基于阿凡曼菌素的活性要素、相关的菌株和它们的制备方法, 以及含有它们的兽用组合物技术

通过进行ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｖｅｒｍｒｔｉｌｉｓＡＴＣＣ５５２７８发酵，得到干燥的菌丝体，将其对动物，尤其是绵羊，口服给药，具有抗寄生虫活性。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术有关作畜牧学-兽医用途的抗寄生物产品，更具体地说，是有关基于阿凡曼菌素(avermectin)的活性要素，其生产的方法，相关的菌株，以及含有它们用于兽医用的组合物。阿凡曼菌素形成一族八个有16个碳原子的大环内酯抗生素，具有如下结构式 其中R5R26X阿凡曼菌素 A1aCH3C2H5-CH=CH-阿凡曼菌素 A1bCH3CH3-CH=CH-阿凡曼菌素 B1aH C2H5-CH=CH-阿凡曼菌素 B1bH CH3-CH=CH-阿凡曼菌素 A2aCH3C2H5 阿凡曼菌素 A2bCH3CH3 阿凡曼菌素 B2aH C2H5 阿凡曼菌素 B2bH CH3 阿凡曼菌素通过从Streptomyces avermitilis(ATCC 31271)开始以发酵而得到，并进一步地通过美国专利4，310，519中公开的方法以纯的形式得到，然后，单个的阿凡曼菌素即使是从它们中分离出来的，也表现出明显的不稳定性，因而，只有阿凡曼菌素B1衍生物在纯化其它七个同系物后，通过催化还原前述阿凡曼菌素的22-23位的键而得到，被称为阿凡曼菌素而化学名称为22，23-二氢阿凡曼菌素B1的一个衍生物已发现了实际应用。阿凡曼菌素是目前这些大环内酯抗生素用于畜牧学-兽医的主要形式，并被用于兽医预防给药，特别是以注射剂的形式。它的应用之一，用于犬丝虫病的胃涂护片剂形式，是已知的。当然，在分离唯一的阿凡曼菌素B1时纯化方面的复杂性，以及在氯化铑和三苯膦存在下进行的催化还原反应的相当高的成本，及最后包括制备和应用无菌形式的注射剂中的问题，使得该药剂十分昂贵。另外，不能以其本身形式注射给药是一很大弊端。另一方面，阿凡曼菌素在酸性环境明显的不稳定性排除了它们以非注射或适当保护形式开始的治疗应用。同时考虑产源微生物，StreptomycesavermitilisATCC31271，根据美国专利USP4310519所述培养和发酵，得到非常低产量的阿凡曼菌素，因之，阿凡曼菌素本身更广泛和更普遍应用的客观限制是明显的。现已意外地发现，它也是本专利技术的主要目的，通过给动物，如绵羊，口服给药通过发酵，只干燥，不经任何阿凡曼菌素的纯化步骤和/或分离和/或它们的化学改良得到的菌丝体，能达到与兽医活性有关的优良效果，即在被治疗动物上观察到胃肠圆线虫完全消失和其它寄生虫的明显减少。本专利技术的另一体现是，已发现用与先有技术中所用的ATCC31271相比，改良的菌株可提高总阿凡曼菌素的产量，根据本专利技术，该菌株为StreptomycesavermitilisGRL1926(ATCC55278)突变体，它能以已知方法，通过一系列由化学和物理试剂引起的遗传突变工程由上述菌株得到。另一体现是，本专利技术由具有抗寄生虫活性，用于畜牧学-兽医领域，尤其是治疗绵羊，适于口服给药的组合物而实现，该组合物的特征在于它含有作为活性成分，通过前述菌株发酵而得到的干燥的菌丝体，而干燥菌丝体的量为提供每千克动物体重总阿凡曼菌素至少为0.00001%，优选地在0.00001%至0.00008%之间的剂量。下列实施例举例说明本专利技术的菌株制备阿凡曼菌素以及各个菌丝体的获得。在此实施例中，菌株在美国典型培养物保藏中心的登记号为55278，并根据布达佩斯条约的规定在此保存。实施例ATCC55278菌株在含50ml培养介质A的5个250ml的Ertenmeyer烧瓶中生长，在以200rpm(2.5cm偏心)旋转的台上于28℃培育两天。