冰草幼穗组织培养再生方法技术

本发明专利技术公开了一种冰草幼穗组织培养再生方法。该方法包括有下列步骤：（１）取材：选取孕穗期幼穗，然后进行外植体的处理：取孕穗期幼穗，在超净台上用在７５％的酒精中浸泡过的脱脂棉球擦洗包裹幼穗的叶鞘进行表面消毒。（２）：将处理后幼穗切成小段，接种在诱导愈伤组织的培养基上培养；（３）：再将愈伤组织转接到继代培养基上继代培养；（４）：把愈伤组织接种在分化培养基上诱导分化；（５）：接着再在步骤（３）相同继代培养基上继代一次，植株再生。优点在于：用本发明专利技术的方法处理的外植体接种在相同的愈伤诱导培养基和分化培养基上，其出愈率和分化率可以大大提高，出愈率和分化率比原有方法平均高出１４．５％和１２．３％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种。
技术介绍
冰草属(Agropyron Gaertn)植物为禾本科牧草，国外20世纪80年代开始有组织培养再生植株的研究报道。冰草为寿命较长的多年生疏丛牧草，广泛分布于干旱、半干旱草原和荒漠草原，抗逆性较强，春季返青早，秋季枯黄晚，茎叶柔嫩，营养丰富，适口性好，是西北干旱半干旱地区改良草场以及建立人工草地和生态建设的重要禾本科牧草之一。同时，冰草属作为重要的小麦野生近缘属之一，除作为优质牧草而受到牧草学家的高度重视外，还具有许多可用于小麦改良的优异性状。近年来人们通过胚拯救、幼穗培养等方法获得了普通小麦与冰草属间杂种及其自交和回交后代，并创建了小麦一冰草异源附加系，提供了在小麦遗传背景下开发利用外源基因的首要条件。目前也有，该方法在选取孕穗期幼穗，然后进行外植体的处理的工艺上，采用75％酒精消毒，再用0.1％HgCl2消毒然后用无菌水冲洗数次的方法，该培养冰草幼穗组织再生的方法，因消毒剂对幼穗有毒害作用，特别是幼嫩的幼穗，这不利于提高组织培养的效率。消毒剂特别是常用的升汞，不但有残毒，而且对环境的污染也比较严重。本专利技术的目的在于提供一种使得幼穗的出愈率和分化率大大提高的。本专利技术的目的由如下技术方案实施该方法包括有下列步骤(1)取材选取孕穗期幼穗，然后进行外植体的处理取孕穗期幼穗，在超净台上用在75％的酒精中浸泡过的脱脂棉球擦洗包裹幼穗的叶鞘进行表面消毒。(2)将处理后幼穗切成小段，接种在诱导愈伤组织的培养基上培养；(3)再将愈伤组织转接到继代培养基上继代培养；(4)把愈伤组织接种在分化培养基上诱导分化；(5)接着再在步骤(3)相同继代培养基上继代至少一次，植株再生。本专利技术的优点在于用本专利技术的方法处理的外植体接种在相同的愈伤诱导培养基和分化培养基上，其出愈率和分化率可以大大提高，出愈率和分化率比原有方法平均高出14.5％和12.3％。且对环境不造成污染。具体实施例方式实施例1，该方法包括有下列步骤(1)取材实验选用的4份材料为蒙古冰草新品系(A.mongolicum Keng)、蒙农杂种冰草(A.cristatum x A.desertorumcv.‘Hycrest-Mengnong’)、航道冰草(A.cristatumcv.‘Fairway’)、诺丹冰草(A.desertorum cv.‘Nordan’)均取自于内蒙古农业大学牧草种质资源圃，生育期为2～5年。取其孕穗期(二棱期)幼穗。然后进行外植体的处理取孕穗期幼穗，在超净台上用在75％的酒精中浸泡过的脱脂棉球擦洗包裹幼穗的叶鞘进行表面消毒。(2)将处理后幼穗幼穗剥出，切成0.2～0.3cm的小段，接种在诱导愈伤组织的培养基中，24～26℃暗培养21d，观察愈伤组织诱导率(诱导出愈伤组织外植体数/接种的外植体数)和质量。诱导愈伤组织的培养基为改良MS+2，4-D 2.0mg/L，蔗糖3％，琼脂0.7％；PH5.8～6.0，117℃，17min下高压灭菌；(3)再将愈伤组织转接到继代培养基上继代培养2次，继代间隔为20d，培养条件为24～26℃暗培养，愈伤组织继代培养基改良MS+2，4-D 2.0mg/L+6-BA 0.2mg/L，蔗糖3％，琼脂0.7％，PH5.8～6.0，117℃，17min下高压灭菌；(4)把愈伤组织接种在分化培养基上诱导分化挑选状态较好的胚性愈伤组织转入分化培养基，26℃下24h光照培养；愈伤组织分化培养基MS+KT3.0mg/L+NAA0.5mg/L，蔗糖3％，琼脂0.7％，PH5.8～6.0，117℃，17min下高压灭菌；(5)接着再在步骤(3)相同继代培养基上继代两次，每隔约21d在相同培养基上继代一次，35～42d后统计愈伤组织分化情况，分化出绿芽的小苗在7～14d内迅速生长为小植株，并伴有纤细的根状物，待小苗长到3～4cm时转入生根培养基中一周后便产生根，形成完整小植株；生根培养基1/2MS+NAA0.1mg/L，蔗糖3％，琼脂0.7％；PH5.8～6.0；117℃，17min下高压灭菌， 其中1/2MS培养基MS基本培养基大量元素减半，其余不变改良MS培养基(单位mg/L)大量元素NH4NO3956，KH2PO41160，MgSO4·7H2O 370，CaCl2·2H2O96。