应用三代测序技术检测染色体端粒DNA全长的方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，特别涉及应用三代测序技术检测染色体端粒DNA全长的方法。本发明专利技术公开了染色体端粒DNA的扩增方法，包括下列步骤：1)提取基因组DNA；2)将步骤1)的基因组DNA进行预处理；3)将步骤2)获得的预处理后的基因组DNA两端的末端添加扩增接头，得到带有扩增接头的基因组DNA；4)分别对步骤3)的带有扩增接头的基因组DNA序列和扩增接头序列设计引物对，对端粒DNA进行PCR扩增。本发明专利技术公开的检测染色体端粒DNA全长的方法能达到单碱基分辨率，弥补了特异性地准确测量单条染色体完整端粒DNA技术的空白。

【技术实现步骤摘要】
应用三代测序技术检测染色体端粒DNA全长的方法
本专利技术涉及分子生物学领域，特别涉及应用三代测序技术检测染色体端粒DNA全长的方法。
技术介绍
端粒是位于真核细胞线性染色体末端的一小段DNA-蛋白质复合体，其作用是保护染色体DNA的末端，避免染色体DNA的降解、末端融合以及非正常重组等。在哺乳动物细胞中，端粒DNA由TTAGGG序列和AATCCC序列重复串联组成。由于DNA的末端复制问题，细胞的每次分裂都伴随着端粒DNA一小段序列的丢失。细胞的每次分裂都会伴随着染色体末端端粒的缩短，细胞也因此逐渐老化、直至丧失增殖能力而死亡。端粒长度的变化与多种疾病密切相关，如癌症、早衰综合征等。因此测量端粒长度能提供与疾病相关的重要信息。目前测量端粒长度主要是基于qPCR的方法，对重复区段进行扩增，端粒DNA的片段越长，重复区段的拷贝数就多。但是这种方法只能检测所有染色体端粒重复区段长度的大概平均值，无法精确检测单独每一条染色体的端粒长度。而且由于染色体DNA其他部分也存在类似端粒DNA重复序列的结构，这部分序列也会影响qPCR对端粒长度的检测。从实验操作上来说，由于qPCR反应很容易受到其他条本文档来自技高网...

【技术保护点】
染色体端粒DNA的扩增方法，其特征在于，包括下列步骤：1)提取基因组DNA；2)将步骤1)的基因组DNA进行预处理，得到预处理后的基因组DNA；3)将步骤2)获得的预处理后的基因组DNA两端的末端连接扩增接头，得到带有扩增接头的基因组DNA；4)分别对步骤3)的带有扩增接头的基因组DNA序列和扩增接头序列设计引物对，对端粒DNA进行PCR扩增。

【技术特征摘要】
1.染色体端粒DNA的扩增方法，其特征在于，包括下列步骤：1)提取基因组DNA；2)将步骤1)的基因组DNA进行预处理，得到预处理后的基因组DNA；3)将步骤2)获得的预处理后的基因组DNA两端的末端连接扩增接头，得到带有扩增接头的基因组DNA；4)分别对步骤3)的带有扩增接头的基因组DNA序列和扩增接头序列设计引物对，对端粒DNA进行PCR扩增。2.根据权利要求1所述的染色体端粒DNA扩增方法，其特征在于，所述步骤2)的基因组DNA进行预处理为所述基因组DNA的两端进行末端修复。3.根据权利要求2所述的染色体端粒DNA扩增方法，其特征在于，所述基因组DNA片段的末端修复为将基因组DNA片段的补平，然后对基因组DNA的5’端进行磷酸化，以及对基因组DNA片段的3’端添加腺嘌呤。4.根据权利要求1所述的染色体端粒DNA扩增方法，其特征在于，所述步骤3)的扩增接头还包括标签序列。5.根据权利要求1所述的染色体端粒DNA扩增方法，其特征在于，所述步骤3)还包括将得到的带有扩增接头的基因组DNA进行纯化。6.根据权利要求1至5任意一项所述的染色体端粒DNA的扩增方法，其特征在于，所述扩增接头为Y型接头、环状接头或线性接头中的一种。7.一种染色体端粒DNA的扩增试剂盒，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈龙，钟嘉泳，顾炜，
申请(专利权)人：广州普麦健康咨询有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44