细胞保存液及其利用、以及细胞保存液的制造方法技术

本发明专利技术涉及细胞保存液。另外，本发明专利技术涉及使用细胞保存液的，细胞的保存方法、固定细胞的调制方法及细胞的分析方法。再者，本发明专利技术涉及细胞保存液的制造方法。

Cell preservation solution and its utilization, and manufacturing method of cell preservation solution

The present invention relates to cell preservation solutions. In addition, the present invention relates to cell preservation methods, cell preservation methods, modulation methods of stationary cells, and cell analysis methods. Furthermore, the present invention relates to the manufacturing method of cell preservation solution.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞保存液及其利用、以及细胞保存液的制造方法
本专利技术涉及细胞保存液。另外，本专利技术涉及使用细胞保存液的，细胞的保存方法、固定细胞的调制方法及细胞的分析方法。再者，本专利技术涉及细胞保存液的制造方法。
技术介绍
在分析细胞时，在供于分析之前保存细胞。例如，在分析从生物体采集的细胞时，由于从生物体分离后，细胞就开始自身分解，在从细胞的采集至分析之间、有必要将细胞适合地保存。在专利文献1中记载了分析前将细胞保存在细胞保存液中。在专利文献1的实施例5中公开了细胞保存液含1mM醋酸镁、2mM醋酸钙、10mM氯化钾、0.1％氯化钠及20％甲醇。【现有技术文献】【专利文献】专利文献1：美国专利第5,256,571号说明书
技术实现思路
【专利技术要解决的技术课题】本专利技术人发现，如果在以往的细胞保存液中将细胞保存指定的期间，则有该细胞中所含的核酸变得不稳定而被分解的情况。从而，期望能将细胞在体外更稳定地保存指定的期间的细胞保存液的开发。【解决课题的技术方案】本专利技术提供细胞保存液，其在水性溶剂中含碳原子数1～6的低级醇和二价的金属离子，上述二价的金属离子的浓度是约6mmol/L以上约82mmol/L以下。本专利技术提供细胞的保存方法，其包括使细胞在体外浸渍于上述的细胞保存液。本专利技术提供细胞保存液的制造方法，其包括在水性溶剂中混合碳原子数1～6的低级醇和二价的金属离子，细胞保存液中的二价的金属离子的浓度是约6mmol/L以上约82mmol/L以下。本专利技术提供固定细胞的调制方法，其包括通过使细胞和上述的细胞保存液在体外接触而固定细胞。本专利技术提供细胞的分析方法，其包括通过使细胞和上述的细胞保存液在体外接触而固定细胞的工序，及对在此工序中得到的固定细胞中所含的核酸进行分析的工序。【专利技术效果】本专利技术能将成为分析的对象的细胞至供于分析的指定的期间、在体外稳定保存。【附图说明】【图1】是对从在本实施方式的细胞保存液或市售的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳之时的照片。【图2A】是显示将从受试者采集的子宫颈部细胞在市售的细胞保存液中在指定的条件下保存，将该细胞的DNA中所含的人乳头瘤病毒(HPV)来源的核酸用杂交体捕获剂(HC)法检测之时的测定值的坐标图。【图2B】是显示将从受试者采集的子宫颈部细胞在市售的细胞保存液中在指定的条件下保存，将该细胞的DNA中所含的HPV来源的核酸用HC法检测之时的测定值的坐标图。【图3A】是显示将从受试者采集的子宫颈部细胞在本实施方式的细胞保存液中在指定的条件下保存，将该细胞的DNA中所含的HPV来源的核酸用HC法检测之时的测定值的坐标图。【图3B】是显示将从受试者采集的子宫颈部细胞在本实施方式的细胞保存液中在指定的条件下保存，将该细胞的DNA中所含的HPV来源的核酸用HC法检测之时的测定值的坐标图。【图4】是将从受试者采集的子宫颈部细胞在本实施方式的细胞保存液或市售的细胞保存液中于室温保存2天之后，Papanicolaou染色之时的照片。【图5】是将在有各种镁离子浓度的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【图6】是显示在将在本实施方式的细胞保存液中于25℃保存4小时的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图中的二倍体细胞出现区域的图。【图7A】是显示在对于在有各种镁离子浓度的细胞保存液中于25℃保存4小时或于30℃保存24小时的HeLa细胞，二倍体细胞出现区域中的荧光面积的变动系数(CV)的值的坐标图。【图7B】是显示在对于在有各种镁离子浓度的细胞保存液中于30℃保存24小时的HeLa细胞，二倍体细胞出现区域中的荧光面积的CV的值的坐标图。【图8A】是将在有各种甲醇浓度的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【图8B】是将在有各种甲醇浓度的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【图8C】是将在有各种甲醇浓度的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【图9】是将在pH6.4或7.0的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【图10】是将在有各种钙离子浓度的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【图11】是将在市售的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【图12】是显示收容到容器中的细胞保存液的一例的概略图。【图13】是将在有各种钙离子浓度的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【图14】是将在含镁离子及钙离子的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【图15】是将在含乙醇的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【图16】是将在实施例1的细胞保存液或美国专利第5,256,571号说明书中公开的细胞保存液中在指定的条件下保存的HeLa细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【图17】是将在有各种镁离子浓度的细胞保存液中在指定的条件下保存的HUVEC细胞用流式细胞仪分析而得到的荧光面积的直方图。【实施方式】[1.细胞保存液]本实施方式的细胞保存液的特征在于，在水性溶剂中含碳原子数1～6的低级醇和二价的金属离子，该二价的金属离子的浓度是约6mmol/L以上约82mmol/L以下。碳原子数1～6的低级醇(以下，也简称为“低级醇”)只要是于常温(25℃)能与水以任意的比例混合，就不特别限定，例如，可举出甲醇、乙醇、n-丙醇、异丙醇、n-丁醇、异丁醇、sec-丁醇、tert-丁醇、n-戊基醇、异戊基醇、sec-戊基醇、tert-戊基醇、1-乙基-1-丙醇、2-甲基-1-丁醇、n-己醇、环己醇等。在它们之中，从与细胞的保存及固定相关的作用(脱水作用及蛋白质的凝固作用)的观点来看，也优选甲醇或乙醇，特别优选甲醇。在本实施方式中，低级醇可为仅1种使用，也可为2种以上使用。2种以上的醇可以任意的比例混合。例如，可在细胞保存液中使用将甲醇和乙醇以任意的比例混合的混合醇。细胞保存液中的低级醇的浓度可根据细胞的保存期间、细胞的分析方法等适宜设定，但当浓度过低时(例如低于约20体积％的浓度的情况)、细胞的稳定保存变难，当浓度过高时(例如高于约60体积％的浓度的情况)，有过量地固定细胞的担忧。在本实施方式中，低级醇的浓度通常是约20体积％以上约60体积％以下，优选为约30体积％以上约50体积％以下，特别优选为约40体积％以上约45体积％以下。在进一步的的实施方式中，低级醇的浓度是20体积％以上60体积％以下，优选为30体积％以上50体积％以下，特别优选为40体积％以上45体积％以下。通过以这样的浓度含低级醇，稳定保存细胞变得可能。另外，也可期待抑菌作用或杀菌作用。再者，在本说明书中，“体积％”也表示为“v/v％”或“vol％”。二价的金属离子只要不影响细胞的形态及构成成分的维持，就不特别限定，例如，也可本文档来自技高网...

