一种检测血液中降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测血液中降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法，该检测方法包括：1)用链霉亲和素包被磁珠；2)用生物素标记降钙素原单克第一隆抗体；3)将包被有链霉亲和素的磁珠与标记有生物素的降钙素原单克隆第一抗体结合反应，得磁珠‑SA‑生物素‑PCT单抗溶剂；4)用降钙素原单克隆第二抗体标记吖啶酯，制得吖啶酯‑PCT单抗溶剂；5)样本或校准品中的降钙素原与吖啶酯‑PCT单抗溶剂、磁珠‑SA‑生物素‑PCT单抗溶剂发生反应；6)清洗后，计算样本中降钙素原的含量。本发明专利技术提供的降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法，解决了出结果时间较长的问题，可以用于做末梢全血样本，且在不降低灵敏度的情况下拉宽检测范围。

A kit for the detection of procalcitonin in blood and a method for detecting procalcitonin

The invention discloses a kit of calcitonin and calcitonin original peptide detection in the blood, the detecting method comprises: 1) elements with streptavidin coated magnetic beads; 2) with biotin labeled procalcitonin monoclonal first monoclonal antibody; 3) will be coated with streptavidin bead and pigment with biotin labeled calcitonin monoclonal antibody binding to the first reaction, SA beads biotin PCT mAb solvent; 4) with calcitonin monoclonal antibody labeled acridinium ester second, PCT mAb prepared acridine ester solvent; 5) sample or calibrator in calcitonin peptide and acridine ester PCT monoclonal antibody, SA solvent beads biotin PCT monoclonal antibody reaction solvent; 6) after cleaning, calculate the PCT level in the sample. The present invention provides a kit for procalcitonin and a method for detecting procalcitonin, which solves the problem of long time result, and can be used for peripheral blood samples, and the detection range can be reduced without reducing the sensitivity.

【技术实现步骤摘要】
一种检测血液中降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种检测血液中降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法。
技术介绍
降钙素原(procalcitonin，PCT)是无激素活性的降钙素前肽物质，降钙素仅在甲状腺的C细胞受到激素性刺激时才产生，降钙素原可由很多器官的不同类型细胞在受到促炎症反应刺激特别是受到细菌引起的刺激后分泌。降钙素原是一种能特异性区分细菌感染和其它原因导致的炎症反应的重要标志物，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时，其在血浆中的水平升高。临床资料显示，PCT浓度>0.1ng/mL时说明存在临床相关的细菌感染，需要采用抗生素进行治疗；当PCT浓度>0.5ng/mL时，要考虑患者可能有发展成重症败血症或败血症性休克的危险。PCT反映了全身炎症反应的活跃程度。影响PCT水平的因素包括被感染器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度和免疫反应的状况。