一种用于鉴定川贝母及伪品的荧光PCR检测引物、探针组合物、试剂盒及检测方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种用于鉴定川贝母及伪品的荧光PCR检测引物、探针组合物及检测方法与应用。本发明专利技术以贝母的一对通用引物对待测样本DNA提取物进行PCR扩增，以川贝母特异探针、贝母通用探针及伪品贝母特异探针，利用多重多色实时荧光PCR技术，一管反应，鉴定川贝母真伪。本发明专利技术的检测方法具有特异性好，扩增效率高，灵敏度高，准确率高，重现性好，检测周期短的特点，并且能实时检测DNA扩增反应，具有很高的可行性与应用前景，对中草药川贝母市场的健康稳定发展具有重要的意义。

Fluorescent PCR detection primer, probe composition, reagent kit and detection method and application for identifying Fritillaria and pseudo products

The invention discloses a fluorescent PCR detection primer for detecting Fritillaria and pseudo products, a probe composition, a detection method and an application thereof. The present invention in Fritillaria a pair of universal primers. The test sample extract of DNA was amplified by PCR, with specific probes, Fritillaria Fritillaria Fritillaria and adulterants universal probe specific probe, real-time fluorescent PCR technology using multiple multi tube reaction, identification of Fritillaria authenticity. The detection method of the invention has good specificity, amplification efficiency, high sensitivity, high accuracy, good reproducibility, detection of short cycle characteristics, and real-time detection of DNA amplification reaction, the feasibility and application prospect is very high, has important significance to the development of Chinese herbal medicine Fritillaria market healthy and stable.

【技术实现步骤摘要】
一种用于鉴定川贝母及伪品的荧光PCR检测引物、探针组合物、试剂盒及检测方法与应用
本专利技术涉及一种检测方法，具体涉及一种用于鉴定川贝母及伪品的荧光PCR检测引物、探针组合物及检测方法与应用。属于分子生物学

技术介绍
药用川贝母为百合科(Liliaceae)贝母属(FritillariaL.)川贝母、暗紫贝母、甘肃贝母、梭砂贝母或太白贝母、瓦布贝母的干燥鳞茎。按药材性状不同分别习称“松贝”、“青贝”和“炉贝”。川贝母具有清热化痰、润肺止咳的功效，药用价值极高，由于川贝母生长周期长、资源紧缺，已成为中药材中价格最昂贵的根茎类药材之一。随着需求量的增加，伊犁贝母、平贝母、轮叶贝母等作为川贝母的混伪品频繁出现，甚至葫芦科有毒植物土贝母的鳞茎也被发现冒充川贝母出售，药材质量极不稳定，直接影响到川贝母的用药安全与人的生命安全。因此对川贝母药材进行更深入的鉴定研究对于保证川贝母药材的质量及用药安全具有重要意义。传统的鉴定方法有性状鉴别、显微结构法和化学鉴定方法。但由于市场上贝母类药材品种多，药源植物来源不一、种植环境、产地和加工等因素的存在使得传统的鉴定方法具有一定的局限性，很难将川贝本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鉴定川贝母及伪品的荧光PCR通用检测引物，其特征在于，其核苷酸序列如下：通用上游引物Fritillaria F：5'‑GCAGAATCCCGTGAACCATC‑3'，如SEQ ID NO.1所示；通用下游引物Fritillaria R：5'‑TCCGTCCACCACTCGTCG‑3'，如SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于鉴定川贝母及伪品的荧光PCR通用检测引物，其特征在于，其核苷酸序列如下：通用上游引物FritillariaF：5'-GCAGAATCCCGTGAACCATC-3'，如SEQIDNO.1所示；通用下游引物FritillariaR：5'-TCCGTCCACCACTCGTCG-3'，如SEQIDNO.2所示。2.一种用于鉴定川贝母及伪品的探针组合物，其特征在于，包括：(1)川贝母的特异探针，其核苷酸序列如下：川贝母的特异探针FritillariaP1：5'-CCAATGACCCTTCGGGTGCG-3'，如SEQIDNO.3所示；(2)贝母的通用探针，其核苷酸序列如下：贝母的通用探针FritillariaUP：5'-CTCGTGTGCGGCGGGCTT–3'，如SEQIDNO.4所示；(3)伪品贝母的特异探针，其核苷酸序列如下：伪品贝母的特异探针FritillariaWP：5'-ACTGGCCCTCCGTGCCTCGT-3'，如SEQIDNO.5所示。3.根据权利要求2所述的探针组合物，其特征在于，所述3种探针核苷酸序列的5’端修饰有报告基团，3’端修饰有淬灭基团，所述报告基团为FAM、HEX、TAMRA、ROX、CY5中的任一种，所述淬灭基团为Dabcyl、BHQ1，BHQ2中的任一种，所述3种探针选用不同的荧光修饰标记。4.一种用于鉴定川贝母及伪品的PCR检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述荧光PCR通用检测引物、权利要求2所述探针组合物和实时荧光PCR反应扩增体系。5.根据权利要求4所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：步迅，刘艳艳，张全芳，
申请(专利权)人：山东省农业科学院生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：山东,37