杀虫基因和使用方法技术

提供了具有杀虫活性的组合物及其使用方法。组合物包括具有杀虫活性的分离的和重组的多肽、编码所述多肽的重组的合成的核酸分子、包含所述核酸分子的DNA构建体和载体、包含所述载体的宿主细胞，以及针对所述多肽的抗体。编码该多肽的多核苷酸序列可用于DNA构建体或表达盒中，用于在目的生物中转化和表达。所提供的组合物和方法可用于产生具有增强的害虫抗性或耐受性的生物。还提供了包含编码本发明专利技术的杀虫蛋白的核苷酸序列的转基因植物和种子。这些植物对昆虫和其他害虫具有抗性。提供了用于产生本文公开的多种多肽的方法，以及使用那些多肽来控制或杀灭害虫的方法。还包括用于在样品中检测本发明专利技术多肽的方法和试剂盒。

Insecticidal Genes and methods of use

A composition with insecticidal activity and a method for using it are provided. The composition includes the isolated and recombinant polypeptide with insecticidal activity, the recombinant nucleic acid molecule encoding the polypeptide, the DNA construct and carrier containing the nucleic acid molecule, the host cell containing the carrier, and the antibody for the polypeptide. The sequence of polynucleotides encoding the polypeptide can be used in the DNA construction body or expression box to be used to transform and express in the target organisms. The compositions and methods provided can be used to produce organisms with enhanced insect resistance or tolerance. The transgenic plants and seeds containing the nucleotide sequences of the insecticidal proteins that encode the invention are also provided. These plants are resistant to insects and other pests. Methods for producing polypeptides that are produced in this article and the use of those peptides to control or kill pests are provided. The methods and kits for the detection of the present invention in the sample are also included.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】杀虫基因和使用方法相关申请的交叉引用本申请要求美国临时申请系列号62/095,524(提交于2014年12月22日)的权益，该申请的内容通过引用整体并入本文。专利
本专利技术涉及用于控制害虫，特别是植物害虫的方法和组合物。对经由EFS-WEB以文本文件提交的序列表的引用经由EFS-Web以ASCII格式的序列表以电子方式提交序列表的正式副本，并使用名为AgB006.PCT_SEQLIST.txt的文件，其创建于2015年12月14日，大小为956KB，与本说明书同时提交。包含在该ASCII格式文档中的序列表是说明书的一部分，其全部内容通过引用并入本文。专利技术背景害虫、植物病害和杂草是对作物的严重威胁。由于病虫害造成的损失估计为全球农业生产的37％，其中13％是由昆虫、细菌和其它生物导致的。毒素是毒力决定因素，其在微生物致病性和/或逃避宿主免疫应答中发挥重要作用。来自革兰氏阳性菌芽孢杆菌，特别是苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringensis)的毒素已被用作杀虫蛋白(通常称为Bt毒素)。目前的策略是使用表达这些毒素的基因来生产转基因作物。表达杀虫蛋白毒素的转基因作物用于对抗昆虫造成的作物损害。虽然使用芽孢杆菌毒素已经能成功地控制昆虫，但是在世界许多已经密集使用了这些毒素的区域的某些目标害虫中已经发展出对Bt毒素的抗性。解决这个问题的一个方法是将Bt作物和常规非Bt作物(庇护)交替排列播种。避免或减缓发展出昆虫抗性的另一种方法是在转基因植物中堆叠对昆虫有不同作用模式的杀虫基因。使用表达杀虫蛋白毒素的转基因作物的策略目前越来越强调新型毒素的发现，超出从苏云金芽孢杆菌细菌中产生的毒素之外。新型毒素可能被证明是可有效替代那些衍生自苏云金芽孢杆菌的那些毒素，用于开发昆虫和害虫抗性转基因植物。因此，需要新型毒素蛋白。附图说明图1提供SEQIDNO：8、9、123和124的氨基酸比对。突出显示的区域表示在四种多肽之间氨基酸不同的区域。图2提供SEQIDNO：25、26、125和126的氨基酸比对。突出显示的区域表示在四种多肽之间氨基酸不同的区域。图3提供SEQIDNO：72、94、127和128的氨基酸比对。突出显示的区域表示在四种多肽之间氨基酸不同的区域。图4提供SEQIDNO：70、71、129、130和131的氨基酸比对。突出显示的区域表示在五种多肽之间氨基酸不同的区域。图5A-5H提供SEQIDNO：6、7、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158和159的氨基酸比对。突出显示的区域表示每个多肽保守的区域。存在于该比对中的保守区域列于表4中。