人甲状腺未分化癌细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术公开了人甲状腺未分化癌细胞系及其应用，其命名为人甲状腺未分化癌细胞ZJB‑ATC1，于2017年03月31日保藏于武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201753。本发明专利技术的人甲状腺未分化癌细胞系，可长期体外传代，大量扩增，具有较强的增殖活性；分化类型为未分化，可作为有效的研究细胞模型，为研究者深入开展人甲状腺未分化癌的病因学、转移机制、耐药机理、新药筛选等提供新的实验模型。

Human thyroid undifferentiated carcinoma cell line and its application

The invention discloses a human anaplastic thyroid carcinoma cell line and its application, which is named human anaplastic thyroid cancer cell ZJB ATC1, 03 2017 to 31 August is preserved in the Wuhan University Chinese type culture collection center, the preservation number is CCTCC NO:C201753. The invention of human anaplastic thyroid cancer cell lines, long-term cultured in vitro, proliferation, with strong proliferation; differentiation of undifferentiated cells, can be used as a research model effectively, researchers carry out human anaplastic thyroid cancer etiology, transfer mechanism, the mechanism of drug resistance, drug screening etc. a new experimental model.

【技术实现步骤摘要】
人甲状腺未分化癌细胞系及其应用
本专利技术属于细胞系领域，具体涉及人甲状腺未分化癌细胞系及其应用。
技术介绍
甲状腺未分化癌(Anaplasticthyroidcancer,ATC)是恶性程度(致死率)较高的实体性肿瘤，其发病率不超过甲状腺癌的5％，但死亡率占甲状腺癌的50％(甲状腺未分化癌死亡患者占甲状腺癌死亡患者的一半)。由于甲状腺未分化癌病程发展迅猛，确诊时往往局部已侵犯周围的器官，如气管、食管、血管、肌肉等，且约50％病人已有肺、骨、脑、肝等远处转移，即使给予积极的治疗，也仅极少病人能长期生存，一般从诊断到死亡的中位生存期仅4～8个月。UICC、AJCC将所有ATC都分为Ⅳ期。ATC可采用手术、放疗、化疗、靶向治疗等治疗方式，但各治疗手段往往不能控制疾病的进展，目前仍然缺乏标准治疗模式。人恶性肿瘤细胞系的建立，为了解肿瘤的生物学特性、研究其癌变、分子遗传以及转移演变机制等提供丰富的实验材料，从而为建立标准治疗模式提供帮助。由于甲状腺未分化癌发病率低、死亡率高，进行大样本的随机对照研究较困难，因此，丰富甲状腺未分化癌细胞株库具有重要作用。目前甲状腺未分化癌细胞系种类较少，甲状腺未分化癌常用永生细胞系主要为CAL-62、8305C、KMH-2、DRO、FRO等。RebeccaE.Schweppe通过STR方法对ATC细胞库中40株甲状腺癌细胞进行DNA分析，研究结果发现仅23株保持独立的基因型，其他株细胞系被污染或为其他细胞系来源，其中，甲状腺未分化癌DRO90-1为黑色素瘤A-375细胞系来源；甲状腺未分化癌ARO81-1为结肠癌细胞系HT-29衍生物，甲状腺未分化癌细胞系库告急。因此，迫切需要科研工作者建立新的人甲状腺未分化癌细胞系，从而建立较为完备的甲状腺未分化癌细胞系库，为研究肿瘤异质性提供合适的体外模型。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种人甲状腺未分化癌细胞系及其应用，该人甲状腺未分化癌细胞系能够大量扩增，且可长期在体外传代培养。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案是：人甲状腺未分化癌细胞系，命名为人甲状腺未分化癌细胞ZJB-ATC1，于2017年03月31日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCCNO：C201753。本专利技术还提供如上所述的人甲状腺未分化癌细胞系的子代细胞系。在本专利技术的一些实施例中，如上所述人甲状腺未分化癌细胞系或其子代细胞系中，CK表达为阳性(+)，CD68表达为阴性(－)，DES表达阴性(－)，Ki67表达为阳性(+,60％)，Pax-8表达为阴性(－)，SMA表达阴性(－)，TG表达为阴性(－)，TTF1表达为阴性(－)。