The present invention provides a method for detecting protein concentration of cobalt nanoparticles based on include: (1) antibodies using cobalt nanoparticles modified material to be detected; (2) will be added to the monoclonal antibody of the sample 96 hole plate, thermostatic standing overnight; (3) (2) in the discard solution, cleaning two 96 hole plate with phosphate buffer and Twain; and then to the 96 hole plate standard samples per hole with different protein concentration, temperature holding time; (4) (2) in the discard solution, using a phosphate buffer and Twain washed two times 96 hole plate; to each hole 96 Kong Banzhong in the sample, the static temperature; (5) abandon (3) and (4) in phosphate buffer solution, with Twain washed two times 96 hole plate; adding cobalt nanoparticles labeled antibodies to each hole 96 Kong Banzhong, constant static. It has the advantages of convenient and quick detection, low analysis cost, no need for large analytical instruments, higher sensitivity and more accurate detection results.
【技术实现步骤摘要】
一种基于钴纳米颗粒检测蛋白浓度的方法
本专利技术属于分析检测
,涉及一种基于钴纳米颗粒检测蛋白浓度的方法。
技术介绍
现有化学发光检测蛋白质的方法包括直接化学发光、酶促化学发光和电化学发光三种:(1)直接化学发光法将能够产生化学发光信号的分子直接标记在抗体上,加入相关反应物,产生化学发光信号;(2)酶促化学发光利用酶标抗体,底物等产生化学发光信号;(3)电化学发光是利用电化学反应和相关底物产生化学发光信号。但是,上述现有技术存在以下缺陷:(1)直接化学发光法直接利用相关分子产生的化学发光信号,没有涉及催化反应等信号放大步骤,灵敏度不够精准;(2)酶促化学发光法涉及酶标抗体,需要考虑酶活性等对检测结果的影响,检测要求较高;(3)电化学发光法中涉及了电化学反应,检测仪器比前述两种更复杂,分析成本高。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种基于钴纳米颗粒和化学发光检测蛋白浓度的高灵敏方法,具有可方便快捷检测、分析成本低、不需要较大型分析仪器、灵敏度更高、检测结果准确率高的特点,尤其适用于生物大分子,如包括蛋白质、核酸等样品的高灵敏检测。为了解决上述技术问题,本专利技术提供一种基于钴纳米颗粒检测蛋白浓度的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一,使用钴纳米颗粒修饰待检测样品的抗体,得到钴纳米颗粒修饰抗体溶液;步骤二,将待测样品的单克隆抗体分别加入到96孔板的实验孔中,恒温静置过夜,将实验孔分为两组;步骤三,弃去步骤二中第一组实验孔中所得到的上层溶液,使用加吐温的磷酸盐缓冲液清洗96孔板中的试验孔;再向96孔板中第一组的每个实验孔中加入相同体积的、不同蛋 ...
【技术保护点】
一种基于钴纳米颗粒检测蛋白浓度的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一,使用钴纳米颗粒修饰待检测样品的抗体,得到钴纳米颗粒修饰抗体溶液;步骤二,将待测样品的单克隆抗体分别加入到96孔板的实验孔中,恒温静置过夜,将实验孔分为两组;步骤三,弃去步骤二中第一组实验孔中所得到的上层溶液,使用加吐温的磷酸盐缓冲液清洗96孔板中的试验孔;再向96孔板中第一组的每个实验孔中加入相同体积的、不同蛋白浓度的标准样品,恒温静置;步骤四,弃去步骤二中第二组实验孔中所得到的上层溶液,使用加吐温的磷酸盐缓冲液清洗96孔板中的试验孔;再向96孔板中的第二组的每个实验孔中加入待测样品,恒温静置;步骤五,分别弃去步骤三的第一组实验孔和步骤四的第二组实验孔中所得到的上层溶液,再使用加吐温的磷酸盐缓冲液清洗96孔板的实验孔;再向96孔板中的每个实验孔加入步骤一中所得钴纳米颗粒修饰抗体溶液,恒温静置;步骤六,弃去步骤五第一组、第二组实验孔中所得到的上层溶液,使用加吐温的磷酸盐缓冲液清洗96孔板的实验孔;再向96孔板中的每个实验孔加入无机酸水溶液,震荡;步骤七,从步骤六第一组、第二组每个实验孔中各取出相同体积的所得溶液,加入 ...
【技术特征摘要】
1.一种基于钴纳米颗粒检测蛋白浓度的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一,使用钴纳米颗粒修饰待检测样品的抗体,得到钴纳米颗粒修饰抗体溶液;步骤二,将待测样品的单克隆抗体分别加入到96孔板的实验孔中,恒温静置过夜,将实验孔分为两组;步骤三,弃去步骤二中第一组实验孔中所得到的上层溶液,使用加吐温的磷酸盐缓冲液清洗96孔板中的试验孔;再向96孔板中第一组的每个实验孔中加入相同体积的、不同蛋白浓度的标准样品,恒温静置;步骤四,弃去步骤二中第二组实验孔中所得到的上层溶液,使用加吐温的磷酸盐缓冲液清洗96孔板中的试验孔;再向96孔板中的第二组的每个实验孔中加入待测样品,恒温静置;步骤五,分别弃去步骤三的第一组实验孔和步骤四的第二组实验孔中所得到的上层溶液,再使用加吐温的磷酸盐缓冲液清洗96孔板的实验孔;再向96孔板中的每个实验孔加入步骤一中所得钴纳米颗粒修饰抗体溶液,恒温静置;步骤六,弃去步骤五第一组、第二组实验孔中所得到的上层溶液,使用加吐温的磷酸盐缓冲液清洗96孔板的实验孔;再向96孔板中的每个实验孔加入无机酸水溶液,震荡;步骤七,从步骤六第一组、第二组每个实验孔中各取出相同体积的所得溶液,加入相对应至苏木精碱性溶液中;步骤八,检测第一组中不同蛋白浓度的标准样品的化学发光信号值,并根据浓度和发光信号值的关系做出定量曲线;步骤九,检测第二组中待测样品的发光信号值,将其信号值代入步骤八中所得的定量曲线中,得出待测样品中的蛋白浓度。2.根据权利要求1所述的一种基于钴纳米颗粒检测蛋白浓度的方法,其特征在于,所述步骤一中,使用钴纳米颗粒修饰待检测物质抗体的方法如下:(1)将钴纳米颗粒溶液与待测样品多克隆抗体溶液混合,震荡;(2)离心除去上述(1)中所得上清液,收集钴纳米颗粒修饰后的抗体,再用磷酸盐缓冲液重新分散,得到钴纳米颗粒修饰抗体溶液。3.根据权利要求2所述的一种基于钴纳米颗粒检测蛋白浓度的方法,其特征在于,上述(1)中钴纳米颗粒与待测样品多克隆...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈雯雯,王纪东,何松良,邹兴,李乔亮,
申请(专利权)人:深圳大学,
类型:发明
国别省市:广东,44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。