婴儿的口腔细胞DNA提取试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种婴儿的口腔细胞DNA提取试剂盒，包括口腔细胞采集拭子、保温部件、封装部件；所述口腔细胞采集拭子、保温部件封装于所述封装部件中，还涉及用所述试剂盒提取口腔细胞DNA的方法。本发明专利技术有益效果为：口腔细胞采集拭子安全、舒适、高效；取样后在寄送过程中能够持续低温杜绝微生物污染；操作简易，减少拭子暴露时间；得率高，目前市场上的口腔细胞DNA提取试剂盒最多只能从一次采样中提取3ug基因组，若后续需要进行大量基因操作，则要多次采样提取才能满足；本发明专利技术在同样采样量的情况下可以获得50ug基因组；是一款专门针对婴儿的口腔细胞DNA提取试剂盒，考虑到婴儿取样、扩增的种种困难，能高效的完成采样、保存与提取等步骤。

【技术实现步骤摘要】
婴儿的口腔细胞DNA提取试剂盒
本专利技术涉及一种婴儿的口腔细胞DNA提取试剂盒。
技术介绍
随着近年来婴儿基因保存、易感基因检测与产前诊断需求的急剧增加，对口腔细胞DNA提取试剂盒的需求也逐年增加。但是目前市场上的口腔细胞DNA提取试剂盒有如下显著的缺陷：(1)取样拭子简陋，通常使用粗糙的棉棒或者粗糙的化纤刮棒，取样效率不高，难以判断取样效果。(2)拭子取样后在寄送往检测单位过程中容易腐败变质，无法进行后续操作。(3)现行的试剂盒为防止取样拭子腐败变质往往要求将拭子在空气中晾干，此步操作极易引起样品污染。(4)目前市场上的口腔细胞DNA提取试剂盒最多只能从一次采样中提取3ug基因组，若后续需要进行大量基因操作，则要多次采样提取才能满足。(5)目前市场上没有专门针对婴儿的口腔细胞DNA提取试剂盒，因为婴儿口腔细胞采样困难，并且采样量极小，如果用目前市场上的常用的口腔细胞DNA提取试剂盒进行操作，难以得到需要的基因量。授权公告号为CN1943517B的专利技术专利公开了一种口腔粘膜细胞自行采集与核酸预提取并稳定保存的试剂盒(联合基因生物科技(上海)有限公司)，该专利技术是一个口腔细胞采集、保存试剂盒，通过取样后立即裂解细胞、失活蛋白来防止腐败，延长了细胞样品保存时间。尽管其技术方案取得了一定的突破，但并未解决取样效率不高、得率低、操作复杂等问题。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种婴儿的口腔细胞DNA提取试剂盒。本专利技术是通过以下技术方案实现的：第一方面，本专利技术提供一种口腔细胞采集拭子，包括采样头和拭子杆；还包括容纳所述采样头的保存管，所述保存管的管口设有可拆卸的盖体；所述盖体上设有与所述拭子杆外径大小匹配的孔，拭子杆可自由穿过所述孔；所述盖体包括铰接在一起的内盖与外盖，所述内盖的外径与所述保存管管口的内径相匹配，所述外盖的外径与所述孔的直径相匹配。优选地，所述保存管的材质为聚乙烯，具有较好的刚性强度。优选地，所述采样头为八边形的片状结构。进一步地，所述八边形为长八边形，即与所述拭子杆平行的一组对边长度大于其他三组对边。优选地，所述采样头的直径为0.4～0.8mm，远大于普通采样棉签(直径0.2mm)能够大大减少婴儿采样时的不适感，提高采样效率；所述直径具体指采样头垂直于所述拭子杆方向的宽度。优选地，所述采样头的表面分布有绒毛，绒毛密度细密，易吸附口腔细胞，增加了采样成功率；所述绒毛的长度小于0.5mm。优选地，所述采样头采用柔软吸水材料制作而成。优选地，所述拭子杆的长度为200mm，直径为2mm。采样结束后将采样头置于保存管中，盖紧外盖，再拔出拭子杆，此时采样头携带口腔细胞留在保存管中，再用存管盖内盖封上外盖上的孔，即完成采样。第二方面，本专利技术提供一种口腔细胞采集盒，包括所述口腔细胞采集拭子、保温部件、封装部件；所述口腔细胞采集拭子、保温部件封装于所述封装部件中。优选地，所述保温部件包括冰袋，用于控制温度。进一步地，所述冰袋选自普通市面所售的冰袋，型号包括65mm×65mm。优选地，所述封装部件包括自封袋。进一步地，所述自封袋具体为铝箔基质自封袋，外涂不透明涂料，涂料有一定隔热效果，是一种增厚隔热自封袋，对冰袋的保温起辅助作用；所述自封袋的型号为14cm×23cm。使用本专利技术口腔细胞采集盒采集样品后，带有采集样品的采样头保存在保存管中，保存管与保温冰袋一同放入增厚隔热自封袋中，封上袋口即可保证样品保持-20℃至少8个h。在这段时间里将样品运回检测单位待检。以上第一方面所述的口腔细胞采集拭子的结构设计、第二方面所述口腔细胞采集盒部件组成设计具备如下有益效果：1、提出了婴儿专用的口腔细胞采样拭子，大大提高了采样效率；2、该采集拭子采样过程快，暴露时间短，采样全程不需要借助其他工具即可分离样品与多余的部件，大大减少了污染3、一体式低温保存设计阻止了样品腐败的发生，无需像同类产品在空气中晾干拭子，减少了空气中微生物污染样品的可能。第三方面，本专利技术提供一种口腔细胞DNA提取试剂盒，包括所述口腔细胞采集盒、口腔细胞DNA提取试剂盒。