本发明专利技术涉及新疆薄皮核桃的组织培养和快速繁殖方法，该方法由获得无菌苗；芽的增殖；芽的生根；练苗与移栽步骤完成，提供了大田核桃枝条的消毒处理方法、最佳的芽增殖培养基和芽生根培养基。本发明专利技术具有方法简单，繁殖速率快，稳定性好，培育周期短，生根率高，根质量好，移栽易于成活的优点，在实际生产应用中具有较强的可行性，适用于新疆薄皮核桃的产业化育苗，有利于解决长期以来优良品种苗木供应匮乏的现实问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物组织培养和快速繁殖领域，具体地说涉及新 疆薄皮核桃的组织培养和快速繁殖方法。
技术介绍
核桃(/"^s/w re^'s Z.)古称胡桃或羌桃，属核桃科 (/〃^7s/K/sce3e)，核桃属，原产于欧洲东南部及亚洲西部，我国也是 核桃原产地之一。由于核桃是果材兼用的优良经济树种，又作为世界 四大干果(核桃、扁桃、腰果、榛子)之一，所以它以其很高的经济、 生态及社会效益在世界各地广泛栽培。我国栽培核桃已有2000多年以 上历史，相传两千多年前西汉的张骞出使西域，从波斯(今伊朗)将 核桃引进我国，从此核桃成为我国北方各地的重要干果之一。核桃是新疆主要的经济林树种之一，也是新疆林果业中最具市场 竞争力的特色产品，也是近年来南疆林果业中规模面积扩张最快的树 种。就新疆而言，每年种植核桃的面积都会在1. 3万公顷以上。所以， 每年将需要大量的优良核桃苗木，培育优良核桃苗木就有巨大的商业 价值和市场前景。新疆核桃栽培历史悠久，其源于天山西部和昆仑山的野核桃，距 今已有1 300多年的栽培历史。由于世代实生繁殖，在其实生群体中， 混生着早、晚实两种性状的核桃类群，经长期自然相互杂交， 一方面 形成了高度混杂群体，使得种质资源变得异常丰富多彩(王国安，新 疆早实核桃丰产技术讲座(一)农村科技2006 (1) 39);另一方面 使得植株间、品种间良莠不齐，形成了很多复杂的群体。例如，核桃 的出仁率在30-80%之间，品种的区域差异性很大。品种的差别对核 桃生产的发展和产量的提高影响很大。因此，选择优质、丰产、抗逆性强以及早实的优良品种是核桃丰产的重要途径。但是常规选种方法 选出的优良单株，其后代仍用种子繁殖，核桃在自由授粉的实生后代 中，在坚果大小、重量等方面会出现较大变异，不能使优良品种长久 保持其优良性状。为了防止实生苗的变异退化，就必须采用营养繁殖， 即嫁接、扦插和组培等繁殖方法。但是目前除嫁接外，几乎不能用其 他方法进行营养繁殖，扦插不易生根，嫁接又因接口处易发生氧化褐 变而难以成活，嫁接成活率很低，而且还要先培育砧木，较费工费力。 因此，组培快速繁殖技术是解决核桃无性繁殖的很好办法。
技术实现思路
本专利技术涉及新疆薄皮核桃的组织培养和快速繁殖方法，该方法由 获得无菌苗、芽的增范、诱导芽牛报和练苗与移栽四个歩骤完成，提 供了人田外植体的消毒处理方法、最佳的芽增殖培养基和诱导芽生根 培养基。可以在短时间里获得人量新疆薄皮核桃种苗，适用于新疆薄 皮核桃的产业化育种，也为新疆薄皮核桃的优良品种选择和转基因研 究奠定了基础。专利技术所述的薄皮核桃的组织培养和快速繁殖方法，山获得无菌 市、芽的增殖、芽的生根和练ffi与移栽步骤完成，具体操作按下列步 骤进行a、 剪取大田核桃枝条，用自来水流动冲洗10-180 min，然后将 枝条剪切成1-2 cm茎段，然后将茎段在超净工作台上用75%酒精表 面消毒10-180 s， 0. 