利用转基因灵芝表达人胰岛素降血糖的方法技术

本发明专利技术人工合成了人胰岛素原类似物基因，并在编码蛋白的Ｃ端添加了ＫＤＥＬ的内质网滞留序列以便蛋白更多地积累在内质网中从而防止细胞中酶的降解。选用高等真菌中高效表达的ＧＰＤ启动子驱动目的基因，并置于适合灵芝转化的载体中，通过电击法或农杆菌介导法或ＰＥＧ介导法遗传转化灵芝。ＥＬＩＳＡ检测表明转基因灵芝中人胰岛素原类似物的含量为１０５．０μｇ／ｇ～１７４．８μｇ／ｇ灵芝鲜重的水平，占灵芝可溶总蛋白的４．４０％～１０．４０％。将表达人胰岛素的灵芝口服灌喂链尿霉素诱导的糖尿病大鼠模型证明能有效降低血糖，从而提供了利用灵芝生物反应器降血糖的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及人工合成人胰岛素基因，并在编码区结构上加以修饰。选用真菌中强表达的启动子构造。置于适合灵芝转化的载体中，通过电击法或农杆菌介导法或PEG介导法遗传转化灵芝。获得表达人胰岛素的灵芝，并通过口服灌喂高血糖大鼠证明有效，从而提供了利用转基因灵芝降血糖的方法。
技术介绍
1、胰岛素胰岛素是由胰岛β细胞分泌的小分子蛋白质，分子量约6000kD，分子中有两条肽链，称为A链和B链，人胰岛素A链有21个氨基酸残基，B链有30个氨基酸残基，A、B链之间通过两个二硫键连接在一起(A链第7位的半胱氨酸残基与B链第7位的半胱氨酸残基连接，A链第20位的半胱氨酸残基与B链第19位的半胱氨酸残基连接)，A链内部有一个二硫键连接(A链第6位的半胱氨酸残基与第11位的半胱氨酸残基连接)。胰岛素分子的结构可分为六个片断A链中两段α螺旋(A1-A8和A12-A18)由A9到A11肽链连接，其中A6、A11由二硫键相连；B链的中部是一段α螺旋(B9-B19)，紧接着一个β回折(B20-B23)，其两端是两段运动性很大的伸展肽段(B1-B9和B24-B30)。六个片断中三段α螺旋和一个β回折是具有一定刚性的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用转基因灵芝表达人胰岛素来降低糖尿病患者血糖水平的方法，其特征在于：人工合成人胰岛素原类似物基因，选用真菌中强表达的ＧＰＤ启动子，置于适合灵芝转化的载体中，通过电击法或农杆菌介导法或ＰＥＧ介导法遗传转化灵芝，获得表达人胰岛素的灵芝，并通过口服灌喂高血糖大鼠证明能有效降低血糖水平。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林忠平，倪挺，胡鸢雷，孙丽，陈溪，
申请(专利权)人：林忠平，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]