一种新型向导RNA表达盒及在CRISPR/Cas系统中的应用技术方案

本发明专利技术涉及一种应用于CRISPR/Cas系统的向导RNA表达盒，所述向导RNA表达盒以5S rRNA基因作为启动子来起始向导RNA的表达；本发明专利技术还提供包含所述向导RNA表达盒的CRISPR/Cas系统以及利用所述系统进行基因组编辑的方法。本发明专利技术的向导RNA表达盒、CRISPR/Cas系统以及基因组编辑的方法具有通用性、高效性、简便性以及准确性等优势。

【技术实现步骤摘要】
一种新型向导RNA表达盒及在CRISPR/Cas系统中的应用
本专利技术属于生物
；具体地说，本专利技术涉及一种以5SrRNA基因为启动子的新型向导RNA表达盒及其在CRISPR/Cas系统中的应用。
技术介绍
CRISPR/Cas(clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats/CRISPR-associatedproteins)系统为细菌与古生菌中抵御外源病毒或质粒DNA入侵的获得性免疫系统。该系统的核酸酶在crRNA的指导下识别并降解外源DNA。其中，II型CRISPR/Cas系统组成简单，仅包括一个核酸酶Cas9与tracrRNA:crRNA二聚体便可完成识别和切割功能。CRISPR/Cas9系统以其设计操纵简便、编辑高效与通用性广等优势迅速成为新一代的基因组编辑技术，已被广泛应用于人、小鼠、大鼠、斑马鱼、秀丽隐杆线虫、植物、真菌与细菌等不同物种(Hsuetal.2014)。基于CRISPR/Cas9的基因组编辑技术中，Hsu等(Hsuetal.2013)将tracrRNA:crRNA二聚体被进一步设计为单一的嵌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种应用于CRISPR/Cas系统的向导RNA表达盒，其特征在于，所述向导RNA表达盒是由真核生物的RNA聚合酶III识别的type 1启动子来起始向导RNA的表达。

【技术特征摘要】
1.一种应用于CRISPR/Cas系统的向导RNA表达盒，其特征在于，所述向导RNA表达盒是由真核生物的RNA聚合酶III识别的type1启动子来起始向导RNA的表达。2.如权利要求1所述的向导RNA表达盒，其特征在于，所述由真核生物的RNA聚合酶III识别的type1启动子具有真核生物的5SrRNA基因的序列。3.如权利要求1或2所述的向导RNA的表达盒，其特征在于，所述向导RNA的表达盒从5’-3’具有以下结构：A-B-C其中，A为真核生物的RNA聚合酶III识别的type1启动子；B为无或可自我切割的核酶；C为向导RNA。4.如权利要求3所述的向导RNA表达盒，其特征在于，所述可自我切割的核酶选自HH核酶(hammerhead,HHribozyme)、HP核酶(hairpinHPribozyme)、glmS核酶(Glucosamine6-phosphatesynthase,glmSribozyme)、VS核酶(Varkudsatellite,VSribozyme)、HDV核酶(hepatitisdeltavirus,HDVribozyme)与类HDV核酶(Hepatitisdeltavirus-like,HDV-likeribozyme)等；更优选地，所述核酶是HDV核酶与HH核酶。5.一种载体，所述载体包含权利要求1-4中任一项所述的表达盒。6.一种CRISPR/Cas系统，其特征在于，所述CRISPR/Cas系统包含权利要求1-4中任一项所述的向导RNA表...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙际宾，郑小梅，郑平，马延和，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：天津,12