通过局部给药预防和治疗再狭窄制造技术

本发明专利技术涉及ＤＮＡ构建体在制备药物组合物中的用途，所述ＤＮＡ构建体编码载脂蛋白或ＨＤＬ关联蛋白，所述药物组合物适于在损伤部位给血管局部施用，以在ａ）对病态冠状动脉、外周动脉和脑动脉进行旁路手术、ｂ）植入移植物或移植器官的手术、或ｃ）血管成形术之前或期间用于ｉ）防止或治疗狭窄或再狭窄；或ｉｉ）对斑块进行稳定。本发明专利技术还涉及一种试剂盒，其包括用于长时间局部释放编码载脂蛋白或ＨＤＬ关联蛋白的ＤＮＡ构建体的装置。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2002年9月27日，申请号为02823781.1，专利技术名称为“通过局部给药预防和治疗再狭窄”的专利技术专利申请的分案申请。
技术介绍
本申请要求了于2001年9月28日提交的序列号为60/326,379的US申请的优先权。本专利技术一般属于用于降低病态冠状动脉、外周动脉和脑动脉的血管再造后的再狭窄以及手术放置旁路移植物或移植器官后的狭窄或再狭窄的方法和组合物的领域，特指将诸如载脂蛋白A-I Milano之类的物质单独或与脂质制剂或其它胆固醇降低剂或脂质调节剂联合进行局部给药。血管成形术、手术和其它血管干预因为以细胞在短期内快速生长到腔内为特征的加速的动脉病变而变得棘手。这种生长常常十分严重，其足以危害血液流向末端器官。正如被用于动脉粥样硬化中血管表面形成斑块(plaques)时那样，血管旁路手术已被广泛用于治疗狭窄和闭合的血管。在旁路手术中，将一根或多根健康的血管越过狭窄或闭合部位移植到狭窄/闭合的血管中，以便在该狭窄或闭合的血管周围分流血液，从而为血液供应受到该狭窄或闭合危害的组织重建足够的血液供应。这种手术常常能成功地为受到危害的组织进行血管再造。血管成形术已发展成为一种旁路手术中供选择的治疗，尤其是对被诊断为处于由斑块异常沉积在血管壁腔壁上而形成血管狭窄或闭合的初期阶段的患者更是如此。血管成形术一般包括将一根通常配有囊或可膨胀的金属网状物的导管引入到狭窄或闭合的动脉区域，使该囊或丝网短暂地膨胀一次或多次以将血管内的阻塞物或斑块向血管内皮的壁上进行挤压，从而压缩该斑块和/或将该斑块击碎并重建血流。但是，血管成形术治疗可能会损伤血管，尤其是当该囊过度膨胀或该网状物过分扩展时更是如此，从而造成了许多不希望出现的结果，如血管成形术区域内皮细胞层的剥脱(移动)、血管内壁部分从血管的剩余部分上分割下来并伴有血管闭合、或血管的内膜层破裂。动物的动脉损伤引致了最终使得动脉变狭窄的血管修复过程。平滑肌细胞和炎症细胞厚的新层或新内膜在血管内生长，侵占了腔。动物体内的这种过程代表了在血管成形术、血管内支架(stent)移植、器官移植、或旁路手术后临床发生的过程，其极大地限制了这些用于治疗阻塞性动脉疾病的技术的长期成功性。动脉损伤和新内膜增生的动物模型已被用于研究导致人类再狭窄的细胞事件，用以设计抑制组织生长以试图减少再狭窄并增加长期临床效果的治疗策略。对于人的再狭窄而言，猪是特别有用的动物模型。限制血管再造后血管的狭窄或再狭窄的尝试包括使用药理学物质和技术性方法。临床上还没有被批准用于防止人再狭窄适应征的药物。正如Serruys等人，N.E.J.Med.1994；331489-495和Fischman等人，N.E.J.Med.1994；331496-501所报道的那样，已经表明一种技术性方法——血管内放置支架可以部分降低冠状动脉干预后人的再狭窄。然而，支架本身在20-30％的情况中仍然易于产生明显的再狭窄。对进行血管修复机理了解的增加使得出现了将药物用于限制加速的动脉病变的创新提议。已知包括单核细胞在内的循环的白细胞恰好是当动脉粥样硬化开始时血管所征募的第一种细胞。当处于病态动脉壁中时，这些细胞可吞没胆固醇和其它脂质，并且还可以产生吸引其它细胞、使得其它细胞增生、或使基质成分降解的物质。这些继发作用中的各种作用反过来又促进了动脉腔更大程度的内膜变厚和更严重的狭窄或闭合。还没有证据证实白细胞在血管再造后的再狭窄中扮演了相似的角色。