切割来自着色性干皮病基因的DNA靶序列的大范围核酸酶变体及其应用制造技术

一种Ｉ－ＣｒｅＩ变体，其具有至少两种置换，所述两种置换各自位于Ｉ－ＣｒｅＩ上第２６～４０和４４～７７位的ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ核心结构域的两个功能性亚结构域中，所述变体能够切割来自着色性干皮病基因的ＤＮＡ靶序列。所述变体和衍生产物用于预防和治疗所述着色性干皮病的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

【技术保护点】
一种Ｉ－ＣｒｅＩ变体，其特征在于，其具有至少两种置换，分别位于Ｉ－ＣｒｅＩ第２６～４０位和第４４～７７位的ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ核心结构域的两个功能性亚结构域中，所述变体能够切割来自着色性干皮病基因的ＤＮＡ靶序列，并且可通过至少包含下述步骤的方法获得：　（ａ）构造第一系列的Ｉ－ＣｒｅＩ变体，该第一系列具有至少一种位于Ｉ－ＣｒｅＩ第２６～４０位的ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ核心结构域的第一功能性亚结构域中的置换，　（ｂ）构造第二系列的Ｉ－ＣｒｅＩ变体，该第二系列具有至少一种位于Ｉ－ＣｒｅＩ第４４～７７位的ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ核心结构域的第二功能性亚结构域中的置换，　（ｃ）挑选和／或筛选来自步骤（ａ）的第一系列变体，其能够切割突变体Ｉ－ＣｒｅＩ位点，其中（ｉ）在所述Ｉ－ＣｒｅＩ位点中第－１０～－８位的核苷酸三联体已经替换为存在于着色性干皮病基因上的基因组ＤＮＡ标靶第－１０～－８位的核苷酸三联体，并且（ｉｉ）第＋８～＋１０位的核苷酸三联体已经替换为存在于所述基因组标靶中第－１０～－８位的核苷酸三联体反向互补序列，　（ｄ）挑选和／或筛选来自步骤（ｂ）的第二系列变体，其能够切割突变体Ｉ－ＣｒｅＩ位点，其中（ｉ）在所述Ｉ－ＣｒｅＩ位点第－５～－３位的核苷酸三联体已经替换为存在于步骤（ｃ）中的所述基因组标靶中第－５～－３位的核苷酸三联体，并且（ｉｉ）第＋３～＋５位的核苷酸三联体已经替换为存在于所述基因组标靶中第－５～－３位的核苷酸三联体反向互补序列，　（ｅ）挑选和／或筛选来自步骤（ａ）的第一系列变体，其能够切割突变体Ｉ－ＣｒｅＩ位点，其中（ｉ）所述Ｉ－ＣｒｅＩ位点第＋８～＋１０位的核苷酸三联体已经替换为存在于步骤（ｃ）中的所述基因组标靶中第＋８～＋１０位的核苷酸三联体，并且（ｉｉ）第－１０～－８位的核苷酸三联体已经替换为存在于所述基因组标靶中第＋８～＋１０位的核苷酸三联体反向互补序列，　（ｆ）挑选和／或筛选来自步骤（ｂ）的第二系列变体，其能够切割突变体Ｉ－ＣｒｅＩ位点，其中（ｉ）所述Ｉ－ＣｒｅＩ位点第＋３～＋５位的核苷酸三联体已经替换为存在于步骤（ｃ）中的所述基因组标靶中第＋３～＋５位的核苷酸三联体，并且（ｉｉ）第－５～－３位的核苷酸三联体已经替换为存在于所述基因组标靶中第＋３～＋５位的核苷酸三联体反向互补序列，　（ｇ）在单个变体中组合来自步骤（ｃ）和步骤（ｄ）的两个变体的第２８～４０位和第４４～７０位的突变，以得到一种新颖的可切割序列的同...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：西尔万阿尔努，克里斯托夫佩雷米绍，朱莉安娜斯米特，
申请(专利权)人：赛莱提斯，
类型：发明
国别省市：FR[法国]