五子衍宗丸的用途制造技术

本发明专利技术公开了五子衍宗丸的用途。本发明专利技术五子衍宗丸作为治疗多发性硬化药物的用途。本发明专利技术应用五子衍宗丸干预EAE小鼠，探讨其防治作用及其作用机制，为临床应用补肾填精法防治多发性硬化提供实验依据，有效证明五子衍宗丸能作为治疗多发性硬化的药物。

The use of Wuziyanzong pill

【技术实现步骤摘要】
五子衍宗丸的用途
本专利技术涉及五子衍宗丸的用途，具体涉及五子衍宗丸作为治疗多发性硬化药物的用途，属于中医药领域。
技术介绍
多发性硬化(multipleltipleltiplesclerosis，MS)是由T细胞介导的自身免疫性疾病，在脱髓鞘的炎性反应中T细胞起到了关键作用。其发病机理可概括为某种诱因激活T细胞，透过血脑屏障(blood-brain-barrier,BBB)进入到脑与脊髓，与中枢抗原结合，分泌大量细胞因子和趋化因子，进一步使外周血T细胞、B细胞、单核/巨噬细胞等进入到炎症部位，损害中枢神经组织，发生脱髓鞘炎症反应。MS的高发人群为青壮年，致残率很高。国内外相关研究表明，目前应用于临床治疗MS的首选药物为激素与免疫抑制剂，不仅副作用较大，而且防止复发疗效差。因此，对MS的深度研究很有必要。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)是国际公认的研究MS的经典动物模型。在临床中MS属于神经内科的脊髓病。从中医理论而言，脊髓病可从肾督络脉进行分析论治。脊髓病证多为督脉病证，脊髓解剖位置与督脉循行路线密切相关，反脊髓大部分功能与督脉功能相似，督脉功能的正常发挥与肾功能密切相关。因此，脊髓功能的正常发挥与肾密不可分。有研究认为，MS的中医病机为肾精亏虚，油毒内蕴，本虚标实，邪毒损伤督脉，伤及肾与脑髓，形体败坏。五子衍宗丸源自《摄生众妙方》，由菟丝子、枸杞子、五味子、车前子、覆盆子按4︰4︰2︰1︰1比例组成组成，具有补肾益脑，填精益髓之功。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供五子衍宗丸作为治疗多发性硬化药物的用途，本专利技术应用五子衍宗丸干预EAE小鼠，探讨其防治作用及其作用机制，为临床应用补肾填精法防治多发性硬化提供实验依据，有效证明五子衍宗丸能作为治疗多发性硬化的药物。本专利技术提供的五子衍宗丸作为治疗多发性硬化药物的用途。本专利技术所述用途采用EAE小鼠进行验证。本专利技术还提供了五子衍宗丸在制备如下1)和/或2)中的应用：1)预防和/或治疗与Rho/ROCK信号通路相关的疾病的药物；2)抑制T淋巴细胞分泌炎性因子的药物。本专利技术中，所述多发性硬化(MS)属于自身免疫性疾病，主要特征是中枢神经系统白质脱髓鞘，导致脱髓鞘和轴突变性的主要原因是炎症级联反应。Rho/ROCK信号通路存在于中枢神经系统中，被激活后会加重神经细胞损伤，在神经细胞的再生中起着非常重要的作用。少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(MOG)作为抑制信号，通过识别并结合抑制蛋白受体(NgR)激活胞内RhoA因子。RhoA-GTP激活其效应底物Rho激酶(ROCKII)，进而刺激ROCKII效应分子P-MYPT1的产生，最终促进炎症反应，加速神经细胞损伤。有研究表明，Rho激酶抑制剂可下调NF-κB，减少炎性细胞浸润，对EAE小鼠神经轴突再生起促进作用。本专利技术结果显示五子衍宗丸高剂量组可明显降低NF-κB的表达，抑制ROCKII与P-MYPT1的激活与产生。因此，五子衍宗丸能通过降低Rho信号通路的激活来抑制炎性反应，进而保护中枢神经细胞。本专利技术中，MS发病伴随着血脑屏障损伤，髓鞘蛋白缺失，T细胞被过度激活，少突胶质细胞修复不足等。IL-6、TNF-α、IFN-γ是由Th1细胞分泌的一类炎性因子，IL-17是由Th17细胞分泌的促炎因子，在机体免疫应答中启动炎症反应和组织损伤，亦在神经免疫应答中起重要作用，这类细胞促炎因子介导少突胶质细胞损伤、诱导髓鞘成分降解。