用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热分型的多肽制造技术

本发明专利技术公开了一种用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热分型的多肽，所述多肽选自具有如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列的多肽。本发明专利技术还公开了采用上述多肽为有效成分制备的用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热进行分型的试剂盒。采用本发明专利技术的多肽能够有效的实现临床上对HTNV和SEOV出血热分型的检测，与Western‑blot相比，对患者血清中的抗体阳性率高，检测的灵敏度更高。

Polypeptides used for typing hemorrhagic fever with renal syndrome caused by Hantaan virus and Seoul virus

The present invention discloses a polypeptide for induced by Hantaan virus and Seoul virus of hemorrhagic fever with renal syndrome type, the polypeptide polypeptide from the amino acid sequence of SEQ ID NO.1 SEQ ID represented by NO.8. The present invention also discloses a kit for typing hemorrhagic fever with renal syndrome caused by Hantaan virus and Seoul virus by using the polypeptide as effective component. The polypeptides of the invention can realize the detection of HTNV in clinical and SEOV typing of hemorrhagic fever effectively, compared with the Western blot, the positive rate of antibodies in the serum of patients with high detection sensitivity.

【技术实现步骤摘要】
用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热分型的多肽
本专利技术涉及生物检测
，特别是涉及一种用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热分型的多肽。
技术介绍
肾综合征出血热(HFRS)是由汉坦病毒引起的世界范围内流行的自然疫源性疾病。我国是世界上受其危害最为严重的国家，年发病人数占世界总数的90％以上，近10年来年发病人数仍保持在4～6万，居高不下，严重危害人民的生命健康。在我国肾综合症出血热主要由汉滩病毒(HTNV)和汉城病毒(SEOV)两种类型病毒引起，HTNV和SEOV病毒的动物宿主、流行特点和所引起的临床疾病轻重明显不同，由HTNV感染引起的肾综合征出血热的症状比SEOV感染引起的严重的多，HTNV感染的病死率约为5-10％，而SEO病毒的病死率约为1％，所以对这两种病毒引起的临床感染和监测进行分型检测非常重要。自20世纪70年代中期成功分离HTNV后，对该属病毒或血清标本的分型检测一直依赖空斑减少中和试验(PRNT)，但由于HTNV在体外传代细胞中生长缓慢，PRNT不仅需时长(通常需要10天以上时间)，而且对实验材料的要求较高，普通医疗单位难以开展。90年代中期发展了HTNV的反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)和测序分型技术，但上述方法的敏感性差，操作复杂，实验成本较高，不适合在临床实验室和流行病学现场常规使用。国内多年来广泛采用的血凝抑制试验虽然具有简便快速的优点，但进行分型检测时，相当数量的HTNV或SEOV型病毒感染者(或实验动物)的血清标本血抑效价非常接近，难以进行准确分型。综上，HTNV和SEOV病毒感染的HFRS临床症状类似，但病情和结局不同，HTNV感染病死率高，SEOV感染的病死率低。目前我国和世界上对这两种病毒的分型仅限于实验室研究，临床上无法对两种疾病进行分型，无法对病人的预后和治疗进行早期预测。因此，有必要为临床上对HTNV和SEOV出血热分型提供新的分型试剂。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热分型的多肽。本专利技术通过筛选得到HTNV和SEOV病毒的核衣壳蛋白(NP)，膜蛋白前体(Gn和Gc)氨基酸序列的特异性多肽，测试它们与HTNV病人和SEOV病人血清的反应性，为临床上对HTNV和SEOV出血热分型提供一个简短可靠的抗原试剂。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供一种用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热分型的多肽，所述多肽选自具有如下氨基酸序列的多肽：HNP1：SDRIEQWLSAPCKLLPDTA-AVSLHGGPATNRDNLRQRQVALGNMETKESKAIRQHAESAGCSMIED；(SEQIDNO.1)SNP1:TSRIEEWLGAPCKFMAESPIAGSLSGNP-VNRDYIRQRQGALAGMEPKEFQALRQHAKDAGCTLVEH；(SEQIDNO.2)HVGnGc1:IWKWLVMASLVWPVLTLRNVYDMKIECPHTVSFGGNSVIGYVELPPVPLADTAQM；(SEQIDNO.3)SVGnGc1:MWSLLLLAALVGQGFALKNVFDMRIQCPHSVKFGETSVSGYTELPPLSLQEAEQL；(SEQIDNO.4)HVGnGc2:NTITKYTQVSWRGKADQSQSSQNSFETVSTEVDLKGTCVLKHK；(SEQIDNO.5)SVGnGc2:STINKLTKVIWRKKANQESANQNSFEILESEVSFKGLCMLKHR；(SEQIDNO.6)HVGnGc3:QSVVSIIKHGIFDIASVHIVCFFVAVKGNTYKIFEQVKKSFESTCNDTEN；(SEQIDNO.7)SVGnGc3:KAVVSALKRGMYAIASIETICFFIHQKGNKYKIVTAITSAMGSKCNNTDT；(SEQIDNO.8)。本专利技术的第二方面，提供上述多肽在制备对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热进行分型的试剂、试剂盒或芯片中的应用。本专利技术的第三方面，提供一种用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热进行分型的试剂盒，所述试剂盒以上述的多肽为有效成分。优选的，所述试剂盒中含有SEQIDNO.1、SEQIDNO.3、SEQIDNO.5或SEQIDNO.7所示的多肽中的至少一种；和SEQIDNO.2、SEQIDNO.4、SEQIDNO.6或SEQIDNO.8所示的多肽中的至少一种。更为优选的，所述试剂盒中含有SEQIDNO.5或SEQIDNO.7所示的多肽中的至少一种；和SEQIDNO.6或SEQIDNO.8所示的多肽中的至少一种。进一步的，所述试剂盒中还包含：PVDF膜、一抗和二抗。所述一抗为HFRS病人血清，以1:200TBST稀释。所述二抗为HRP标记的山羊抗人，以1:5000TBST稀释。本专利技术的第四方面，提供一种对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热分型的方法，步骤如下：将上述多肽与HFRS患者血清进行斑点免疫印迹反应，若血清只和来自HTNV的多肽反应，说明为HTNV型；若血清只和来自SEOV的多肽反应，说明为SEOV型；若血清既可以和HTNV的多肽反应，也可以和SEOV的多肽反应，说明先后感染过HTNV和SEOV。上述方法不用于疾病的诊断和治疗。本专利技术的有益效果：采用本专利技术的多肽能够有效的实现临床上对HTNV和SEOV出血热分型的检测，与Western-blot相比，对患者血清中的抗体阳性率高，检测的灵敏度更高。RT-PCR检测HTNV和SEOV是通过检测血清中的RNA，运用特异性多肽是通过检测血清中的抗体，抗体与抗原发生特异性结合，病毒在免疫功能正常的人体内不能长期存在，所以RT-PCR在检测患者的血清中HTNV或者SEOV的灵敏度会比较低。与RT-PCR检测相比，采用本专利技术的多肽对HTNV和SEOV进行检测的灵敏度也更高。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。正如
技术介绍
所介绍的，HTNV和SEOV病毒感染的HFRS临床症状类似，但病情和结局不同，HTNV感染病死率高，SEOV感染的病死率低。目前我国和世界上对这两种病毒的分型仅限于实验室研究，临床上无法对两种疾病进行分型，无法对病人的预后和治疗进行早期预测，基于此，本申请提出了一种用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热分型的多肽。在本申请的一种实施方案中，提供了一种用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热分型的多肽，所述多肽选自具有如下氨基酸序列的多肽：HNP1：SDRIEQWLSAPCKLLPDTA-AVSLHGGPATN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热分型的多肽，所述多肽选自具有如下氨基酸序列的多肽：HNP1：SDRIEQWL SAPCKLLPDTA‑AVSLHGGPATNRDNLRQRQVALGNMETKESKAIRQHAESAGCSMIED；(SEQ ID NO.1)SNP1:TSRIEEWL GAPCKFMAESPIAGSLSGNP‑VNRDYIRQRQGALAGMEPKEFQALRQHAKDAGCTLVEH；(SEQ ID NO.2)HVGnGc1:IWKWLVMASLVWPVLTLRNVYDMKIECPHTVSFGGNSVIGYVELPPVPLADTAQM；(SEQ ID NO.3)SVGnGc1:MWSLLLLAALVGQGFALKNVFDMRIQCPHSVKFGETSVSGYTELPPLSLQEAEQL；(SEQ ID NO.4)HVGnGc2:NTITKYTQVSWRGKADQSQSSQNSFETVSTEVDLKGTCVLKHK；(SEQ ID NO.5)SVGnGc2:STINKLTKVIWRKKANQESANQNSFEILESEVSFKGLCMLKHR；(SEQ ID NO.6)HVGnGc3:QSVVSIIKHGIFDIASVHIVCFFVAVKGNTYKIFEQVKKSFESTCNDTEN；(SEQ ID NO.7)SVGnGc3:KAVVSALKRGMYAIASIETICFFIHQKGNKYKIVTAITSAMGSKCNNTDT；(SEQ ID NO.8)。...