有机元素肌醇100，VB12，烟酸1，VB60.5，甘氨酸2。铁盐和微量元素同MS基本培养基。实施例2目前现有的，取材，如实施例1，处理取孕穗期幼穗，剥离幼穗，75％酒精消毒30s，再用0.1％HgCl2消毒2～4min，然后用无菌水冲洗数次。以下方法均如实施例1所述。实施例3通过实施例1和实施例2对比两种方法对冰草组培再生的影响，如表1。表1<tables id="table1" num="001"><table width="730">品种接种数出愈率分化率实施例2方法航道冰草诺丹冰草蒙古冰草新品系蒙农杂种冰草40040040040069.664.357.573.254.352.149.057.6实施例1方法航道冰草诺丹冰草蒙古冰草新品系蒙农杂种冰草40040040040079.877.575.490.165.263.561.772.8</table></tables>从表1中可以看出，把用两种方法处理的外植体接种在相同的愈伤诱导培养基和分化培养基上，但是出愈率和分化率存在着较大差异，本专利技术方法的出愈率和分化率比现有技术的方法平均高出14.5％和12.3％。结论外植体的生理状态和发育程度是影响离体培养反应的重要因素。本实验在对外植体的消毒处理中未用消毒液(升汞，次氯酸钠等)，而是用在75％的酒精中浸泡过的脱脂棉球擦洗包裹幼穗的叶鞘进行表面消毒，大大地减轻了消毒剂对幼穗的毒害作用，特别是幼嫩的幼穗，这有利于提高组织培养的效率。消毒剂特别是常用的升汞，不但有残毒，而且对环境的污染也比较严重。权利要求1.，该方法包括有下列步骤(1)取材选取孕穗期幼穗，然后进行外植体的处理；(2)将处理后幼穗切成小段，接种在诱导愈伤组织的培养基上培养；(3)再将愈伤组织转接到继代培养基上继代培养；(4)把愈伤组织接种在分化培养基上诱导分化；(5)接着再在步骤(3)相同继代培养基上继代一次，植株再生；其特征在于，所述取材选取孕穗期幼穗，然后进行外植体的处理取孕穗期幼穗，在超净台上用在75％的酒精中浸泡过的脱脂棉球擦洗包裹幼穗的叶鞘进行表面消毒。全文摘要本专利技术公开了一种。该方法包括有下列步骤(1)取材选取孕穗期幼穗，然后进行外植体的处理取孕穗期幼穗，在超净台上用在75％的酒精中浸泡过的脱脂棉球擦洗包裹幼穗的叶鞘进行表面消毒。(2)将处理后幼穗切成小段，接种在诱导愈伤组织的培养基上培养；(3)再将愈伤组织转接到继代培养基上继代培养；(4)把愈伤组织接种在分化培养基上诱导分化；(5)接着再在步骤(3)相同继代培养基上继代一次，植株再生。优点在于用本专利技术的方法处理的外植体接种在相同的愈伤诱导培养基和分化培养基上，其出愈率和分化率可以大大提高，出愈率和分化率比原有方法平均高出14.5％和12.3％。文档编号C12N5/04GK1813526SQ20061000871公开日2006年8月9日本文档来自技高网...

【技术保护点】
冰草幼穗组织培养再生方法，该方法包括有下列步骤：（１）取材：选取孕穗期幼穗，然后进行外植体的处理；（２）：将处理后幼穗切成小段，接种在诱导愈伤组织的培养基上培养；（３）：再将愈伤组织转接到继代培养基上继代培养；（４）：把愈伤组织接种在分化培养基上诱导分化；（５）：接着再在步骤（３）相同继代培养基上继代一次，植株再生；其特征在于，所述取材：选取孕穗期幼穗，然后进行外植体的处理：取孕穗期幼穗，在超净台上用在７５％的酒精中浸泡过的脱脂棉球擦洗包裹幼穗的叶鞘进行表面消毒。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：米福贵，云锦凤，霍秀文，露晓平，徐春波，魏建华，王宏枝，李瑞芬，张辉，刘娟，王桂花，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：15[中国|内蒙]