肠球菌属乳酸菌以及乳酸菌死菌体的制造方法技术

本发明专利技术提供了保持肠球菌属乳酸菌的生理活性的培养方法以及肠球菌属乳酸菌死菌体的制造方法。作为肠球菌属乳酸菌的培养方法可以将肠球菌属乳酸菌在如下条件下需氧培养且从培养物中收集活菌体：（ｉ）ｐＨ：５．５－７．５、（ｉｉ）搅拌方法：平均每分钟５－４０次、（ｉｉｉ）温度条件：３０－４０℃、（ｉｖ）培养时间：６－２４小时。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及肠球菌属乳酸菌的培养方法、以及肠球菌属乳酸菌死菌体的制造方法。
技术介绍
近年来，随着日本人个人对动物性脂肪的摄入量增大，以及饮食生活方式欧美化的演变，患高血脂症以及与此相关的动脉硬化症等生活习惯病、成人病的患者不断增加。为此，现在已有多种用于治疗高血脂症的药物供应。但是，用于抑制此种疾病的药物中，无论哪一种在服用后均有出现胃部不适、呕吐、肝脏机能异常、急性肾脏不良、四肢无力等副作用的报道，并且对正在施用其他药物的患者还存在必须限制服用上述药物的情况。根据新的抗动脉硬化剂的研究结果，本申请的专利技术人发现乳酸菌，特别是肠球菌属的各种微生物的活菌体及死菌体可显著地降低血液中的胆固醇和甘油三酯的数值，并且由于所述的微生物来源是存在于人体内的肠道内细菌，所以服用本专利技术的药剂不但无毒，而且没有目前治疗动脉硬化和高血脂症的药物(例如，专利文献1)所引起的副作用。另外，这些微生物具有各种各样的生理活性，不仅上述微生物的活菌体，而且经特定条件处理所得的上述微生物的死菌体也具有作为其生理活性例子的、可使血液中胆固醇和甘油三酯的数值降低的活性。日本特许公报第2756778号但是，即使具有这样的显著降低胆固醇值和甘油三酯值的活性的肠球菌属乳酸菌(乳酸球菌)，也能判断出通过现有的培养方法会降低所述乳酸菌的活性，从而不能得到所期待的效果。另外，肠球菌属乳酸菌死菌体与所述活菌体一样，也能显著降低胆固醇值和甘油三酯值，但是能判断出通过现有的从所述活菌体得到死菌体的处理方法，将会丧失所期待的效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供不丧失肠球菌属乳酸菌具有的降低血液中胆固醇值和甘油三酯值的活性的培养方法、以及肠球菌属乳酸菌死菌体的制造方法。为此，本专利技术提供肠球菌属乳酸菌的培养方法，包括将肠球菌属的乳酸菌在下述培养条件下进行需氧培养，再从培养物中收集活菌体制成具有降低胆固醇和甘油三酯活性的肠球菌属乳酸菌，所述培养条件为(i)pH5.5-7.5、(ii)搅拌方法平均每分钟5-40次、(iii)温度条件30-40℃、(iv)培养时间6-24小时。此处，上述的培养基成分含有(i)葡萄糖1-4％、(ii)酵母提取物0.3-6％、(iii)蛋白胨0.1-5％，和(iv)磷酸氢二钾1-5％。另外，上述属于肠球菌属的乳酸菌是选自由肠球菌属的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、牛肠球菌(Enterococcus bovis)、鸟肠球菌(Enterococcus avium)、耐久肠球菌(Enterococcus durans)、唾液肠球菌(Enterococcus salivarius)、缓症肠球菌(Enterococcus mitis)、和马肠球菌(Enterococcus equinus)所组成的组中的一种或一种以上的活菌体。本专利技术还提供肠球菌属乳酸菌死菌体的制造方法，该方法包括(1)将肠球菌属乳酸菌在(i)pH5.5-7.5、(ii)搅拌方法平均每分钟5-40次、(iii)温度条件30-40℃、(iv)培养时间6-24小时的培养条件下需氧培养，(2)将含有上述活菌体的菌液用生理盐水洗净、(3)将用生理盐水悬浮所得的菌液在(i)温度为80-125℃、(ii)压力为5-25磅环境下，(iii)放置时间5-25分钟的条件下放置，得到具有降低胆固醇和甘油三酯活性的肠球菌属乳酸菌死菌体。此处，上述(1)所述培养的培养基成分含有(i)葡萄糖1-4％、(ii)酵母提取物0.3-6％、(iii)蛋白胨0.1-5％，和(iv)磷酸氢二钾1-5％。