一株银耳菌株及其应用制造技术

本发明专利技术筛选出一株高产银耳多糖的银耳（

【技术实现步骤摘要】
一株银耳菌株及其应用
本专利技术涉及一株银耳孢子及该菌种在生产高分子量银耳多糖的应用，属于微生物发酵工程领域。
技术介绍
银耳多糖是一种酸性杂多糖，从银耳(TremellafuciformisBerk)子实体、银耳孢子或银耳包子发酵液中得到的，其主链结构是由α-(1→3)糖苷键连接的甘露聚糖，支链由葡萄糖醛酸和木糖组成。银耳多糖具有改善机体免疫功能及提升白细胞的作用：可显著提高实验动物网状内皮细胞的吞噬功能，有促进非特异性免疫作用，提高免疫球蛋白、血清总补体的水平。银耳多糖还能增加脑和肝组织中的SOD活力，具有延缓衰老的作用。此外，银耳多糖还能保护胰岛β细胞，降低高血压大鼠的血清中胆固醇水平，降低血小板粘附率和血液粘度，具有降血糖、调节血脂预防血栓的功效。另外，银耳多糖还能够保护胃粘膜，用于治疗急性胃溃疡。因此，银耳多糖广泛应用于医药及保健品中。银耳多糖具有卓越的保湿锁水能力，应用于护肤类化妆品，具有修复表皮、增加表皮含水量的功能，提高角质层水分含量，提高皮肤电导率积分值，保水能力，降低水释放常数，能提高皮肤的屏障功能，防止水分从皮肤的蒸发。而且，银耳多糖具有良好的润滑性和成膜性，添加银耳多糖的护肤品涂抹时润滑感明显，具有良好的手感，可在皮肤表面形成一层均匀的薄膜，使皮肤具有良好的滑爽感和湿润感，不收缩，干爽不紧绷，对皮肤起到保护作用。在护发品产品中，可以在头发表面形成一层保护膜，起到保湿、润滑，消除静电。此外，银耳多糖还具有一定的清除羟基自由基的能力，可作为抗衰老成分应用到化妆品中。银耳多糖是一种天然保湿原料，不但能够高效保湿，而且具有抗衰老、抗氧化的作用，因此往往被用于高档化妆品中。市面上获得银耳多糖的方法为子实体提取法，相比提取法，银耳孢子发酵法具有生产周期短，多糖纯度高，易产业化等优点。目前孢子发酵法生产银耳多糖，分子量低，产率低，无法满足市场对大分子银耳多糖的需求。
技术实现思路
为解决孢子发酵法生产银耳多糖，分子量低，产率低的问题，本专利技术提供了一株从自然界中筛选的银耳孢子菌株HX5-1及该菌株在发酵法生产银耳多糖中的应用。本专利技术的另一目的是提供一种工业化银耳孢子发酵培养基。本专利技术的再一目的是提供一种发酵法生产高分子量银耳多糖的方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案。一株银耳（Tremellafuciformis）孢子菌株HX5-1，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCCM2017271。所述银耳孢子菌株的ITS序列为SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。所述银耳孢子菌株HX5-1在生产银耳子实体中的应用。所述银耳孢子菌株HX5-1在生产银耳多糖中的应用。一种银耳孢子发酵培养基，包括以下组分：大麦蛋白胨3-8g/L，酵母蛋白胨3-8g/L，葡萄糖10-20g/L，磷酸二氢钾1-5g/L，硫酸镁1-3g/L和VB110-20mg/L。一种发酵法生产高分子量银耳多糖的方法，采用以下步骤：（1）种子液制备：将银耳菌种HX5-1接入种子培养基，摇瓶发酵，获得种子液；（2）三阶段通气发酵：将种子液接入发酵罐培养基中，通气搅拌培养，流加方式间歇补料，发酵至无残糖时结束发酵，获得发酵液；（3）醇沉：将氯化钠加入步骤（2）发酵液中溶解，以乙醇沉淀获得粗品；（4）脱色：将粗品用水溶解，离心，将上清液用活性炭吸附后过滤，得滤液；（5）除蛋白：调节滤液pH值，处理后过滤，得到精滤液；（6）精制：加入氯化钠，充分溶解，用乙醇沉淀精滤液，并用乙醇反复洗涤沉淀；（7）干燥：将洗涤后的沉淀进行真空干燥得高分子量银耳多糖产品。所述步骤（1）的种子培养基为银耳发酵培养基，pH值为5.0-7.0；转速为200-500rpm，发酵时间为2-3天。所述步骤（2）的液体培养基为银耳发酵培养基，发酵期间用40%NaOH调控pH值为5.0-7.0；所述接种量为1-10%，优选为3-5%；温度为26-35℃，优选为28-32℃。所述步骤（2）的搅拌速度为100-300rpm；通气量为：初始1-2vvm，24h后1-3vvm，48h后2-5vvm至发酵结束；发酵结束时，发酵液的pH值为6.0-7.0，粘度大于15000mPa·s，银耳多糖的含量为10-20g/L。所述步骤（3）的氯化钠添加量为发酵液的1-5%（w/v）；乙醇浓度为90-95%（v/v），用量为发酵液的2-3倍。所述步骤（4）的粗品用2-5倍水溶解，使其粘度为100-120mPa.s；离心条件为5000-10000r/min，10-30min；活性炭粒径为200目，用量为0.5-1.5%（w/v）；吸附时间为0.5-2h，吸附温度为40-60℃。所述步骤（5）滤液pH值为大于10.5，处理时间为1-2h；精滤介质为孔径0.45μm的滤芯。所述步骤（6）氯化钠的添加量为精滤液的1-5%（w/v）；乙醇浓度为90-95%（v/v），用量为精滤液体积的3-4倍。所述步骤（7）真空干燥的温度为小于60℃；干燥至失重小于10%；所述高分子量银耳多糖产品，总糖含量大于80%，分子量大于1500KDa，蛋白质含量小于0.5%。本专利技术具有以下优点：本专利技术发酵培养基采用筛选得到大麦蛋白胨，较利于银耳孢子HX5-1生产高分子银耳多糖；同时相对分子质量较小，易于被微生物生长所吸收，且其碳水化合物总含量较高，能提供更多的营养物质以及荚膜的形成，进而提高微生物的生长浓度和产糖量。而酵母蛋白胨营养丰富，可促进微生物的生长和代谢，提高生产效率。植物蛋白胨和酵母蛋白胨相较于动物源蛋白胨无可能存在致病性和风俗禁忌问题的弊端，此种配方利用范围更加广泛。本专利技术通过三阶段控制通气量，利于银耳孢子生长及高分子量银耳多糖的积累，银耳多糖高产量。发酵法生产的银耳多糖液，杂质多为蛋白质及发酵液残留物质，本专利技术经初步乙醇沉淀得到的多糖粗品，可去除培养基中残留的小分子杂质；通过活性炭吸附可去除颜色物质等杂质；在吸附过程中进行加热，可对大分子蛋白质进行热变性絮凝为沉淀，经过滤可去除。本专利技术的银耳孢子菌株通过三阶段通气发酵，银耳多糖产量高；通过醇沉-脱色-除蛋白-精制-干燥，可获得总糖含量大于80%、分子量大于1500KDa、蛋白质含量小于0.5%的高分子量银耳多糖产品，含量高、杂质少，分子量大，在银耳多糖工业化生产中具有广阔的应用前景。菌种保存信息银耳（银耳芽孢）（Tremellafuciformis）5-1，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保存地址为：中国武汉武汉大学，保藏编号为：CCTCCNO：M2017271，保存日期为2017年5月17日。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不受下述实施例的限制。实施例1菌株的分离纯化与鉴定选择种耳：在全国各地采集挑选朵大、色白、肉厚、展片正常、无杂菌和病虫感染及成熟度达80-90%的野生银耳分别编号后作为种耳。将种耳以无菌水消毒后，除去孢子上的杂菌，用无菌纱布或吸水纸擦干耳片表面。弹射孢子：取一小片选好的种耳，使其悬在三角瓶的中间，不触及瓶壁或瓶下面的培养基，种耳距培养基表面4-5cm。将三角瓶置于培养箱内，30℃培养2天，当培养基表面长有雾状的孢子及小菌落时，取出种耳，塞棉塞，继续培养。2-3天后，在培养基表面可见本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株银耳（