然后，含有4升培养介质B的6升发酵物与4个烧瓶的内容物一起在下面操作条件下培育温度22-30℃搅拌200-1200RPM空气0.1-1.3升/升/分时间80-220小时然后，将培养物冷却并离心收集菌丝体，将其重新悬浮于3升冷水并再次离心。然后将潮湿的菌丝体饼在30-75℃真空干燥16-48小时。干燥完后，将菌丝体在磨中研磨至100-500目颗粒，给出下面的分析组成数据(微克/克干菌丝体)阿凡曼菌素A11.000-2.000阿凡曼菌素A28.000-4.550阿凡曼菌素B18.500-5.000阿凡曼菌素B23.000-6.0001克干菌丝体总阿凡曼菌素平均含量为19.000微克。上面两种培养介质A和B的组成如下培养介质(g/lt)AB蔗糖2090可溶性馏出液155花生粉817酵母提取物215碳酸钙153猪油122Burkholder溶液24泉水加至1升对本专利技术的干燥菌丝体进行了体内试验以检验其抗寄生虫活性试验112只重约50Kg，7-12月龄的羊用按前面实施例得到的1克干燥菌丝体(等于19mg总阿凡曼菌素)给药。从给药9和16天后，分析处理过的羊和10只未处理羊的粪便，以确定胃肠圆线虫(GSI)，绦虫和旋毛虫(trichnuri)的存在。SGI的存在以UPG(每克粪便卵数)测定。下面的表1、2和3报道试验结果，其中(-)表示不存在，而(+)表示寄生虫的存在。表1给药前寄生虫的存在处理过的动物SGI旋毛虫绦虫动物号年龄(每克粪(TRICH)(TAENIAS)(月)便卵数)17300+-28420+-38380-+49530-+57550-+611450-+79280--812310-+912750-+1010430-+118370-+127290++未处理的对照SGI旋毛虫绦虫动物号年龄(每克粪(TRICH)(TAENIAS)(月)便卵数)139180-+1411230-+1511450-+1611250++179310-+189420--199340-+208510-+2110430-+2210230-+表2给药后9天寄生虫的存在情况处理过的动物SGI旋毛虫绦虫动物号年龄(每克粪(TRICH)(TAENIAS)(月)便卵数)17150+-28380+-38180-+49210-+57350-+611400-+79180--812350-+912450-+1010230-+118120-+127290++未处理的对照SGI旋毛虫绦虫动物号年龄(每克粪(TRICH)(TAENIAS)(月)便卵数)139380-+1411430-+1511320-+1611510++179470-+189520--199240-+208440-+2110510-+2210290-+表3给药16天寄生虫的存在情况处理过的动物SGI旋毛虫绦虫动物号年龄(每克粪(TRICH)(TAENIAS)(月)便卵数)170--280--380-+490--570--6110--790--8120-+9120-+10100--1180-+1270++未处理的对照SGI旋毛虫绦虫动物号年龄(每克粪(TRICH)(TAENIAS)(月)便卵数)139350-+1411230-+1511520-+1611470++179550-+189320--199210-+208360-+2110460-+2210190-+试验2在本试验中，活性素剂量被减半，对12只重量约60Kg和12至14月龄的羊口服给药0.5克前面实施例的方法得到的干燥菌丝体。在这种情况下，在给药后15和30天，分析被处理的羊和10只对照羊的粪便，以确定其成虫杀灭活性，即测定是否也对寄生虫成虫而不仅仅对其卵存在抗寄生活性。分析结果在下面表4、5和本文档来自技高网...

【技术保护点】
口服的活性素，其特征在于其含有由制备阿凡曼菌素而产生的菌丝体。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：CM伦纳多，L贾卡莫，M吉乌塞皮，
申请(专利权)人：灵知股份有限公司，欧洲开发股份有限公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]