检测病例中PCT浓度的变化，有利于判断机体细菌感染情况，评判机体健康状况，对临床和基础性研究都有重要意义。自上世纪80年代以后，免疫学检测技术随着单克隆抗体、人工合成多肽、基因工程表达抗原及各种标记技术的成熟而迅速发展，免疫比浊法、速率散射比浊法(INA)、胶乳增强透射比浊法(ITA)与化学发光分析技术逐渐取代传统的免疫沉淀、免疫凝集物，使检测更为快捷，近些年快速检测(POCT)的应用使免疫学操作更为简单、方便。目前，多种免疫学检测技术应用于PCT检测，既可以定性，亦可以定量。罗氏诊断产品开发了一种定量化学发光免疫检测方法，其具体检测方法如下：■第一步反应:加样后,样本中的降钙素原(PCT)和生物素标记的降钙素原单克隆抗体(Ab)以及吡啶钌标记的降钙素原单克隆抗体形成夹心复合物；■第二步反应:加入包被有链霉亲和素(SA)的磁性微粒，夹心复合物固定在磁性微粒上，将磁性微粒提取到读数模块，可以根据吡啶钌的发光值计算相应的降钙素原浓度值；■出结果时间18分钟，样本类型：血清，血浆，检测范围：0.02-100ng/mL。但上述的检测方法存在以下问题：1)出结果时间较长；2)不能做末梢全血样本，小孩检测炎症或感染需要的采血量较大；3)测量范围窄，高浓度的样本需要稀释。因此，对已有技术所存在的缺陷进行改进，使其在临床检测时能够发挥更为有效的作用至关重要。
技术实现思路
本专利技术为解决现有技术中的上述问题，提出一种检测血液中降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法，解决了出结果时间较长的问题，可以用于做末梢全血样本检测，且在不降低灵敏度的情况下拉宽检测范围。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的第一个方面是提供一种检测血液中降钙素原的方法，包括步骤：1)用链霉亲和素包被磁珠；2)用生物素标记降钙素原单克第一隆抗体；3)将步骤1)制得的包被有链霉亲和素的磁珠与步骤2)制得的标记有生物素的降钙素原单克隆第一抗体结合反应，得磁珠-SA-生物素-PCT单抗溶剂；4)用降钙素原单克隆第二抗体标记吖啶酯，制得吖啶酯-PCT单抗溶剂；5)样本或校准品中的降钙素原与步骤4)制得的吖啶酯-PCT单抗溶剂、步骤3)制得的磁珠-SA-生物素-PCT单抗溶剂发生反应，形成双抗体夹心复合物；6)将未反应的溶剂清洗去除后，可根据双抗体夹心复合物的数量，计算样本中降钙素原的含量；进一步地，在所述的检测血液中降钙素原的方法中，步骤1)中所述磁珠进一步地，在所述的检测血液中降钙素原的方法中，步骤2)中所述降钙素原单克隆第一抗体与所述生物素的质量比为1:3-1:8。进一步地，在所述的检测血液中降钙素原的方法中，步骤3)中所述包被有链霉亲和素的磁珠与所述标记有生物素的降钙素原单克隆抗体的质量比为90:1-110:1。进一步地，在所述的检测血液中降钙素原的方法中，步骤4)中所述降钙素原单克隆第二抗体与所述吖啶酯的质量比为1:3-1:8。本专利技术的第二个方面是提供一种用于所述检测方法的试剂盒，包括由若干并排设置的孔位组成的试剂条，所述试剂条包含的试剂有磁珠-SA-生物素-PCT单抗溶剂、吖啶酯-PCT单抗溶剂。进一步地，在所述的试剂盒中，所述试剂条上的一孔位内设有磁棒套。进一步地，在所述的试剂盒中，所述试剂盒还包含样本稀释液、校准品、磁珠清洗液以及预激发液。进一步优选地，在所述的试剂盒中，所述样本稀释液是含有表面活性剂聚山梨酯-80或十二烷基聚乙二醇醚的Tris-HCl缓冲液；所述磁珠清洗液是含有吐温、防腐剂的Tris-HCl缓冲液。进一步优选地，在所述的试剂盒中，所述预激发液是含有双氧水、硝酸溶液；所述校准品是含有一定量的PCT抗原的BSA蛋白溶液。进一步地，在所述的试剂盒中，所述所述试剂条上的0号位设有磁棒套；1号位设有磁珠-SA-生物素-PCT单抗溶剂；2号位设有样本稀释液；3、5、6、7号位设有磁珠清洗液；4号孔位设有吖啶酯-PCT单抗溶剂；8号位设有预激发液。本专利技术的第三个方面是提供一种所述检测试剂盒的使用方法，检测时，所述试剂条置放于孵育仓内，所述孵育仓设置于输送带上，所述输送带连接水平位移电机，所述输送带的末端设有分析读数模块；并采用可相对磁棒套上下移动的上吸式磁珠转移枪实现所述试剂条上取磁棒套、吸取磁珠、磁珠洗脱、磁珠混匀、磁棒套打脱动作；所述上吸式磁珠转移枪，包括可与所述磁棒套过盈连接的提取枪枪头、位于所述提取枪枪头轴心线上用于吸附磁珠的磁棒，所述磁棒由提取电机驱动并相对所述提取枪枪头上下移动；具体包括如下使用步骤：通过上吸式磁珠转移枪提取0号位孔的磁棒套，整个检测在一个连体的试剂条中由右向左进行，样本加在2号位孔后，磁棒套将第1号位孔的磁珠-SA-生物素-PCT单抗溶剂提到2号位孔，完成第一步反应；反应结束后由磁棒将结合物提取到3号位孔的清洗液中清洗，洗去未结合的样本；清洗结束后由磁棒套将结合物提取到4号位孔开始第二步反应；反应结束后由磁棒套将结合物依次通过5、6、7号位进行三次清洗，最终提取到8号位孔的预激发液中，添加激发液读取信号值。