本专利技术还提供如上所述人甲状腺未分化癌细胞系或其子代细胞系在作为人甲状腺未分化癌的细胞模型中的应用。本专利技术还提供如上所述人甲状腺未分化癌细胞系或其子代细胞系在研究人甲状腺未分化癌发生、发展、转移机理中的应用。本专利技术还提供如上所述人甲状腺未分化癌细胞系或其子代细胞系在研究人甲状腺未分化癌的耐药机理或筛选治疗人甲状腺未分化癌药物中的应用。本专利技术中，提供了一种人甲状腺未分化癌细胞系的建立方法：获取甲状腺未分化癌患者的癌组织标本进行酶消化原代培养，原代培养3周进行单细胞悬液克隆纯化，后开始每周传代1次，持续稳定培养至今，已传代数50代以外，活性较强且能稳定传代，命名该甲状腺未分化癌细胞系为ZJB-ATC1。本专利技术通过光学形态观察发现该人甲状腺未分化癌细胞系ZJB-ATC1贴壁细胞纤维形，且细胞性状稳定，可稳定多次传代。该人甲状腺未分化癌细胞系ZJB-ATC1的病理学鉴定表明其与标本组织形态相同：细胞呈圆形，核浆比例大，核仁较明显，核膜清晰，核分裂像比较多，确定为癌组织来源细胞，且判定为未分化细胞株。该人甲状腺未分化癌细胞系ZJB-ATC1的CK(光谱细胞角质蛋白)、CD68、DES(结蛋白)、Ki67(Ki67核抗原)、Pax-8(配对盒基因8)、SMA(肌动蛋白)、TG(甲状腺球蛋白)、TTF1(甲状腺转录因子1)免疫组化分析结果为：CK表达为阳性(+)，CD68表达为阴性(－)，DES表达阴性(－)，Ki67表达为阳性(+,60％)，Pax-8表达为阴性(－)，SMA表达阴性(－)，TG表达为阴性(－)，TTF1表达为阴性(－)，同时结合HE染色结果，证实ZJB-ATC1为甲状腺未分化癌株。通过对该人甲状腺未分化癌细胞系ZJB-ATC1进行遗传物质STR分析，并在数据库中进行STR序列检索，未发现与该细胞匹配的位点，鉴定其为新的单一细胞株。同时，本专利技术研究还表明该人甲状腺未分化癌细胞系ZJB-ATC1大量扩增，具有较强的增殖活性。综合可见，本专利技术人甲状腺未分化癌细胞系ZJB-ATC1作为新的单一细胞株，丰富了人甲状腺未分化癌细胞系库；同时，其能够稳定传代，且能大量扩增和长期在体外传代培养，可作为有效的研究细胞模型，为研究者深入开展甲状腺未分化癌的病因学、转移机制、耐药机理、新药筛选等提供新的实验模型。相比于现有技术，本专利技术的有益效果如下：(1)本专利技术的人甲状腺未分化癌细胞系ZJB-ATC1贴壁细胞纤维形，且细胞性状稳定，可稳定多次传代。(2)本专利技术的人甲状腺未分化癌细胞系ZJB-ATC1经STR鉴定为新的单一细胞株。(3)本专利技术的人甲状腺未分化癌细胞系ZJB-ATC1为未分化细胞株，丰富人甲状腺未分化癌细胞系库。(4)本专利技术的人甲状腺未分化癌细胞系ZJB-ATC1，具有较强的增殖活性，能大量扩增和长期在体外传代培养，可作为有效的研究细胞模型，可为研究者深入开展甲状腺未分化癌的病因学、转移机制、耐药机理、新药筛选等提供新的实验模型。生物材料的保藏本专利技术的人甲状腺未分化癌细胞系，命名为人甲状腺未分化癌细胞ZJB-ATC1，于2017年03月31日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072)，保藏编号为CCTCCNO：C201753。附图说明图1A～图1D依次分别为实施例1得到的ZJB-ATC1细胞系P0、P6、P17、P50代细胞的光学形态图片，放大倍数为40倍。图2为实施例1得到的ZJB-ATC1细胞系的细胞生长曲线图。图3A和图3B分别为实施例1中ZJB-ATC1细胞系与原组织(临床甲状腺未分化癌细胞组织标本)的HE染色图片，放大倍数为40倍。图4A1、图4A2为分别为ZJB-ATC1细胞、患者甲状腺未分化癌细胞组织的CK检测结果。图4B1、图4B2分别为ZJB-ATC1细胞、患者甲状腺未分化癌细胞组织的CD68表达检测结果。图4C1、图4C2分别为ZJB-ATC1细胞、患者甲状腺未分化癌细胞组织的DES表达检测结果。图4D1、图4D2分别为ZJB-ATC1细胞、患者甲状腺未分化癌细胞组织的Ki67表达检测结果。图4E1、图4E2分别为ZJB-ATC1细胞、患者甲状腺未分化癌细胞组织的Pax-8表达检测结果。图4F1、图4F2分别为ZJB-ATC1细胞、患者甲状腺未分化癌细胞组织的SMA表达检测结果。图4G1、图4G2分别为ZJB-ATC1细胞、患者甲状腺未分化癌细胞组织的TG表达检测结果。图4H1、图4H2分别为ZJB-ATC1细胞、患者甲状腺未分化癌细胞组织本文档来自技高网...

【技术保护点】
人甲状腺未分化癌细胞系，其特征在于，命名为人甲状腺未分化癌细胞ZJB‑ATC1，保藏编号为CCTCC NO：C201753。

【技术特征摘要】
1.人甲状腺未分化癌细胞系，其特征在于，命名为人甲状腺未分化癌细胞ZJB-ATC1，保藏编号为CCTCCNO：C201753。2.如权利要求1所述人甲状腺未分化癌细胞系的子代细胞系。3.如权利要求1所述人甲状腺未分化癌细胞系或如权利要求2所述子代细胞系在作为人甲状腺未分化癌的细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小珍，葛明华，郑智国，凌志强，孙文勇，徐海苗，王佳峰，
申请(专利权)人：浙江省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：浙江,33