本专利技术结果表明，五子衍宗丸高剂量组促炎因子的表达显著降低。因此，五子衍宗丸能通过抑制T淋巴细胞分泌炎性因子减轻炎症反应，进而调节机体免疫应答。本专利技术还提供了所述五子衍宗丸作为防治EAE小鼠药物的用途。本专利技术中，MS属于中医“痹症”、“痿症”范畴。中医治疗MS优势独特，以整体观念、辨证论治为原则，运用中药复方可多方位、多靶点进行治疗与调节。肾藏精为先天之本，主骨生髓，脑为髓海。肾精亏虚，髓海不足是MS的根本病机。五子衍宗丸中菟丝子、枸杞子、五味子、覆盆子和车前子五味药共奏益肾填精、清湿祛毒之功，标本兼治MS。本专利技术实验研究结果表明，五子衍宗丸能延缓EAE发病时间，减轻EAE临床症状。其作用机制可能为降低炎性因子的分泌，抑制炎性通路的激活，调节机体免疫。这为今后进一步探索五子衍宗丸的免疫调节功能提供了研究基础，也为临床应用五子衍宗丸作为治疗MS的药物提供了实验基础。附图说明图1为各组小鼠临床评分比较；图1中，**表示P<0.01，***表示P<0.001。图2为各组小鼠平均起病时间比较；图2中，与模型组相比，***P<0.001，**P<0.01；与五子衍宗丸高剂量组相比，△P<0.05，△△P<0.01，△△△P<0.001。图3为各组小鼠平均最高临床评分、累计临床评分比较；图3中，与模型组相比，***P<0.001，**P<0.01；与五子衍宗丸高剂量组相比，△P<0.05，△△P<0.01，△△△P<0.001。图4为两组小鼠炎性因子表达量比较；图4中，*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001。图5为两组小鼠ROCKII/P-MYPT1/NF-κB蛋白表达量的比较，其中图5(a)为Western-blot结果图，图5(b)为图5(a)的柱状分析图；图5中，*表示P<0.05，**表示P<0.01。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中，1、实验动物：8～10周龄雌性C57BL/6小鼠24只，体质量18～20g，购自北京维通利华实验动物公司。实验动物合格证号：SCXK(京)2016-0011。经山西中医药大学伦理委员会批准，按国际动物实验方针进行科学实验。实验前动物在无病原菌动物房(24℃左右，相对湿度40％-60％)清洁级适应性饲养1周。2、实验药物：五子衍宗丸购自太原同仁堂药店(产品批号：15035044)，将药丸研磨成微细粉末状，用生理盐水配制成浓度为0.32g/ml、0.16g/ml、0.08g/ml的溶液放置4℃冰箱保存备用，临用前需要充分摇匀。3、仪器：凝胶电泳仪(Bio-Rad，型号PowerPacTM)；凝胶成像分析仪(Bio-Rad，型号HOOD-II)；酶标仪(Leica，型号C-1150)；CO2培养箱(Thermo，3131)。-80℃冰箱(Thermo，906)；高速冷冻离心机(eppendorf，5840)。4、试剂：小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)购于上海强耀生物科技有限公司(产品批号：9001)，百日咳毒素(PTX)购于美国Sigma公司(产品批号：231144)；结核分枝杆菌(TB)购于美国BectonDickinson公司(产品批号：231141)；完全弗氏佐剂(CFA)购于美国Alexis公司(本文档来自技高网...

【技术保护点】
五子衍宗丸在制备治疗多发性硬化药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.五子衍宗丸在制备治疗多发性硬化药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述用途采用EAE小鼠进行验证。3.五子衍宗丸在制备预防和/或治疗如下1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴智，樊慧杰，张若楠，李艳彦，周然，肖保国，马存根，
申请(专利权)人：山西中医药大学，
类型：发明
国别省市：山西,14