【技术特征摘要】
1.一株银耳（Tremellafuciformis）孢子菌株HX5-1，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCCM2017271。2.一种银耳孢子菌株HX5-1在生产银耳子实体和生产银耳多糖中的应用。3.一种银耳孢子菌株的发酵培养基，包括以下组分：大麦蛋白胨3-8g/L，酵母蛋白胨3-8g/L，葡萄糖10-20g/L，磷酸二氢钾1-5g/L，硫酸镁1-3g/L和VB110-20mg/L。4.一种发酵法生产高分子量银耳多糖的方法，其特征在于，采用以下步骤：（1）种子液制备：将银耳菌种HX5-1接入种子培养基，摇瓶发酵，获得种子液；（2）三阶段通气发酵：将种子液接入发酵罐培养基中，通气搅拌培养，流加方式间歇补料，发酵至无残糖时结束发酵，获得发酵液；（3）醇沉：将氯化钠加入步骤（2）发酵液中溶解，用乙醇沉淀获得粗品；（4）脱色：将粗品用水溶解，离心，将上清液用活性炭吸附后过滤，得滤液；（5）除蛋白：调节滤液pH值，处理后过滤，得精滤液（6）精制：加入氯化钠，充分溶解，用乙醇沉淀精滤液，并用乙醇反复洗涤沉淀；（7）干燥：将洗涤后的沉淀进行真空干燥得高分子量银耳多糖产品。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤（1）的液体培养基为银耳发酵培养基，pH值为5.0-7.0；转速为100-200rpm，发酵时间为2-3天。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤（2）的液体培养基为银耳发酵培养基，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张天萌，郭文逸，孙劭靖，郭学平，
申请(专利权)人：华熙福瑞达生物医药有限公司，山东华熙海御生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37