一种对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及应用，属于生物医学技术领域。该菌株属于金黄色葡萄球菌

A drug resistant methicillin resistant Staphylococcus aureus and its application to vancomycin

The present invention relates to a methicillin resistant Staphylococcus aureus resistant to vancomycin and its application, which belongs to the field of biomedical technology. The strain belongs to Staphylococcus aureus

【技术实现步骤摘要】
一种对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及应用
本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及应用。
技术介绍
金黄色葡萄球菌是抵抗力较强的无芽胞细菌，且适应能力强，易产生耐药性变异，在1961年分离出第1例MRSA距离合成甲氧西林不到1年。近年来MRSA感染率在世界范围内逐年升高，且常有爆发流行，因其耐药率高和耐药谱广，引起感染的治疗己经成为当前临床最为棘手的问题之一。目前，病原菌耐药己成为一个全球性的问题，越来越多的病原菌对常用抗菌药物产生耐药性，且耐药水平不断上升，引起了世界卫生组织以及各国卫生行政部门和广大学者的广泛关注。金黄色葡萄球菌是医院和社区获得性感染的重要病原菌，耐药机制复杂，耐药性发展迅速，是近年来研究的热点问题，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA的出现及流行，引起了人们对金黄色葡萄球菌耐药性的空前关注和重视。有学者将MRSA引起的感染与艾滋病、乙型肝炎一起并列为世界三大感染性疾病，并将其称为“超级细菌”。细菌耐药性情况的不断加剧，为抗感染的治疗加深了难度，为了寻求解决办法，致力于研究新型抗耐药菌药物刻不容缓。从医院临床分离感染相关疾病治疗无效的患者身上获得的耐药菌株成为了寻求新的抗菌药物研究实验的必要材料，例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、产ESBLs或AmpC酶的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌；多重耐药的铜绿假单胞菌、热带念珠菌等。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的主要耐药机制是：MecA基因编码低亲和力的青霉素结合蛋白PBP2a所致。在高浓度抗生素存在时，正常青霉素结合蛋白PBPs因与抗生素结合而失去催化细菌细胞壁粘肽交联的功能。耐甲氧西林金黄色葡萄球产生的特殊的PBP2a对β-内酰胺类抗生素亲和力很低或消失，可替代正常青霉素结合蛋白PBPs的生物合成功能，继而催化细菌细胞壁粘肽交联。PBP2a的存在能维持细菌的生长和繁殖，表现出对所有β-内酰胺类抗生素耐药。同时，由于MecA基因所在的染色体盒SCCmec具有吸纳其他耐药基因的功能，使得MRSA一般对氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类、大环内酯类等抗生素都产生耐药。糖肽类抗生素如万古霉素是治疗MRSA感染疗效最为确切的药物，也是严重MRSA感染治疗的最后一道防线。但是本专利技术申请人在研究中发现一种对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)，该细菌在国内外目前未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及应用，该细菌是寻求细菌耐药机制的重要材料，可用于筛选药物。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，其特征在于，该菌株属于金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus，命名为耐万古霉素金黄色葡萄球菌0630（VRSA）；该菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏号GDMCCNO.60082。本专利技术还提供上述对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在药物筛选中的应用。本专利技术对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生物学特征为：该菌鉴定为金黄色葡萄球菌，参照美国临床实验室标准委员会（CLSI）2012版规定的头孢西丁纸片法进行耐药鉴定，如图1所示：头孢西丁对该菌的抑菌圈≤19mm，对万古霉素（VA）的抑菌圈≤10mm。故判定该菌为对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄菌。美国临床和实验室标准协会(ClinicalandLaboratoryStandardsinstitute,CLSI)2011年出版的操作手册中的定义，根据金黄色葡萄球菌对万古霉素敏感性的不同将金黄色葡萄球菌分为四类：金黄色葡萄球菌对万古霉素的MIC≤2μg/ml时，为万古霉素敏感金黄色葡萄球菌(VSSA)；MIC为2~4μg/ml时是指万古霉素异质性中介耐药金黄色葡萄球菌(hVISA)；MIC为4~8μg/ml，为万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌(VISA)；MIC为≥16μg/ml，为万古霉素完全耐药金黄色葡萄球菌(VRSA)。本专利技术金黄色葡萄球菌MIC为31.25μg/ml，（参考美国临床和实验室标准协会所公布的标准，采用微量液基稀释法以万古霉素初始浓度为125ug/ml在96孔板上对半稀释万古霉素进行）。所述的耐万古霉素金黄色葡萄球菌0630（VRSA）的16SrDNA序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术与现有技术相比，其有益效果为：本专利技术提供了一种对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其应用。该菌株对万古霉素耐药，可做为筛选新型抗生素的模型材料，具有良好的应用前景。本专利技术对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，该菌株属于金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus，命名为耐万古霉素金黄色葡萄球菌0630（VRSA）；该菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏号GDMCCNO.60082；保藏日期为2016年9月23日，保藏地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所。附图说明图1为采用琼脂纸片扩散法测定耐万古霉素金黄色葡萄球菌药敏纸片抑菌圈图；其中，1（VA）为万古霉素(抑菌圈的大小为9mm)，2（CFX）为头孢西丁(抑菌圈的大小为0mm)，3（LVF）为左氧氟沙星(抑菌圈的大小为26mm)，4（CAZ）为头孢他啶(抑菌圈的大小为20mm)，5（AM）为氨苄西林(抑菌圈的大小为0mm)，6（FEP）为头孢吡肟(抑菌圈的大小为0mm)，7（CAC）为头孢他啶/棒酸(抑菌圈的大小为20mm)图2为本专利技术对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物外形形态图；图3为本专利技术对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的革兰氏染色图。图4为本专利技术菌株16SrDNAPCR扩增产物电泳图；其中，泳道M：DL2000DNAMarker；1：PCR产物；+：正对照；-：负对照；正对照、负对照是试剂盒中本身就有的。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的详细描述。本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。MH琼脂培养基：称取MH干粉7.6g置于锥形瓶中，加入200ml蒸馏水，摇匀。滴加质量浓度为10%的氢氧化钠水溶液调节pH至7.2-7.4之间。将配好的培养基高温灭菌（121℃，15min）后倾注灭菌平皿，置于4℃冰箱冷藏备用。MH肉汤培养基：称取MH肉汤干粉5.4g，加入200ml蒸馏水溶解。滴加质量浓度为10%的氢氧化钠水溶液调节pH至7.2-7.4之间。将配好的培养基高温灭菌（121℃，15min），待其自然冷却后于4℃冰箱冷藏备用。中国蓝玫瑰酸琼脂平板培养基：称取中国蓝玫瑰酸琼脂粉20.5g，加入蒸馏水500ml，经高温灭菌（121℃，15min）后倾注灭菌平皿，置于4℃冰箱冷藏备用。本专利技术中指出的合适溶媒是能溶解待筛化合物的溶媒。本专利技术菌株来源：本专利技术菌种分离自昆明总医院地干病房患者口痰中，按临床微生物学操作规程对标本进行接种培养、分离鉴定。患者情况本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，其特征在于，该菌株属于金黄色葡萄球菌

【技术特征摘要】
1.一种对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，其特征在于，该菌株属于金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus，命名为耐万古霉素金黄色葡萄球菌0630（VR...

【专利技术属性】
技术研发人员：余巍，徐贵丽，谢明镜，左国营，朱玉婷，
申请(专利权)人：余巍，
类型：发明
国别省市：云南,53