膜和巢状纳米纤维膜，室温真空干燥24-48小时，得到纤维膜材料；s3，将纤维膜材料浸泡于含有交联剂的溶液中，2-24小时后，取出材料，室温真空干燥24-48小时，并在4℃干燥箱中保存备用，得到交联纤维膜材料；s4，将SD大鼠骨髓间质细胞在DMEM培养基中，在温度37℃、湿度80-100％，5％CO2的培养箱中培养；s5，将纤维膜材料切成块状，用中空塑料盖固定，然后置于24孔细胞培养板中；s6，将0.25％的胰蛋白酶和0.02％乙二胺四乙酸将纤维膜进行消化传代，然后接种细胞，接种量为1×105个/每片；s7，将成骨诱导培养基加入每孔中，每2天换一次；保持细胞在不同纳米纤维网中附着增值3-7天后，从培养板中取出；s8，将3-5个细胞层/纤维膜复合膜片堆叠在一起构建三维多层细胞层/纤维膜复合膜片结构，用PBS缓冲溶液冲洗3-5次，然后用2.5-5％戊二醛溶液固定；s9，采用去离子水冲洗3次后，采用梯度的乙醇水溶液脱水清洗三维多层细胞层/纤维膜复合膜片结构，风干过夜，得到产品。2.根据权利要求1所述的一种用于修复骨缺损的细胞层/纤维膜复合膜片的制备方法，其特征在于：所述s1中的聚(L-丙交酯)的重均分子量为7-20万。3.根据权利要求1所述的一种用于修复骨缺损...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟庆怡，许杉杉，赵亮亮，黄健翔，
申请(专利权)人：无锡中科光远生物材料有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32