1%升汞灭菌1-30 min， 15%双氧水处理10-120 min，无菌水冲洗4-6次；b、 将步骤a中处理后的茎段接入诱导培养基DKW+TDZ 0. 1-2.0 mg/L +IBAO. 01-0.5 mg/L中,温度23士1 。C ，光照2500-3000 lx， 时间16 h/d， 20-35d进行诱导培养； .c、 将步骤b中诱导培养出的新长腋芽苗切成带一个腋芽的茎段， 接入培养基DKW+6-BA 0. 1-2. Omg/L +IBA 0. 001-0. 5 mg/L中，置于 温度23土1 。C，光照3000-4000 lx，时间16 h/d进行培养；d、 将步骤c中1.0-2.0 cm的幼苗切下，接入培养基(1/8-1) DKW+IBA 1-20mg/L中，置于温度23 ±1 'C ，黑暗处理1-20天诱导 根源基生成；或将步骤c中1. 0-2. 0 cm的幼苗切下，将其根部放入经常规灭 菌后的IBA溶液中处理10-180 min，再接入培养基(1/8-1) DKW中 并于置于温度23士1 °C，黑暗处理1-20天条件下诱导根源基生成；e、 将步骤d中的经黑暗处理的幼苗，接入培养基(1/8-1) DKW 中并于置于温度23士1 °C，光照3000-4000 lx，时间24h/d进行培 养，诱导根的生成；或将步骤d中的幼苗取消黑暗处理，置于温度23±1 °C，光照 3000-4000 lx，时间24 h/d进行培养，诱导根的生成；f、 将步骤e中生根的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗2-6d， 洗去苗根部的培养基，移入用灭菌剂处理过的腐殖土:珍珠岩:蛭石混 合的介质中，置于温室，每天敞开薄膜，通风数次，20 d后幼苗成 活率达45%。步骤a中的剪切的茎段为每一茎段含一个腋芽。 该方法中所用的培养基DKW均为固体培养基。 步骤d中工BA溶液浓度为5-200mg/L。 步骤g中腐殖土 珍珠岩蛭石为3:1:1。本专利技术所述新疆薄皮核桃的组织培养和快速繁殖方法其优点在于方法简单，遗传稳定性好。本专利技术所采用组织培养方法，简单实 用，对设备和条件的要求较低，快繁出的试管市遗传稳定性好。生根方法简单，根质量好，.易于移栽成活。本专利技术所采用的两种 牛根方法简单，可操作性强，牛根率高，根质量好，移栽易于成活， 解决/新疆核桃组培快繁长期以来的技术瓶颈。繁殖速率快，培育周期短。避免了用叶片等组织诱导成苗必须要 经过的愈伤阶段，保证繁殖速率快，培育周期短。本专利技术经过大量试验结果表明在培养条件温度23士1 °C，光照3000-4000 lx，时间16 h/d下，培养基DKW+6-BA 0. 1-2. Omg/L + IBA 0. 001-0. 5 mg/L上的平 均芽增殖率为3-5。按培养周期l个月计算，理论上一棵无菌苗一年能 产生5X 10'1-2X 108棵苗，满足优良核桃苗木市场供不应求的状况。不受季节限制，可实现工厂化育苗。本专利技术所采W组织培养方法 不受季节限制，可常年连续生产，克服了常规营养繁殖扦插、嫁接的 季节限制。附图说明图1为本专利技术高效消毒方法获得的腋芽萌动图 图2为本专利技术诱导茎段腋芽生成的幼苗图 图3为本专利技术腋芽增殖20-30 d后的效果图 图4为本专利技术用于生根的幼苗 图5为本专利技术诱导生根30 d时的效果 — 图6为本专利技术炼苗时期图 图7为本专利技术移栽存活后的苗图具体实施方式本专利技术采用新疆优良薄皮核桃品种新温185号或新新2号的茎 段为快繁对象实施例1:a、 剪取新温185号大田核桃枝条，用自来水流动冲洗IO min， 然后将枝条剪切成lcm茎段，每一茎段含一个腋芽，然后将茎段在超 净工作台上用75%酒精表面消毒10s， 0. 