一种山苦瓜的组培快繁方法技术

本发明专利技术涉及种苗繁育技术领域，具体涉及一种山苦瓜的组培快繁方法。本发明专利技术采用组织培养的方法，通过不同外植体选取与处理、诱导、增殖、生根等过程，获得优质山苦瓜组培苗。使用本发明专利技术方法，可以明显促进植株生长、茁壮、提高继代次数，缓解玻璃化、黄化等问题，促进山苦瓜的开发、利用，满足其大规模生产和新优品种快速推广的需求。

Method for tissue culture and rapid propagation of Momordica charantia

The invention relates to the technical field of seedling propagation, in particular to a method for tissue culture and rapid propagation of Momordica charantia. The invention adopts the method of tissue culture, and obtains the tissue culture seedling of the high-quality Momordica charantia through the process of selecting and treating different explants, inducing, multiplication and rooting. Using the method of the invention can significantly promote plant growth, improve the healthy, subculture, ease the vitrification, yellowing and other issues, and promote the development of the use of bitter gourd, meet the mass production and the advantages of new varieties of rapid promotion demand.

【技术实现步骤摘要】
一种山苦瓜的组培快繁方法
：本专利技术涉及种苗繁育
，具体涉及一种山苦瓜的组培快繁方法。
技术介绍
：山苦瓜(Momordicacharantiavar)又名土瓜、苦瓜莲，葫芦科山苦瓜属多年生宿根草质藤本，喜温怕寒。山苦瓜的根、茎、叶、花、果实和种子均可供药用，性寒味苦，入心脾胃三经，清暑解热，明目解毒。研究证实其果实中富含丰富的苦瓜甙、苦瓜素，能够明显降低血糖浓度，对健康非常有益，极具开发价值。山苦瓜的繁殖方式常采用种子繁殖，繁育速度较慢，另外，其单果含种量仅有10余粒，难以在短期内获得大量种苗，严重制约了优良品种的推广速度。因此研究山苦瓜的离体快繁方法，进一步提高山苦瓜的开发、利用价值，对其大规模生产和新优品种的快速推广，具有重要的理论和现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种山苦瓜组培快繁的技术，它包括以下几个步骤：1)外植体处理山苦瓜的外植体选取主要以带腋芽的茎段为主，带腋芽茎段可以由无菌幼苗途径或大田实生苗途径获得。①无菌幼苗途径：选取成熟饱满的种子，用50-55℃的温水搅拌20min后浸种6-8h对种子进行消毒处理。使用0.1％HgCl2消毒10-15min,无菌水冲洗3-5次后，剥去种皮，胚根端朝下接种于MS培养基中培养，培养温度28-30℃；光照强度2000-3000Lux；连续光照培养10-12小时/天，7-10d后长出两片真叶且展叶后备用。其中，0.1％的HgCl2需提前4小时配制，保证充分溶解，配制时取1gHgCl2粉剂溶于1L无菌水中，避光保存；HgCl2粉剂采购于天津市致远化学试剂有限公司。②大田实生苗途径：当年采收的种子播种后获得大田实生苗，选取生长25-45天的带腋芽的茎段作为外植体，剪成5-8cm小段，每段含有1-2个芽点，流水下冲洗10min-20min，再用0.1％HgCl2处理7-8min，无菌水振荡冲洗3-5次,每次2-3min,消毒完成后备用；2)腋芽诱导将步骤1)所得的外植体切取3-5cm大小的茎段，确保每段含有1-2个腋芽，接入诱导培养基上,每30-50ml诱导培养基接种1-2个外植体，5-7天后即可诱导出腋芽。培养温度28-30℃；光照强度2000-3000Lux，连续光照时长10-12小时/天。其中，改良基本培养基为：硝酸铵1650mg/L，硝酸钾1900mg/L，七水硫酸镁370mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，二水氯化钙440mg/L，宝力健0.5-1.0g/L，蔗糖20-30g/L，琼脂6.0-6.3g/L，用蒸馏水按常规方法配制培养基，用1mol/L的NaOH或HCl调节PH到5.8-6.2。诱导培养基为每升改良基本培养基中加入0.5mg的6-BA和0.05mg的IBA组成“宝力健”为一种新型有机微量元素添加剂，可以代替MS配方中的微量、有机、铁盐等，使效果更加突出，采购于北京康倍斯科技有限公司。3)增殖培养将步骤2)所诱导出的腋芽转到增殖培养基上，每50ml培养基转接5个腋芽进行增殖培养，培养温度28-30℃，光照强度2000-3000Lux，连续光照时长10-12小时/天。培养12-17天，待增殖系数达到4.0-5.0获得分化苗丛生芽。其中，增殖培养基为每升改良基本培养基添加0.2-0.5mg的6-BA和0.02-0.05mg的IBA组成；增殖系数为增殖后芽数与增殖前芽数的比值。