CvBV29-1基因在降低果蝇免疫力和制备免疫低下型果蝇模型中的应用制造技术

本发明专利技术公开了CvBV29‑1基因在降低果蝇免疫力和制备免疫低下型果蝇模型中的应用，该CvBV29‑1基因是菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒的35个基因组片段中的第29个环上的第1个基因，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术利用转基因技术，将菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒基因CvBV29‑1转入果蝇基因组，获得了稳定遗传、纯合体的转基因果蝇品系；该转基因品系表达多分DNA病毒基因CvBV29‑1后，存在血细胞凋亡的现象，并且在受到病原物侵染时，具有明显的免疫力低的性状，在对研究昆虫免疫相关机制、增强人类免疫类药剂的筛选等方面有重要意义。

CvBV29 1 gene in the reduced immunity and application of Drosophila immunosuppressive type in a Drosophila model

The invention discloses CvBV29 1 gene in the reduced immunity and application of Drosophila immunosuppressive type in a Drosophila model, the CvBV29 1 gene first gene twenty-ninth ring 35 genome fragments of cotesiaplutellae multi DNA virus in the nucleotide sequence as shown in SEQ ID NO.1. The invention is the use of transgenic technology will cotesiaplutellae multi DNA virus CvBV29 gene into the genome of Drosophila 1, to obtain a stable genetic and homozygous transgenic Drosophila strains; the transgenic expression of DNA virus gene CvBV29 1, blood cell apoptosis phenomenon, and in pathogen attack, low immunity and has obvious traits in the study of insect immunity mechanism, enhance the significance of human immune agent selection etc..

【技术实现步骤摘要】
CvBV29-1基因在降低果蝇免疫力和制备免疫低下型果蝇模型中的应用
本专利技术涉及分子生物学和基因工程
，尤其涉及CvBV29-1基因在降低果蝇免疫力和制备免疫低下型果蝇模型中的应用。
技术介绍
昆虫是目前地球陆地上最繁盛的物种类群，是人类取之不尽的资源宝库。近年来，昆虫的免疫在其基础和应用研究方面受到极大关注，通过实验来研究与昆虫免疫相关的机制、信号等问题，对害虫防治、益虫防病、开发利用抗菌物、研究人类免疫机制等有着非常重要的现实意义。果蝇属于双翅目、果蝇属、果蝇科昆虫，约1000种。其中，果蝇具有生活史短、易饲养、繁殖快、染色体少、突变型多、易于观察等特点，被广泛地用作遗传和演化的室内外研究材料，是一种重要的模式生物。在生命科学发展的历史长河中，果蝇扮演了十分重要的角色，是十分活跃的模型生物。随着转基因技术的发展，各种转基因果蝇模型的应用也越来越广泛。目前，转基因果蝇模型主要用于遗传学的研究、发育的基因调控的研究、各类神经疾病的研究、帕金森氏病、老年痴呆症、药物成瘾和酒精中毒、衰老与长寿、学习记忆与某些认知行为等研究中。低免疫力果蝇模型在对研究昆虫免疫相关机制、增强人类免疫类药剂的筛选等方面有重要意义。但是，毒性较强的基因通常容易造成转基因果蝇的死亡；因此，寻找合适的毒性基因是建立免疫低下型果蝇的重要环节。而Polydnaviruses(多分DNA病毒，PDV)是一类寄生蜂专性共生的特殊病毒，主要包括两个属：分别是存在于膜翅目茧蜂科(Braconidae)的茧蜂病毒(Bracovirus,BV)与姬蜂科(Ichneumonidae)昆虫体内的姬蜂病毒属(Ichnovirus,IV)(Turnbull,M.andB.Webb(2002).Perspectivesonpolydnavirusoriginsandevolution.AdvancesinVirusResearch,AcademicPress.58:203-254)。PDV粒子随雌蜂产卵时注入到寄生蜂的寄主体体腔内，首先侵染血细胞，随后侵染所有组织。PDV作为寄生蜂的“强力武器”(Bai,S.,X.Chen,J.Cheng,W.FuandJ.He(2005)."Effectsofwasp-associatedfactorsofCotesiaplutellaeongrowthanddevelopmentofPlutellaxylostellalarvae."ActaPhytophylacicaSinica32(3):235-240)，其主要生理功能是抑制寄主的免疫(Dupuy,C.,E.HuguetandJ.M.Drezen(2006)."Unfoldingtheevolutionarystoryofpolydnaviruses."VirusResearch117(1):81-89,Strand,M.R.andG.R.Burke(2012)."Polydnavirusesassymbiontsandgenedeliverysystems."PlosPathogens8(7)，却不造成寄主的死亡，以保证寄生蜂的正常生长发育(Ye,Shietal.2014)。菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(CvBV)是国内研究较多的一种多分DNA病毒，共有35个环状DNA组成，编码一百多个毒性基因。因此，有必要对CvBV基因做更进一步地深入研究。
技术实现思路
本专利技术发现了CvBV29-1基因在降低果蝇免疫力和制备免疫低下型果蝇中的新用途。CvBV29-1基因是菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒的35个基因组片段中的第29个环上的第1个基因，碱基序列如SEQIDNO.1所示；其能够编码169个氨基酸，其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。本专利技术提供了CvBV29-1基因在降低果蝇免疫力中的应用，所述CvBV29-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示。经实验发现，CvBV29-1基因在促进果蝇血细胞凋亡中的用途，所述CvBV29-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了CvBV29-1基因在制备免疫低下型果蝇模型中的应用，所述CvBV29-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术提供了一种免疫低下型果蝇模型的制备方法，包括：(1)制备包含有CvBV29-1基因的重组质粒，将重组质粒注入白眼野生型果蝇胚胎中，胚胎发育至成虫后，获得红眼转基因果蝇；所述CvBV29-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示；(2)将红眼转基因果蝇与平衡系进行两轮杂交，依据后代表型，挑选纯合体转基因果蝇；(3)利用UAS/GAL4系统，将步骤(2)制得的纯合体转基因果蝇与BS8700果蝇品系进行杂交，使得CvBV29-1基因在后代果蝇血细胞中特异性表达，从而获得免疫低下型果蝇。其中，所述白眼野生型果蝇为W1118；平衡系的基因型为w-/w-；Sp/Cyo；TM2/TM6B。所述纯合体转基因果蝇的基因型为w-/w-；CvBV29-1/CvBV29-1；TM2/TM6B。本专利技术还提供了一种免疫低下型果蝇模型，其染色体中包含有CvBV29-1基因，所述CvBV29-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了一种采用上述制备方法制备的免疫低下型果蝇模型。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：(1)本专利技术利用转基因技术，将菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒基因CvBV29-1转入果蝇基因组，获得了稳定遗传、纯合体的转基因果蝇品系；利用UAS/GAL4系统，纯合体的CvBV29-1转基因果蝇与BS8700果蝇品系进行杂交，得到的品系表达多分DNA病毒基因CvBV29-1后，存在血细胞凋亡的现象，并且在受到病原物侵染时，具有明显的免疫缺陷性状，在对研究昆虫免疫相关机制、增强人类免疫类药剂的筛选等方面有重要意义。(2)本专利技术构建的CvBV29-1转基因果蝇借助Gal4/UAS系统的调控以及杂交试验，实现了CvBV29-1基因在果蝇特定组织的高表达。附图说明图1为实施例1中构建CvBV29-1转基因果蝇的PCR检测结果。图2为实施例1中半定量PCR检测CvBV29-1在转基因果蝇中的表达结果。图3为实施例1中CvBV29-1基因在果蝇血细胞中特异表达对血细胞影响的检测结果。图4为实施例1中CvBV29-1基因引起果蝇幼虫血细胞凋亡的检测结果。图5为实施例1中CvBV29-1基因影响果蝇免疫的检测结果。具体实施方式实施例11、转基因果蝇的构建根据CvBV29-1基因开放阅读框(ORF,SEQIDNO.1所示)两端序列以及pUASttb载体上多克隆位点序列，结合同源重组酶的作用方式，设计特异性引物，引物序列如下：F：5’-TTCGTTAACAGATCTGCGGCCGCATGGTGTTCAAAAAATCTGC-3’R：5’-TCCTCTAGAGGTACCCTCGAGTTAAAGCGAAATTGCTTCTTC-3’；采用Trizol(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)提取寄生后小菜蛾血细胞的总RNA，并利用试剂盒SMARTRACEcDNAAmplificationkit(Clontech,USA)构建cDNA文库。然后，利用特异性引物F、R从构建的cDNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
CvBV29‑1基因在降低果蝇免疫力中的应用，其特征在于，所述CvBV29‑1基因的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.CvBV29-1基因在降低果蝇免疫力中的应用，其特征在于，所述CvBV29-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示。2.CvBV29-1基因在促进果蝇血细胞凋亡中的应用，其特征在于，所述CvBV29-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示。3.CvBV29-1基因在制备免疫低下型果蝇模型中的应用，其特征在于，所述CvBV29-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示。4.一种免疫低下型果蝇模型的制备方法，其特征在于，包括：(1)制备包含有CvBV29-1基因的重组质粒，将重组质粒注入白眼野生型果蝇胚胎中，胚胎发育至成虫后，获得红眼转基因果蝇；所述CvBV29-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示；(2)将红眼转基因果蝇与平衡系进行两轮杂交，依据后代表型，挑...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄健华，王泽华，陈学新，时敏，周思聪，陈佳妮，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33