1%升汞灭菌lmin， 15%双 氧水处理10min，无菌水冲洗4次；b、 将处理后的茎段接入启动诱导固体培养基DKW+TDZ 0.1 mg/L +IBA0.01mg/L中，温度23士1 。C，光照25001x，时间16 h/d， 20d 进行诱导培养；c、 将诱导出的新长腋芽苗切成带一个腋芽的茎段接入固体培养 基DKW+6-BA 0. lmg/L +IBA 0. 001mg/L中，置于温度23±1 。C，光照30001x，时间16 h/d进行培养；d、 将培本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种薄皮核桃的组织培养和快速繁殖方法，其特征在于由获得无菌苗、芽的增殖、芽的生根和练苗与移栽步骤完成，具体操作按下列步骤进行： ａ、剪取大田核桃枝条，用自来水流动冲洗１０－１８０ｍｉｎ，然后将枝条剪切成１－２ｃｍ茎段，然后将茎段在超净工作台上用７５％酒精表面消毒１０－１８０ｓ，０．１％升汞灭菌１－３０ｍｉｎ，１５％双氧水处理１０－１２０ｍｉｎ，无菌水冲洗４－６次； ｂ、将步骤ａ中处理后的茎段接入诱导培养基ＤＫＷ＋ＴＤＺ０．１－２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．０１－０．５ｍｇ／Ｌ中，温度２３±１℃，光照２５００－３０００ｌｘ，时间１６ｈ／ｄ，２０－３５ｄ进行诱导培养； ｃ、将步骤ｂ中诱导培养出的新长腋芽苗切成带一个腋芽的茎段，接入培养基ＤＫＷ＋６－ＢＡ０．１－２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．００１－０．５ｍｇ／Ｌ中，置于温度２３±１℃，光照３０００－４０００ｌｘ，时间１６ｈ／ｄ进行培养； ｄ、将步骤ｃ中１．０－２．０ｃｍ的幼苗切下，接入培养基（１／８－１）ＤＫＷ＋ＩＢＡ１－２０ｍｇ／Ｌ中，置于温度２３±１℃，黑暗处理１－２０天诱导根源基生成； 或将步骤ｃ中１．０－２．０ｃｍ的幼苗切下，将其根部放入经常规灭菌后的ＩＢＡ溶液中处理１０－１８０ｍｉｎ，再接入培养基（１／８－１）ＤＫＷ中并于置于温度２３±１℃，黑暗处理１－２０天条件下诱导根源基生成； ｅ、将步骤ｄ中的经黑暗处理的幼苗，接入培养基（１／８－１）ＤＫＷ中并于置于温度２３±１℃，光照３０００－４０００ｌｘ，时间２４ｈ／ｄ进行培养，诱导根的生成； 或将步骤ｄ中的幼苗取消黑暗处理，置于温度２３±１℃，光照３０００－４０００ｌｘ，时间２４ｈ／ｄ进行培养，诱导根的生成； ｆ、将步骤ｅ生根的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗２－６ｄ，洗去苗根部的培养基，移入用灭菌剂处理过的腐殖土∶珍珠岩∶蛭石混合的介质中，置于温室，每天敞开薄膜，通风数次，２０ｄ后幼苗成活率达４５％。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王晓军，胡石开，郝秀英，刘敏，徐琴，刘传军，
申请(专利权)人：中国科学院新疆理化技术研究所，
类型：发明
国别省市：65[中国|新疆]
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