4)生根培养将步骤3)所得的分化苗丛生芽分单株，每株切取大小3-5cm，转接到生根培养基上进行生根培养，每50ml培养基上转接5株进行培养，培养温度28-30℃，光照强度2000-3000Lux，连续光照时长10-12小时/天，7-10天后待生根苗株高至5-7cm，主根5条以上，健壮有活力，即可进行驯化移栽；其中，生根培养基为每升改良基本培养基添加0.1-0.2mg的NAA组成。本专利技术采用组织培养的方法，通过不同外植体选取与处理、诱导、增殖、生根培养，获得优质的山苦瓜快繁苗。使用本专利技术方法快繁山苦瓜的有益效果为：第一，可以明显促进植株茁壮生长、提高继代次数，缓解普通组织培养过程中组培苗玻璃化、黄化等问题；第二，避免普通山苦瓜繁殖过程中病毒侵害问题，提高山苦瓜繁殖品质；第三，本专利技术方法可以选择性的快速大量繁殖优质山苦瓜品种，解决优质品种少，繁殖困难和繁殖周期长的问题，促进山苦瓜的开发、利用研究的进展，以满足其大规模生产和新优品种快速推广的需求。具体实施方式以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容做进一步的详细说明，但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围，除特殊说明外，下述实施例中均采用常规现有技术完成。实施例1所述的山苦瓜组培快繁技术，具体步骤如下：首先，选取成熟饱满的种子，用50℃的温水搅拌20min后浸种6h后对种子进行消毒处理。使用0.1％HgCl2消毒10min,无菌水冲洗5次后，剥去种皮，胚根端朝下接种于MS培养基中培养，培养温度28-30℃；光照强度2000Lux；连续光照时长10小时/天，7天后长出两片真叶且展叶后备用。第二：将已经展叶的无菌播种获得的外植体切取3cm大小的茎段，每段含有1个腋芽，接入诱导培养基上,每30mL培养基接种1个外植体，7天后诱导出腋芽。其中，改良基本培养基为：硝酸铵1650mg/L，硝酸钾1900mg/L，七水硫酸镁370mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，二水氯化钙440mg/L，宝力健0.5g/L，蔗糖20g/L，琼脂6.0g/L，用蒸馏水按常规方法配制培养基，用1mol/L的NaOH或HCl调节PH到5.8。诱导培养基为每升改良基本培养基中加入0.5mg的6-BA和0.05mg的IBA组成。第三：将诱导出的腋芽转入增殖培养基上，每50ml培养基转接5个腋芽进行增殖培养，培养温度28-30℃，光照强度2000Lux，连续光照时长10小时/天，17天增殖系数即可达到4.1，获得分化苗丛生芽。其中，增殖培养基为每升改良基本培养基添加0.2mg的6-BA和0.02mg的IBA组成；增殖系数为增殖后芽数与增殖前芽数的比值。第四：将分化苗丛生芽分单株，每株切取3cm大小转接到生根培养基，每50ml培养基上转接5株进行生根培养，培养温度28-30℃，光照强度2000Lux，连续光照时长10小时/天，10天后平均株高5.4cm，生根8条并且健壮有活力，此时可进行驯化移栽；其中，生根培养基为每升改良基本培养基添加0.1mg的NAA组成；实施例1中，在对山苦瓜组培过程中，无菌播种出芽率100％，腋芽诱导率达97％，增殖系数为3.7，生根率100％，驯化成活率90％。实施例1中的改良基本培养基，与MS作为基本培养基组培快繁过程中生长指标差异如表1。表1、以MS、改良基本培养基培养差异情况表注：生长势分三个等级，A：叶色浓绿，叶片厚实，根茎粗壮；B：叶色翠绿，叶片较厚实，根茎较粗壮；C：叶色黄绿，叶片薄，根茎细弱实施例2所述的山苦瓜组培快繁技术，具体步骤如下：首先，选取成熟饱满的种子，用55℃的温水搅拌20min后浸种8h后对种子进行消毒处理。使用0.1％HgCl2消毒15,无菌水冲洗5次后，剥去种皮，胚根端朝下接种于MS培养基中培养，培养温度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种山苦瓜的组培快繁方法，其特征在于，包括以下几个步骤：1)外植体处理山苦瓜的外植体选取主要以带腋芽的茎段为主，带腋芽茎段可以由以下两种途径获得：无菌幼苗途径：选取饱满种子消毒，无菌培养后备用；大田实生苗途径：选择大田实生苗消毒后备用；2)腋芽诱导将步骤1)所得的外植体切取3‑5cm大小的茎段，确保每段含有1‑2个腋芽，接入诱导培养基上,每30‑50ml诱导培养基接种1‑2个外植体，5‑7天后即可诱导出腋芽，培养温度28‑30℃；光照强度2000‑3000Lux，连续光照时长10‑12小时/天；其中，改良基本培养基为：硝酸铵1650mg/L，硝酸钾1900mg/L，七水硫酸镁370mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，二水氯化钙440mg/L，宝力健0.5‑1.0g/L，蔗糖20‑30g/L，琼脂6.0‑6.3g/L，用蒸馏水按常规方法配制培养基，用1mol/L的NaOH或HCl调节PH到5.8‑6.2；诱导培养基为每升改良基本培养基中加入0.5mg的6‑BA和0.05mg的IBA组成；3)增殖培养将步骤2)所诱导出的腋芽转到增殖培养基上，每50ml培养基转接5个腋芽进行增殖培养，培养温度28‑30℃，光照强度2000‑3000Lux，连续光照时长10‑12小时/天，培养养12‑17天，增值系数达到4.0‑5.0获得分化苗丛生芽；其中，增殖培养基为每升改良基本培养基添加0.2‑0.5mg的6‑BA和0.02‑0.05mg的IBA组成；增殖系数为增殖后芽数与增殖前芽数的比值；4)生根培养将步骤3)所得的分化苗丛生芽分单株，每株切取大小3‑5cm，转接到生根培养基上进行生根培养，每50ml培养基上转接5株进行培养，培养温度28‑30℃，光照强度2000‑3000Lux，连续光照时长10‑12小时/天，7‑10天后，待生根苗株高至5‑7cm，主根5条以上，健壮有活力，即可进行驯化移栽；其中，生根培养基为每升改良基本培养基添加0.1‑0.2mg的NAA组成。...

