一种His标签抗原的合成方法技术

一种His标签抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明专利技术包括：His标签半抗原的设计与合成，His标签完全抗原的合成。本发明专利技术以6个His多肽的His‑tag为单位，两个多肽序列之间间隔3个天冬氨酸，形成含有三个His‑tag单位的多肽序列，并且在序列氨基端增加一个半胱氨酸，从而可以利用SPDP将半胱氨酸的巯基将多肽序列和载体蛋白进行偶联。将制备的抗原进行小鼠免疫，得到了效价高、竞争抑制效果好的抗His‑tag的抗体，因此表明这是一种His‑tag抗原的合成有效方法，为His‑tag抗体的制备提供了重要的理论依据。

A synthetic method of His tag antigen

A synthesis method of His label antigen belongs to the field of bio chemical technology. The invention includes the design and synthesis of the His label hapten, and the synthesis of the complete antigen of the His label. The invention uses 6 His polypeptide His tag as a unit, the interval between the two peptide sequences of 3 aspartic acid, the formation of peptide sequence containing three His tag units, and an increase in cysteine amino terminal sequence, which can use SPDP to the sulfhydryl group of cysteine polypeptide sequence and carrier protein coupling. The preparation of the antigen for immunization of mice, the effect of high titer and good anti His antibody competitive inhibition tag, so that this is an effective method for synthesis of His tag antigen, preparation for the His tag antibody for the important theoretical basis for the.

【技术实现步骤摘要】
一种His标签抗原的合成方法
本专利技术属于生物化工
，具体涉及一种His标签抗原的合成方法。
技术介绍
His-tag是由6个组氨酸组成的短肽，其特点是分子量小，基本不改变蛋白质的生物结构，不改变蛋白质的溶解性，专门设计用于重组蛋白质的吸附纯化，利用组氨酸上的咪唑环可以与二价金属离子结合的原理，人们可以利金属离子亲和层析技术纯化带有His-tag的蛋白，与其他标签相比，His-tag有工艺成熟、操作简单和可大规模生产使用等优势，是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。His-tag抗体可以识别His-tag，因此可以用来鉴定带有His-tag的蛋白质的表达量、细胞定位以及其它特性。目前市场上商品化的His-tag抗体种类较多，但是对其抗体制备的研究报道却很少，在现有的研究方法中，主要是以6个His多肽序列作为半抗原，通过戊二醛法或碳二亚胺法将其偶联到载体蛋白作为免疫原进行动物免疫，以获得His-tag抗体。因此需要近一步开发新的免疫原合成以及高灵敏高特异性抗体的制备方法。
技术实现思路
要解决的技术问题：His-tag是由6个组氨酸组成的短肽，分子量小，因此免疫原性较小，并本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种His标签抗原的合成方法，其特征在于包括如下步骤：His标签半抗原的设计与合成His标签半抗原的多肽序列组成为：5’‑CHHHHHHDDDHHHHHHDDDHHHHHH‑3’；根据设计出的多肽序列，使用多肽合成仪进行多肽序列的合成；His标签完全抗原的合成His标签完全抗原的合成流程为：

【技术特征摘要】
1.一种His标签抗原的合成方法，其特征在于包括如下步骤：His标签半抗原的设计与合成His标签半抗原的多肽序列组成为：5’-CHHHHHHDDDHHHHHHDDDHHHHHH-3’；根据设计出的多肽序列，使用多肽合成仪进行多肽序列的合成；His标签完全抗原的合成His标签完全抗原的合成流程为：使用异双功能团交联剂N-琥珀酰胺-3-(2-吡啶二硫)-丙酸酯SPDP将钥孔血蓝蛋白KLH和His标签多肽进行偶联；首先将SPDP用N,N-二甲基甲酰胺进行溶解，配置成10mg/mL的浓度，称取10mgKLH，将其用pH7.50.01M的PBS缓冲液进行溶解，配置成5mg/mL的浓度，在搅拌的状态下逐滴加入SPDP溶液，使得KLH和SPDP以1:10~1:50的摩尔比进行反应，室温反应30~60min后，将反应溶液用pH7.40.01M的PBS缓冲液透析3次，以除去多余的SPDP；在以上得到的溶液中加入二硫苏糖醇使得其终浓度为1mM，在搅拌状态下反应30min后，将溶液用超滤管进行超滤，以除去多余的二硫苏糖醇再用PBS缓冲液将溶液重悬；向二硫苏糖醇处理的溶液中以KLH:His标签多肽为1:10~1:50的摩尔比加入His标签多肽，在室温条件下搅拌反应2~4h，反应完成后，将溶液用PBS缓冲液进行透析，从而得到His标签完全抗原。2.根据权利要求1所述的一种His标签抗原的合成方法，其特征在于步骤（2）中所述的KLH和SPDP反应的摩尔比为1:20。3.根据权利要求1所述的一种His标签抗原的合成方法，其特征在于步骤（2）中所述的KLH和SPDP的反应时间为40min。4.根据权利要求1所述的一种His标签抗原的合成方法，其特征在于步骤（2）中所述的KLH和His标签多肽反应的摩尔比为1:30。5.根据权利要求1所述的一种His标签抗原的合成方法，其特征在于步骤（2）中所述的His标签多肽加入后的反应时间为3h。6.一种应用权利要求1所述的一种His标签抗原的合成方法合成的抗原制备His标签抗体的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）动物免疫用权利要求1制备的人工抗原作免疫原...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨蕾，
申请(专利权)人：杨蕾，
类型：发明
国别省市：浙江,33