图6提供SEQIDNO：6和132-159各自的序列同一性百分比关系。图7提供了对西方玉米根虫的生物测定中使用的分析评分指标(大小x死亡率矩阵)。专利技术概述提供了具有杀虫活性的组合物及其使用方法。组合物包括具有杀虫活性的分离的和重组的多肽序列、编码所述杀虫多肽的重组的和合成的核酸分子、包含所述核酸分子的DNA构建体、包含所述核酸分子的载体、包含所述载体的宿主细胞，以及针对所述杀虫多肽的抗体。编码本文提供的多肽的多核苷酸序列可用于DNA构建体或表达盒中，用于在目的生物(包括微生物和植物)中转化和表达。本文提供的组合物和方法可用于生产具有增强的害虫抗性或耐受性的生物。这些生物和包含这些生物的组合物理想地用于农业目的。还提供了包含编码本专利技术的杀虫蛋白的核苷酸序列的转基因植物和种子。这些植物对昆虫和其他害虫具有抗性。提供了用于产生本文公开的多种多肽的方法，以及使用那些多肽来控制或杀灭害虫的方法。还包括用于检测样品中本专利技术多肽的方法和试剂盒。专利技术详述现在将参考附图更全面地描述本专利技术，其中示出了本专利技术的一些但不是全部的实施方式。实际上，这些专利技术可以以许多不同的形式实施，并且不应被解释为限于本文所阐述的实施方式；相反地，提供这些实施方式，使得本公开满足适用的法律要求。通篇中相同的数字都指代相同元素。本专利技术相关
的技术人员将会认识到本文提供的专利技术的许多修饰和其它实施方式，这些专利技术具有在前文描述和相关附图教导中得到益处。因此，应当理解，本专利技术不限于所公开的特定实施方式，且修饰和其它实施方式旨在被包括在所附权利要求的范围内。尽管这里采用了具体的术语，但它们仅在通用和描述性意义上使用，而不是为了限制的目的。I.多核苷酸和多肽提供了赋予生物以杀虫活性的组合物和方法。经修饰的生物显示对害虫的抗性或耐受性。提供了保留杀虫活性的重组杀虫蛋白或多肽及其片段和变体，包括序列SEQIDNO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158和/或159的那些。杀虫蛋白对包括昆虫、真菌、线虫等的害虫具有生物学活性(例如，是杀虫的)。可以使用编码杀虫多肽包括例如SEQIDNO：1-159的多核苷酸，或者其活性片段或变体，以产生转基因生物，如植物和微生物。转化的生物的特征在于基因组包含至少一种稳定掺入的DNA构建体，其包含本文公开的杀虫蛋白的编码序列。在一些实施方案中，编码序列可操作地连接至驱动所编码的杀虫多肽表达的启动子。因此，提供了转化的微生物、植物细胞、植物组织、植物、种子和植物部分。各种多肽、其活性变体和片段及编码其的多核苷酸的总结于下文表1。如表1所示，提供了各种形式的多肽。提供全长杀虫多肽，以及原始全长序列的修饰版本(称为变体)。表1还表示“CryBP1”序列。这些序列(SEQIDNO：24、67和73)包含可与一些毒素基因相关的辅助多肽。在这种情况下，CryBP1序列可以单独使用或与本文提供的任何杀虫多肽组合使用。表1还提供了分裂-CryC'-末端多肽(SEQIDNO：3、74、77、80和91)。这些序列包括与Cry类型毒素基因的C'-末端具有同源性的下游蛋白的序列，这些序列通常在非全长并缺少预期的C'-末端区域的Cry基因后本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有杀虫活性的重组多肽，包含(a)多肽，其包含与选自SEQ ID NO：15、9、93、17、7、25、32、71或94中的序列的氨基酸序列相比具有至少90％的序列同一性百分比的氨基酸序列；或，(b)多肽，其包含SEQ ID NO：15、9、93、17、7、25、32、71或94的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.22 US 62/095,5241.具有杀虫活性的重组多肽，包含(a)多肽，其包含与选自SEQIDNO：15、9、93、17、7、25、32、71或94中的序列的氨基酸序列相比具有至少90％的序列同一性百分比的氨基酸序列；或，(b)多肽，其包含SEQIDNO：15、9、93、17、7、25、32、71或94的氨基酸序列。2.权利要求1的多肽，进一步包含异源氨基酸序列。3.组合物，包含权利要求1或2的多肽。4.编码氨基酸序列的重组核酸分子，所述氨基酸序列包含(a)与选自SEQIDNO：15、9、93、17、7、25、32、71或94的序列的氨基酸序列相比具有至少90％的序列同一性百分比；或(b)SEQIDNO：15、9、93、17、7、25、32、71或94的氨基酸序列；其中所述重组核酸分子不是编码所述多肽的天然存在的序列。5.权利要求4的重组核酸，其中所述核酸分子是设计用于在植物中表达的合成序列。6.权利要求4或5的重组核酸分子，其中所述核酸分子可操作地连接至能够指导在植物细胞中表达的启动子。7.权利要求4至6中任一项的重组核酸分子，其中所述核酸分子可操作地连接至能够指导在细菌中表达的启动子。8.宿主细胞，包含权利要求4至7中任一项的重组核酸分子。9.权利要求8的宿主细胞，其中所述宿主细胞是细菌宿主细胞。10.DNA构建体，包含驱动在植物细胞中表达的启动子，所述启动子可操作地连接至重组核酸分子，所述重组核酸分子包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与选自SEQIDNO：15、9、93、17、7、25、32、71或94的序列的氨基酸序列相比具有至少90％序列同一性百分比的氨基酸序列。11.权利要求10的DNA构建体，其中所述核苷酸序列是设计用于在植物中表达的合成DNA序列。12.载体，包含权利要求10的DNA构建体。13.宿主细胞，包含权利要求12或13的DNA构建体。14.组合物，包含权利要求13的宿主细胞。15.权利要求14的组合物，其中所述组合物选自粉末、粉尘、弹丸、颗粒、喷...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·帕克斯，K·B·罗伯茨，R·E·塔耶尔，
申请(专利权)人：农业生物群落股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US