优选地，所述口腔细胞DNA提取试剂盒包括悬浮缓冲液、裂解液、Phi29DNA聚合酶(Polymerase)、反应缓冲液(ReactionBuffer)。优选地，所述悬浮缓冲液、裂解液常温保存。优选地，所述悬浮缓冲液配方为：0.1％吐温-20，NaCl200mmol/L，KCl2mmol/L，Na2HPO410mmol/L，KH2PO42mmol/L。优选地，所述裂解液的配方为：DTT0.1M，Tris-HCl20mM，盐酸胍5M。优选地，所述Phi29DNA聚合酶(Polymerase)和反应缓冲液(ReactionBuffer)保存于-10℃～-30℃。进一步优选地，所述Phi29DNA聚合酶(Polymerase)和反应缓冲液(ReactionBuffer)保存于-20℃。第四方面，本专利技术提供一种用所述试剂盒进行口腔细胞DNA提取的方法，包括：第一步，裂解细胞：向装有采样头的保存管内加入悬浮缓冲液，混合；取混合所得混合液加至PCR管，再加入裂解液，混合、加热，制成细胞裂解液；第二步，扩增基因：向所得细胞裂解液中加入Phi29DNA聚合酶(Polymerase)和反应缓冲液(ReactionBuffer，孵育完成DNA扩增，再次孵育、使酶失活，即可。优选地，第一步中，向保存管内加入悬浮缓冲液的体积以足够浸没采样头，且保证保存管内液体体积大于采样头体积。进一步优选地，加入悬浮缓冲液的体积为1～2ml，特别优选为1ml。优选地，第一步中，加入悬浮缓冲液后混合的时间为5～20s。优选为20s。优选地，第一步中，向PCR管中加入的混合液与裂解液为等体积。优选为5uL。优选地，第一步中，加入裂解液后混合的时间为5～20s。优选为20s。优选地，第一步中，所述加热的条件为60～75℃、1～10min。优选为70℃、5min。此处加热的温度越高，所需时间越短，高于70℃时加热所需时间不到5min，70℃时需要加热5min，60℃需要加热10min。优选地，第二步中，所述孵育的条件为30℃、6～10h。优选为8h，8h后Phi29DNAPolymerase酶基本进入平台期，复制不再进行，产物达到最大浓度。优选地，第二步中，所述再次孵育的条件为65℃、5min，使酶失活。以上所述的口腔细胞DNA提取的方法具备如下优势：1、高效：首次将MDA技术引入“婴儿口腔细胞提取”产品，大大提高了产物得率。2、省时：原先复杂的先提取再扩增的方法需要人工操作4h以上。本专利技术提出的“两步法MDA直接扩增技术”只需人工操作20min。3、原先复杂的先提取再扩增的方法需要20万至100万个细胞才能满足提取要求，本方法只需要采取的细胞量达到1000个即可。本专利技术扩增基因使用的主要技术为MDA，关键成分是Phi29DNA聚合酶，为了使得本专利技术的内容更加的清晰，以下是对MDA与Phi29DNA聚合酶的介绍：Phi29DNA聚合酶是从一种携带有噬菌体phi29DNA聚合酶基因重组E.coli菌株(AnE.colistrainthatcarriesthephi29DNAPolymerasegenefrombact本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种口腔细胞采集拭子，其特征在于，包括采样头(2)和拭子杆(4)；还包括容纳所述采样头(2)的保存管(1)，所述保存管(1)的管口设有可拆卸的盖体(3)；所述盖体(3)上设有与所述拭子杆(4)外径大小匹配的孔(5)，拭子杆(4)可自由穿过所述孔(5)；所述盖体(3)包括铰接在一起的内盖(32)与外盖(31)，所述内盖(32)的外径与所述保存管(1)管口的内径相匹配，所述外盖(31)的外径与所述孔(5)的直径相匹配。

【技术特征摘要】
1.一种口腔细胞采集拭子，其特征在于，包括采样头(2)和拭子杆(4)；还包括容纳所述采样头(2)的保存管(1)，所述保存管(1)的管口设有可拆卸的盖体(3)；所述盖体(3)上设有与所述拭子杆(4)外径大小匹配的孔(5)，拭子杆(4)可自由穿过所述孔(5)；所述盖体(3)包括铰接在一起的内盖(32)与外盖(31)，所述内盖(32)的外径与所述保存管(1)管口的内径相匹配，所述外盖(31)的外径与所述孔(5)的直径相匹配。2.一种口腔细胞采集盒，其特征在于，包括权利要求1所述的口腔细胞采集拭子、保温部件、封装部件；所述口腔细胞采集拭子、保温部件封装于所述封装部件中。3.一种口腔细胞DNA提取试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的口腔细胞采集盒、口腔细胞DNA提取试剂盒。4.根据权利要求3所述的口腔细胞DNA提取试剂盒，其特征在于，所述口腔细胞DNA提取试剂盒包括悬浮缓冲液、裂解液、Phi29DNA聚合酶、反应缓冲液。5.一种用权利要求4所述试剂盒进...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙睿峰，曹庆哲，王佳，
申请(专利权)人：浙江晟景生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33