【技术特征摘要】
1.一种山苦瓜的组培快繁方法，其特征在于，包括以下几个步骤：1)外植体处理山苦瓜的外植体选取主要以带腋芽的茎段为主，带腋芽茎段可以由以下两种途径获得：无菌幼苗途径：选取饱满种子消毒，无菌培养后备用；大田实生苗途径：选择大田实生苗消毒后备用；2)腋芽诱导将步骤1)所得的外植体切取3-5cm大小的茎段，确保每段含有1-2个腋芽，接入诱导培养基上,每30-50ml诱导培养基接种1-2个外植体，5-7天后即可诱导出腋芽，培养温度28-30℃；光照强度2000-3000Lux，连续光照时长10-12小时/天；其中，改良基本培养基为：硝酸铵1650mg/L，硝酸钾1900mg/L，七水硫酸镁370mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，二水氯化钙440mg/L，宝力健0.5-1.0g/L，蔗糖20-30g/L，琼脂6.0-6.3g/L，用蒸馏水按常规方法配制培养基，用1mol/L的NaOH或HCl调节PH到5.8-6.2；诱导培养基为每升改良基本培养基中加入0.5mg的6-BA和0.05mg的IBA组成；3)增殖培养将步骤2)所诱导出的腋芽转到增殖培养基上，每50ml培养基转接5个腋芽进行增殖培养，培养温度28-30℃，光照强度2000-3000Lux，连续光照时长10-12小时/天，培养养12-17天，增值系数达到4.0-5.0获得分化苗丛生芽；其中，增殖培养基为每升改良基本培养基添加0.2-0.5mg的6-BA和0.02-0.05mg的IBA组成；增殖系数为增殖后芽数...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵学彩，赵红霞，李媛媛，刘欣，胡东关，王静，
申请(专利权)人：山东博华高效生态农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37