虽然已经将白细胞活化与人的再狭窄联系起来(Pietersma等人，Circulation 1995；911320-1325；Miekelson等人，1996 JACC 28(2)345-353；Inoue等人，1996 JACC 28(5)1127-1133)，但是在血管再造后例如用糖皮质激素进行的广泛的炎症抑制并不能降低人的再狭窄(Pepine等人，Circulation 1990；811753-1761)。这种观察是对使用广泛有效和特异性很高的靶向治疗用于预防再狭窄进行的回顾性研究。广泛治疗，例如用肝素进行的广泛治疗一直受到全身毒性和给药限制因素的限制。特异性治疗，例如用分子策略进行的特异性治疗不能抑制活化和加强血管修复过程的所有多余的细胞和分子途径。Ameli等人，Circulation 90(4)1935-41(1994)报道了一些流行病学研究，这些研究表明高密度脂蛋白(HDL)胆固醇水平和冠心病之间呈反比关系，并且HDL和冠状囊血管成形术后的再狭窄之间也有相似的反比关系。其进行了一项研究以测定是否HDL直接影响新内膜形成，研究了重组的apoA-I Milano(apoA-IM，一种Arg-173被替代为CyS的人apoA-I的变体)对用胆固醇进行喂养的兔子的囊损伤后内膜增厚的影响。在股动脉和骼动脉囊损伤前5天，兔子开始每隔一天静脉内注射40mg连接到磷脂载体上的apoA-IM，并持续给药至损伤后5天(总剂量为200mg/动物，或约11.4mg/kg/给药)。在囊损伤后三周，与两个对照组相比，进行apoA-IM治疗的兔子的内膜厚度显著降低。与两个对照进行的ANOVA比较表明，apoA-IM也显著降低了内膜-比-中膜的比例。正如由使用巨噬细胞-特异性单克隆抗体进行的免疫组织化学研究所证实的那样，与用载体进行处理的动物相比，在用apoA-IM进行了治疗的兔子中被巨噬细胞所覆盖的内膜损害部分显著较少(25.3+/-17％比59.4+/-12.3％，P＜.005)。用apoA-IM进行处理的动物和只用载体进行处理的对照组的主动脉胆固醇含量没有显著差异。不幸地是，与其中损害与人更相似的猪不同，还不能用兔子所获得的结果来预言人的结果。因此，需要可促进血管组织愈合并控制血管肌细胞增殖(增生)以预防血管成形术、血管旁路手术、器官移植、或血管疾病后血管的再狭窄并同时将快速再闭合的风险最小化的组合物和方法。因此，本专利技术的目的是要提供用于减少病态冠状动脉、外周动脉和脑动脉血管再造后的再狭窄以及通过手术放置旁路移植物或移植器官后的狭窄或再狭窄的方法和组合物。本专利技术的另一个目的是要提供一种简单有效的基因转移方法。本专利技术的概述在对病态冠状动脉、外周动脉和脑动脉进行旁路手术、手术植入移植物或移植器官、或血管成形术、或稳定不稳定的斑块之前或期间，可以将单独或更优选地是与脂质载体如磷脂或其它药物联用的载脂蛋白A-I(ApoA-I)，优选地变体形式如载脂蛋白A-I Milano(ApoA-IM)进行局部给药。在优选的实施方案中，用INFILTRATOR、壁内释放装置和/或其它持续控释的方法将ApoA-IM进行给药，从而将有效剂量给药于损伤部位。基于使用ApoA-IM的猪模型，治疗或预防再狭窄的有效剂量为0.2至0.4mg ApoA-IM/kg被传递到进行治疗的部位，或更特定地为4至6mg ApoA-IM/被治疗的血管。溶液的粘度限制了用INFILTRATOR进行的壁内给药的剂量上限。例如，该方法不能使用太粘以至于不能通过INFILTRATOR小孔的ApoA-IM溶液。正如被实施例所证明的那样，有效量为0.3至0.4ml 14mg/ml的ApoA-IM溶液(其相当于每个血管区段单次给药4至6mg或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＤＮＡ构建体在制备药物组合物中的用途，所述ＤＮＡ构建体编码载脂蛋白或ＨＤＬ关联蛋白，所述药物组合物适于在损伤部位给血管局部施用，以在ａ）对病态冠状动脉、外周动脉和脑动脉进行旁路手术、ｂ）植入移植物或移植器官的手术、或ｃ）血管成形术之前或期间用于ｉ）防止或治疗狭窄或再狭窄；或ｉｉ）对斑块进行稳定。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：CL比斯盖尔，
申请(专利权)人：埃斯佩里安医疗公司，塞达斯西奈医疗中心，
类型：发明
国别省市：US[]