【技术保护点】
细胞保存液，其在水性溶剂中含碳原子数1～6的低级醇和二价的金属离子，上述二价的金属离子的浓度是约6mmol/L以上约82mmol/L以下。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.30 JP 2015-131552;2016.02.29 JP 2016-037261.细胞保存液，其在水性溶剂中含碳原子数1～6的低级醇和二价的金属离子，上述二价的金属离子的浓度是约6mmol/L以上约82mmol/L以下。2.权利要求1所述的细胞保存液，其中二价的金属离子是第2族元素的金属离子。3.权利要求1或2所述的细胞保存液，其中二价的金属离子是选自镁离子及钙离子的至少1种。4.权利要求1～3之任一项所述的细胞保存液，其中二价的金属离子的浓度是约6mmol/L以上约80mmol/L以下。5.权利要求1～4之任一项所述的细胞保存液，其中二价的金属离子的浓度是约10mmol/L以上约60mmol/L以下。6.权利要求1～5之任一项所述的细胞保存液，其中低级醇是选自甲醇及乙醇的至少1种。7.权利要求1～6之任一项所述的细胞保存液，其中低级醇的浓度是约20体积％以上约60体积％以下。8.权利要求1～7之任一项所述的细胞保存液，其pH是约6以上约8以下。9.权利要求1～8之任一项所述的细胞保存液，其中由细胞保存液保存的细胞是从生物体采集的子宫颈部细胞、子宫体部细胞、口腔细胞、乳腺细胞、甲状腺细胞、尿中细胞、咳痰中细胞、支气管擦过细胞、腹腔清洗液中细胞、体腔液中细胞、或者，采集的组织中所含的细胞。10.细胞的保存方法，其包括在体外将细胞浸渍于权利要求1～9之任一项所述的细胞保存液中。11.细胞保存液的制造方法，其包括：在水性溶剂中混合碳原子数1～6的低级醇和二价的金属离子，上述细胞保存液中的二价的金属离子的浓度是约6mmol/L以上约82mmol/L以下。12.权利要求11所述的方法，其中二价的金属离子是第2族元素的金属离子。13.权利要求11或12所述的方法，其中二价的金属离子是选...

【专利技术属性】
技术研发人员：横山光士，冈智子，森田将且，山本由佳，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP