小球藻的丙环唑抗性突变体制造技术

本发明专利技术涉及具有保藏号CCAP 211/133的小球藻的丙环唑抗性突变体。小球藻的丙环唑抗性突变体对丙环唑具有增加的耐受性。本发明专利技术进一步提供了制备小球藻的丙环唑抗性突变体的方法。小球藻的丙环唑抗性突变体能够在丙环唑的存在下选择性地生长，并因此可用于大规模生产藻类生物量。

Propiconazole resistant mutants of Chlorella

The present invention relates to propiconazole resistant mutants with accession No. CCAP Chlorella 211/133. Propiconazole resistant mutants of Chlorella has increased tolerance of propiconazol. The present invention further provides a method for preparing propiconazol resistant mutants of Chlorella. Propiconazole resistant mutants of Chlorella can be grown selectively in the presence of propiconazol, and therefore can be used for large-scale production of algae biomass.

【技术实现步骤摘要】
小球藻的丙环唑抗性突变体
本专利技术涉及小球藻(Chlorellaspecies)的丙环唑抗性突变体(propiconazoleresistantmutants)。
技术介绍
定义正如本专利技术所使用的，除非在文中另有所指，否则以下术语通常旨在具有如下所述的含义。草食性动物：术语“草食性动物”是指水生害虫，如轮虫类(rotifers)、腰鞭毛虫类(dinoflagellates)、纤毛虫类(ciliates)，原生动物以及真菌，其降低了藻类生物量/生产的产量。污染生物体：术语“污染生物体”是指在利用资源的同时与藻类竞争并随后导致藻类生物量减少的丝状单细胞蓝藻细菌(cyanobacteria)、鞭毛虫类(flagellates)、硅藻类(diatoms)等。藻类：术语“藻类”是指一个大型、多样化的真核生物群体的非正式术语，真核生物不一定密切相关，因此是多样性的。所包括的生物体范围从单细胞属(如小球藻)到多细胞形态(如巨藻，一种长达50米长的大型褐藻)。丙环唑：丙环唑是一种三唑杀真菌剂，也被称为DMI，或脱甲基化抑制杀真菌剂，由于与14-α脱甲基酶的结合以及抑制14-α脱甲基酶将前体脱甲基为麦角固醇。没有该脱甲基化步骤，麦角固醇不被并入生长的真菌细胞膜中，并停止细胞生长。
技术介绍
以非常低的成本获得大量藻类生物量的主要挑战是获得藻类的连续稳定的生产。为了达到这个目的，藻类必须在开放式池塘中以足够高的密度在近一年内稳定地培养。然而，在开放式池塘培养的藻类容易受到非生物和生物胁迫，导致频繁的培养冲突和生产力损失。在很大程度上可以通过生物勘探、筛选和为特定地理位置和季节选择正确种类的藻类菌株来提防非生物胁迫。管理开放式池塘中的污染物，同时为保证生物燃料成功生产所需的藻类的高生产力是非常困难的。草食性动物和污染生物体是藻类培养中的主要问题。纤毛虫类、腰鞭毛虫类、轮虫类、硅藻类、丝状单细胞蓝藻细菌、鞭毛虫类等与藻类喂养或竞争营养物质，导致藻类生物量减少。已知各种化学物质，其可以用于杀死草食性动物和污染生物体，然而，这些化学物质对藻类生长也具有有害影响。因此，感到需要大规模生产藻类，以减轻上述缺点。
技术实现思路
专利技术目的此处的至少一种实施方案满足的本专利技术的一些目的如下：本专利技术的一个目的是改善现有技术中的一个或多个问题或至少提供一种有用的替代方案。本专利技术的一个目的是提供小球藻(Chlorellasp.)的丙环唑抗性突变体。本专利技术的另一个目的是提供一种用于制备小球藻的丙环唑抗性突变体的方法。本专利技术的另一个目的是提供使用丙环唑抗性选择而呈现增强的作物保护、增加的生物量的小球藻的丙环唑抗性突变体。本专利技术的另一个目的是提供一种使用小球藻的丙环唑抗性突变体通过控制水生环境中的草食性动物和污染生物体来选择性地提高小球藻的产量的方法。本专利技术的其它目的和优点将在以下描述中更加明显，但以下的描述并不意味着限制本专利技术的范围。
技术实现思路
本专利技术涉及小球藻的丙环唑抗性突变体。一方面，小球藻的丙环唑抗性突变体具有藻类和原生动物保藏中心(TheCultureCollectionofAlgaeandProtozoa，CCAP)保藏号CCAP211/133的特征，对丙环唑具有增加的耐受性。相对于使用小球藻的丙环唑抗性突变体后的生物量产率的增加来确定耐受性的增加，其中生物量产率的增加在10％至30％的范围内。具有保藏号CCAP211/133的小球藻的丙环唑抗性突变体通过以下方式制备：对小球藻细胞进行UV辐射，复原经UV处理的小球藻培养物，并用预先确定浓度的丙环唑处理复原的经UV处理的小球藻培养物，以获得对丙环唑具有抵抗性的小球藻的丙环唑抗性突变体的藻种(strains)。然后将藻种分离，并将各藻种在培养基中分别培养，以鉴定并获得在10％至30％的范围内呈现出生物量产率增加的藻种，具有保藏号CCAP211/133。在本专利技术的另一方面，提供了一种用于选择性地控制水生环境中的草食性动物的生长的方法。该方法包括使用保藏号为CCAP211/133的小球藻的丙环唑抗性突变体输入水生环境。用有效浓度的丙环唑处理水生环境，以选择性控制草食性动物的生长。可以在使用小球藻的丙环唑抗性突变体(propiconazoleresistantmutant)输入水生环境之前施用丙环唑，或者在使用小球藻的丙环唑抗性突变体输入水生环境之后施用丙环唑，或在使用小球藻的丙环唑抗性突变体输入水生环境之前和之后均施用丙环唑。附图说明现在将参考所附的非限制性附图来描述本专利技术，其中：图1表示在丙环唑存在下说明野生型Chlorellasorokiniana和保藏号为CCAP211/133小球藻的丙环唑抗性突变体的生长的图。具体实施方式藻类是具有有用的商业用途的各种化学品/化合物的来源，例如生成作为替代液体化石燃料的生物燃料的可再生能源。藻类的使用作为生物油生产的替代品需要大规模生产藻类。然而，控制开放池塘中的污染物以及为保证生物燃料成功生产所需的藻类的高生产力是非常困难的。用于管理开放式池塘中的这种竞争或捕食的技术已被证明是不成功的，因为这些方法限制了所需的生产力，或者与所关注的藻种不相容，或者不能消灭各种各样的草食性动物和污染生物体，或者在经济上是不可行的。已知各种化学物质，其可以用于杀死草食性动物和污染生物体，然而，这些化学物质也对藻类生长具有有害影响。丙环唑是一种对草食性动物和污染生物具有强有效活性的化学物质。然而，丙环唑具有杀藻作用(algicidal)，因此也损害藻类。因此，在藻类培养中使用化学物质(如丙环唑作为作物保护剂)将需要其生长不受丙环唑的存在影响的藻种。然后分离和筛选个体突变体，以获得本专利技术的丙环唑抗性藻类突变体。丙环唑用于筛选和选择藻类突变体，因为它是非常低剂量起效的杀草剂(grazicide)。丙环唑是在0.5ppm及以上的强效杀草剂。它也作为植物中油菜素类固醇(BR)合成的内源性抑制剂。BR抑制剂(如丙环唑)靶向关键酶(如BR生物合成途径的细胞色素P450单加氧酶)的抑制。建议三唑抑制剂如丙环唑通过直接与DWF4结合而抑制BRs中侧链C-22位的羟基化。DWF4是推定的类固醇22-羟化酶的细胞色素P450分离物。油菜素类固醇(BRs)的生产是已知的，并在所属绿藻纲(Chlorophyceae)、共球藻纲(Trebouxiophyceae)、石莼纲(Ulvophyceae)和轮藻纲(Charophyceae)家族的无菌微藻类藻种中量化。两种油菜素内酯类，即油菜素内酯(brassinolide)和油菜素甾酮(castasterone)均存在于所有藻种中。BR生产在小球藻中建议提高细胞增殖、蛋白质和代谢物含量。因此，本专利技术想到了小球藻的丙环唑抗性突变体能够在丙环唑存在下以对野生型藻类有毒性的浓度生长。小球藻的丙环唑抗性突变体对丙环唑浓度生长的能力，对各种草食性动物和污染生物体是致命的，进一步为突变体提供作物保护的益处。这些小球藻的丙环唑抗性突变体可以产生更高的生物量。本专利技术还提供了一种制备小球藻的丙环唑抗性突变体的方法。该方法包括产生、选择、分离和表征小球藻的丙环唑抗性突变体。通常，野生型藻类的突变可以通过UV突变、γ突变和化学突变进行。在本专利技术的实施方案中，野生型藻类的突变通过U本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有藻类和原生动物保藏中心(CCAP)保藏号为CCAP 211/133的特征的小球藻的丙环唑抗性突变体，其中所述小球藻的丙环唑抗性突变体对丙环唑具有增加的耐受性。

【技术特征摘要】
2016.06.02 IN 2016210190721.一种具有藻类和原生动物保藏中心(CCAP)保藏号为CCAP211/133的特征的小球藻的丙环唑抗性突变体，其中所述小球藻的丙环唑抗性突变体对丙环唑具有增加的耐受性。2.根据权利要求1所述的小球藻的丙环唑抗性突变体，其中，相对于使用所述小球藻的丙环唑抗性突变体后的生物量产率的增加来确定耐受性的增加，其中生物量产率的增加在10％至30％的范围内。3.一种制备根据权利要求1所述的具有保藏号为CCAP211/133的小球藻的丙环唑抗性突变体的方法，所述方法包括如下步骤：a.使野生型小球藻细胞经受UV辐射，以获得经UV处理的小球藻培养物；b.复原所述经UV处理的小球藻培养物，以获得复原的经UV处理的小球藻培养物；c.用预先确定浓度的丙环唑处理所述复原的经UV处理的小球藻培养物，以获得对丙环唑具有抵抗性...

【专利技术属性】
技术研发人员：池传舒·库马尔，尼拉嘉·索尼，拜德瑞施·然基特勒·索尼，高特姆·达斯，桑塔驽·达斯古塔，
申请(专利权)人：瑞来斯实业公司，
类型：发明
国别省市：印度,IN