【技术特征摘要】
1.一种用于对汉滩病毒和汉城病毒引起的肾综合征出血热分型的多肽，所述多肽选自具有如下氨基酸序列的多肽：HNP1：SDRIEQWLSAPCKLLPDTA-AVSLHGGPATNRDNLRQRQVALGNMETKESKAIRQHAESAGCSMIED；(SEQIDNO.1)SNP1:TSRIEEWLGAPCKFMAESPIAGSLSGNP-VNRDYIRQRQGALAGMEPKEFQALRQHAKDAGCTLVEH；(SEQIDNO.2)HVGnGc1:IWKWLVMASLVWPVLTLRNVYDMKIECPHTVSFGGNSVIGYVELPPVPLADTAQM；(SEQIDNO.3)SVGnGc1:MWSLLLLAALVGQGFALKNVFDMRIQCPHSVKFGETSVSGYTELPPLSLQEAEQL；(SEQIDNO.4)HVGnGc2:NTITKYTQVSWRGKADQSQSSQNSFETVSTEVDLKGTCVLKHK；(SEQIDNO.5)SVGnGc2:STINKLTKVIWRKKANQESANQNSFEILESEVSFKGLCMLKHR；(SEQIDNO.6)HVGnGc3:QSVVSIIKHGIFDIASVHIVCFFVAVKGNTYKIFEQVKKSFESTCNDTEN；(SEQIDNO.7)SVGnGc3:KAVVSALKRGMYAIASIETICFFIHQKGNKYKIVTAITSAMGSKCNNTDT；(SEQIDNO.8)。2.权利要求1所述的多肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：于学杰，李文骞，
申请(专利权)人：于学杰，
类型：发明
国别省市：美国,US