进一步地，所述提取电机安装于所述提取枪顶端，且所述提取电机通过电机轴与所述磁棒连接。进一步地，所述提取枪枪头可与所述磁棒套的内壁或其外壁过盈连接。进一步地，所述提取枪由设置于基板上的纵向位移电机驱动进行上下移动。进一步优选地，所述纵向位移电机的输出轴上设有螺杆，所述螺杆上设有螺母，所述螺母与所述提取枪固定连接。本专利技术采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：本专利技术提供的检测血液中降钙素原的方法，是基于两步法双抗夹心原理，同时利用磁分离原理和吖啶酯化学发光方法制备的试剂盒，将磁珠-SA-生物素-PCT单抗溶剂与吖啶酯-PCT单抗溶剂发生结合反应，形成双抗原夹心复合物，用于检测样本中降钙素原的含量；本专利技术检测方法及其试剂盒应用链霉亲和素和生物素放大信号值原理提高灵敏度，有效解决了现有现有检测方法反应时间长、检测范围窄等问题，且本专利技术检测方法出结果时间可以控制在10分钟以内，检测范围可以扩宽到0.02-240ng/mL；此外，本专利技术通过在样本稀释液中添加了一种表面活性剂，可以降低测试背景，降低红细胞对测试产生的干扰，使试剂可以检测及检测末梢血或全血样本。综上，本专利技术检测方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测血液中降钙素原的方法，其特征在于，包括步骤：1)用链霉亲和素包被磁珠；2)用生物素标记降钙素原单克第一隆抗体；3)将步骤1)制得的包被有链霉亲和素的磁珠与步骤2)制得的标记有生物素的降钙素原单克隆第一抗体结合反应，得磁珠‑SA‑生物素‑PCT单抗溶剂；4)用降钙素原单克隆第二抗体标记吖啶酯，制得吖啶酯‑PCT单抗溶剂；5)样本或校准品中的降钙素原与步骤4)制得的吖啶酯‑PCT单抗溶剂、步骤3)制得的磁珠‑SA‑生物素‑PCT单抗溶剂发生反应，形成双抗体夹心复合物；6)将未反应的溶剂清洗后，可根据双抗体夹心复合物的数量，计算样本中降钙素原的含量。

【技术特征摘要】
1.一种检测血液中降钙素原的方法，其特征在于，包括步骤：1)用链霉亲和素包被磁珠；2)用生物素标记降钙素原单克第一隆抗体；3)将步骤1)制得的包被有链霉亲和素的磁珠与步骤2)制得的标记有生物素的降钙素原单克隆第一抗体结合反应，得磁珠-SA-生物素-PCT单抗溶剂；4)用降钙素原单克隆第二抗体标记吖啶酯，制得吖啶酯-PCT单抗溶剂；5)样本或校准品中的降钙素原与步骤4)制得的吖啶酯-PCT单抗溶剂、步骤3)制得的磁珠-SA-生物素-PCT单抗溶剂发生反应，形成双抗体夹心复合物；6)将未反应的溶剂清洗后，可根据双抗体夹心复合物的数量，计算样本中降钙素原的含量。2.根据权利要求1所述的检测血液中降钙素原的方法，其特征在于，步骤1)中所述磁珠与所述链霉亲和素的质量比为1:8-1:12。3.根据权利要求1所述的检测血液中降钙素原的方法，其特征在于，步骤2)中所述降钙素原单克隆第一抗体与所述生物素的质量比为1:3-1:8。4.根据权利要求1所述的检测血液中降钙素原的方法，其特征在于，步骤3)中所述包被有链霉亲和素的磁珠与所述标记有生物素的降钙素原单克隆抗体的质量比为90:1-110:1。5.根据权利要求1所述的检测血液中降钙素原的方法，其特征在于，步骤4)中所述降钙素原单克隆第二抗体与所述吖啶酯的质量比为1:3-1:8。6.一种用于权利要求1-5任一项所述检测方法的试剂盒，其特征在于，包括由若干并排设置的孔位组成的试剂条，所述试剂条包含的试剂有磁珠-SA-生物素-PCT单抗溶剂、吖啶酯-PCT单抗溶剂。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂条上的一孔位内设有磁棒套。8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含样本稀释液、校准品、磁珠清洗液以及预激发液。9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液是含有表面活性剂聚山梨酯-80或十二烷基聚乙二醇醚的Tris-HCl缓冲液；所述磁珠清洗液是含有吐温、防腐剂的Tris-HCl缓冲液。10.根据权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述预激发液是含有双氧水、硝酸溶液；所述校准品是含有一定量的PCT抗原的BSA蛋白溶液。11.根据权利要求8所述的检测血液中降钙素原的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：张祥洪，胡星海，
申请(专利权)人：苏州新波生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32