具体实施方式以下就本专利技术的肠球菌属乳酸菌的培养方法、以及肠球菌属乳酸菌死菌体的制造方法中所使用的微生物的种类、所述微生物的培养方法、已培养的微生物的死菌体的制备方法以及由此得到的乳酸菌和乳酸菌死菌体的药理作用等进行详细描述。1.微生物用于本专利技术的微生物可以是肠球菌属乳酸菌，特别是其中的，例如，由粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、牛肠球菌(Enterococcus bovis)、鸟肠球菌(Enterococcus avium)、耐久肠球菌(Enterococcus durans)、唾液肠球菌(Enterococcus salivarius)、缓症肠球菌(Enterococcus mitis)，马肠球菌(Enterococcus equinus)所组成的组中的一种或一种以上的活菌体。所述肠球菌属乳酸菌可通过，例如，美国典型培养物保藏中心(ATCC)的保藏号为的微生物保藏得到。2.活菌体的制备条件上述活菌体的培养条件如下所示(i)培养基成分的氢离子浓度指数(pH)pH为5.5-7.5的范围内。(ii)搅拌方法平均每分钟5-40次缓缓搅拌。(iii)培养时间6-24小时的范围内。(iv)培养基组成含有1-4％葡萄糖、0.3-6％酵母提取物、0.1-5％蛋白胨、1-5％磷酸氢二钾。(v)温度30-45℃的温度环境下。(vi)需氧性培养，但无需特意添加氧。3.死菌体的制备条件将在上述2中所述的条件下培养所得的活菌体培养物进一步用生理盐水洗净1到2次后，将用生理盐水悬浮得到的菌液进行下述条件的加热/加压处理(i)温度80-125℃(ii)压力5-25磅(iii)时间5-25分钟经上述加热/高压处理可得到具有上述微生物活性的死菌体。4.药理作用如下述各实验例所示，本专利技术的死菌体制备方法、乳酸菌特别是肠球菌属微生物对降低血液中胆固醇和甘油三酯值非常有效。(1)实验例1将上述1中所示的肠球菌属的各种微生物的活菌体，以及经加热、加压处理后所得的菌体施用于小鼠(雄性18周龄、平均体重20g每组10只)，在4周的时间内经口连续施用，给药量为活菌体1010个/天、死菌体1010个/天，测定血液中的胆固醇降低率，实验结果如表1所示。表1活菌体和死菌体对胆固醇降低率的比较(小鼠) (2)实验例2用与上述实验例1相同的方式，将肠球菌属的各种微生物的活菌体，以及经加热、加压处理后所得的菌体施用于普通大鼠(雄性18周龄、平均体重250g每组7只)，在4周的时间内经口连续施用，给药量为活菌体1010个/天、死菌体1010个/天，测定血液中的胆固醇降低率，实验结果如表2所示。表2(*1)日常饮食中添加有胆固醇的大鼠(*2)日常饮食中添加有果糖的大鼠(3)实验例3比例经调整的上述肠球菌属的各种微生物的活菌体，以及经加热、加压处理后所得的死菌体施用于普通小鼠(雄性18周龄、平均体重20g每组10只)，在4周的时间内经口连续施用，给药量为活菌体1010个/天、死菌体1010个/天，测定血液中的甘油三酯降低率，实验结果如表3所示。表3(4)实验例4用与上述实验例3相同的方式将比例经调整的肠球菌属的各种微生物的活菌体，以及经加热、加压处理后所得的死菌体施用于普通大鼠(雄性18周龄、平均体重250g每组7只)，在4周的时间内经口连续施用，给药量为活菌体1010个/天、死菌体1010个/天，测定血液中的甘油三酯的降低率，实验结果如表4所示。表4(*1)日常饮食中添加有胆固醇的大鼠(*2)添加有果糖的大鼠(5)有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肠球菌属乳酸菌的培养方法，其特征在于，将肠球菌属乳酸菌在下述培养条件下进行需氧培养，再从培养物中收集活菌体，所述条件为：（ｉ）ｐＨ：５．５－７．５、（ｉｉ）搅拌方法：平均每分钟５－４０次、（ｉｉｉ）温度条件：３０－４０℃、（ｉｖ）培养时间：６－２４小时。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：河合康雄，
申请(专利权)人：河合康雄，
类型：发明
国别省市：JP[日本]