藏獒精液冷冻稀释液制造技术

一种藏獒精液冷冻稀释液，属于动物繁殖技术领域。包括１液和２液，１液由氯化钙０．２０～０．５０ｇ、氯化钾０．１８～０．３６ｇ、氯化镁０．２２～０．４５ｇ、氯化钠３．５～５．８５ｇ、磷酸二氢钠０．３０～０．５５ｇ、碳酸氢钠１．３８～３．２０ｇ、丙酮酸钠０．０２５～０．０３６ｇ、加双蒸水定容至１Ｌ而成；２液取１液３５～５５ｍｌ，配犊牛血清２０～３０ｍｌ、卵黄２０～２５ｍｌ、甘油５～１０ｍｌ、青霉素１０００ＩＵ／ｍｌ混合而成渗透压为３００～３３０ｍｏｓｍｏ／ｌ，ｐＨ值为６．５～７．０的所述稀释液。该稀释液使藏獒冷冻精液的活力达到０．６～０．７，受胎率和窝产仔平均数分别达到７７．３％～８４％和４～５只，达到或接近了自交水平，是一种具有实际应用和推广价值的藏獒精液冷冻稀释液。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种藏獒精液冷冻稀释液，用于藏獒精液的冷冻及人工授精， 属于动物繁殖

技术介绍
犬的精液冷冻具有很高的应用价值，使用犬的精液冷冻与人工授精技术比自 然繁殖具有诸多的优越性。如可以高度发挥优秀种犬的利用率；减少各种疾 病的传播，特别是生殖系统疾病的传播；不受时空限制，引种方便快捷，而且 成本低效益高；种质资源可以得到有效保存，特别是对我国藏獒的品种保护和 发展具有重要的现实意义。目前，我国在藏獒精液冷冻与人工授精方面研究较少，且在繁殖方面未见比 较全面的资料报道。藏獒属于青藏高原的一个物种，传说纯种藏獒分布于我国 的甘肃、青海、四川省交界黄河第一湾一河曲。河曲藏獒被认为是真宗藏獒品 群，享有"东方神犬"美誉。藏獒长期受高海拔、低气温、低氧量的生态环境 影响，具备体型高大，性格刚毅凶猛等特点，深受我国甚至世界藏獒爱好者的 称赞。近20年来，藏獒文化、经济得到了快速的发展，藏獒养殖已使牧民形成 了致富的产业，给牧民带来了数以千万经济收入。但是，由于牧民对优秀纯种 藏獒血统保护意识薄弱，随意买卖，原始藏獒与当地牧羊犬血统混杂近亲繁殖 等，导致优秀纯种藏獒越来越少，这一珍稀犬种濒临灭绝的危机。据统计在我 国纯种藏獒不足百条，如今即使在青藏高原的原产地，想寻求一条纯种藏獒也 是很困难的。其次藏獒繁殖的季节性强，母獒每年只有一次发情，制约了纯种 藏獒的繁殖和培育。且藏獒精子与其它犬科动物的精子类似，在冻融过程中对 低温损伤的抗性较弱，冻融后精子活力下降，受孕率及窝产仔平均数均低于自 然繁殖。藏獒自然繁殖时的受胎率和窝产仔平均数低于其他犬种，约分别为 80% 85%， 5 7只。因此，如何长期低温保存优质纯种藏獒精液并充分利用优 良种源是本领域迫在眉睫需解决的问题。影响犬精液冷冻成功与否的关键因素之一是稀释液配方，稀释液质量的优 劣直接影响藏獒精液冷冻与人工受精的成败。目前国内外进行犬冷冻精液研究中应用最广泛的稀释液有两类 一类是卵黄一乳糖稀释液，其主要成分是卵黄、 乳糖、甘油和抗生素类；另一类是卵黄一tris稀释液，其主要成分是tris (三 羟甲基)、柠檬酸、果糖、甘油和卵黄，使用的抗菌素多为青霉素、链霉素和庆 大霉素。由潘寿文和禹学礼等实验证实两种稀释液中，卵黄一tris稀释液优于 卵黄一乳糖稀释液。(潘寿文等，畜牧与兽医，1986; (3): 105-106;禹学礼等， 洛阳农业高等专科学校学报1999; (2); 20 23;河南科技大学学报，2004;(2); 32-36)。但是就目前研究水平与自然繁殖相比，受胎率和窝产仔平均数 还存在一定差距。
技术实现思路
鉴于现有技术的不足，本专利技术提供一种藏獒精液冷冻稀释液，该稀释液进 一步降低了藏獒精子在冷冻过程中受过冷刺激所造成的损害，提高了冻精的活 力、复苏率、顶体的完整率等，从而使受胎率和窝产仔平均数明显提高，达到 或接近了自交水平。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是 一种藏獒精液冷冻稀释液， 该稀释液由1液和2液组成1液的各组分及重量为氯化钙0. 20 0. 50g、氯 化钾0. 18 0. 36 g、氯化镁0. 22 0. 45 g、氯化钠3. 5 5. 85 g、磷酸二氢钠 0. 30 0. 55g、碳酸氢钠1. 38 3. 20 g、丙酮酸钠0. 025 0. 036 g、加双蒸水 定容至1L而成；2液以1液为基础，取l液35 55mL，配犊牛血清20 30 mL、卵黄20 25mL、甘油5 10mL、青霉素1GGGIU/mL混合而成所述稀释液， 且该稀释液的渗透压为300 330mosmo/L， pH值为6. 5 7.0。本专利技术优选的配方是该稀释液由1液和2液组成，1液的各组分及重量为 氯化钙0. 30g、氯化钾0. 25 g、氯化镁0. 32 g、氯化钠5. 85 g、磷酸二氢钠 0. 45g、碳酸氢钠2. 38 g、丙酮酸钠G. 025 g、加双蒸水定容至1L而成；2液 以l液为基础，取l液50mL，配犊牛血清25mL、卵黄20mL、甘油5mL、 青霉素1000IU/mL混合而成所述稀释液，且该稀释液的渗透压为325mosmo/L， pH值为6.8。为藏獒精子存活提供最佳基质条件。本专利技术藏獒精液冷冻稀释液有以下用途， 一是用于藏獒精液低温保存，另 一用途是用于藏獒精液冷冻保存，如果去掉甘油等低温保护剂，则还可用于藏 獒精液的常温保存。本专利技术根据藏獒精细胞营养需要、渗透压、pH值及能量物质的吸收方式等 生理特性，将传统犬的稀释液配方中的营养物质糖，如葡萄糖、蔗糖、果糖、 乳糖、棉籽糖等用犊牛血清替代，作为精细胞能量代谢的来源，并对其他电解 质作了较大的调整，以维持精子内外环境的渗透压平衡。此外，本稀释液用磷 酸二氢钠和碳酸氢钠作缓冲剂，同时还加入青霉素等杀菌剂，甘油等保护剂，提高稀释液的冷冻保护效果。使该稀释液的渗透压为300 330mosmo/L、 pH值 为6.5 7.0，为藏獒精子存活提供了最佳基质条件，进一步降低了藏獒精子在 冷冻过程中受过冷刺激所造成的损害，从而使冻精的活力、复苏率、顶体的完 整率、冷冻精子的受胎率和窝产仔平均数等指标分别达0.65士0.05、 82. 3± 5.55、 51.2±1.23、 84%和5只，相比传统卵黄-乳糖稀释液及卵黄-Tris稀释液 的O. 30±0. 03、 38. 40±4. 56、 29. 4± 1.29、 22%和2只及0. 47±0. 04、 59.58 ±4.63、 31.9±1.60、 57. 1%和3只(禹学礼等，洛阳农业高等专科学校学报， 1999; (2): 20-23)均有显著的提高，并且在近几年的实验中，各项指标更加 趋于稳定，如下表。2007-2008两年度藏獒冷冻精液及人工授精试验结果<table>table see original document page 5</column></row><table>显然，本专利技术的稀释液使藏獒冷冻精液的活力可达到0.6 0.7，受胎率和 窝产仔平均数可分别达到77.3% 84%和4 5只，达到或接近了自交水平，所以 本专利技术是一种具有实际应用和推广价值的藏獒精液冷冻稀释液。具体实施例方式本专利技术中所用的化学试剂均选择分析纯。实施例1。 一种藏獒精液冷冻稀释液，该稀释液由1液和2液组成，1液的 各组分及重量为氯化钙0.30g、氯化钾0.25g、氯化镁0.32g、氯化钠5. 85 g、磷酸二氢钠0. 45g、碳酸氢钠2. 38 g、丙酮酸钠0. 025 g、加双蒸水定容至 1L而成，并加热溶解，以本领域常规方法过滤消毒，留滤液为l液；2液以1 液为基础，在无菌条件下，取l液50mL，配犊牛血清25mL、卵黄20mL、甘油5mL、青霉素1000IU/mL混合而成所述稀释液，且该稀释液的渗透压为 325mosmo/L， pH值为6.8，其对藏獒精液冷冻保存效果极佳。使用时，按h 2 比例与藏獒精液进行同温稀释。实施例2 。 一种藏獒精液冷冻稀释液，该稀释液由1液和2液组成，1液的 各组分及重量为氯化钙0.20g、氯化钾0. 18g、氯化镁0.22g、氯化本文档来自技高网...

【技术保护点】
藏獒精液冷冻稀释液，其特征在于：该稀释液由１液和２液组成：１液的各组分及重量为：氯化钙０．２０～０．５０ｇ、氯化钾０．１８～０．３６ｇ、氯化镁０．２２～０．４５ｇ、氯化钠３．５～５．８５ｇ、磷酸二氢钠０．３０～０．５５ｇ、碳酸氢钠１．３８～３．２０ｇ、丙酮酸钠０．０２５～０．０３６ｇ、加双蒸水定容至１Ｌ而成；２液以１液为基础，取１液３５～５５ｍＬ，配犊牛血清２０～３０ｍＬ、卵黄２０～２５ｍＬ、甘油５～１０ｍＬ、青霉素１０００ＩＵ／ｍＬ，混合而成所述稀释液，且该稀释液的渗透压为３００～３３０ｍｏｓｍｏ／Ｌ，ｐＨ值为６．５～７．０。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张尤嘉，张振韬，
申请(专利权)人：张尤嘉，
类型：发明
国别省市：62[中国|甘肃]