miR‑31‑5p与miR‑99a‑5p区分活动性肺结核和结核潜伏感染中的应用制造技术

本发明专利技术公开了miR‑31‑5p与miR‑99a‑5p区分活动性肺结核和结核潜伏感染中的应用。检测miR‑31‑5p表达量的物质为利用定量PCR检测miR‑31‑5p表达量所需的试剂和仪器以及利用RNA‑Seq检测miR‑31‑5p表达量所需的试剂和仪器；检测miR‑99a‑5p表达量的物质为利用定量PCR检测miR‑99a‑5p表达量所需的试剂和仪器以及利用RNA‑Seq检测miR‑99a‑5p表达量所需的试剂和仪器。利用miR‑31‑5p与miR‑99a‑5p区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者的AUC均大于0.8，特异性好，可用于区分活动性肺结核和结核潜伏感染。

31 5p and miR miR 99A 5p to distinguish between pulmonary tuberculosis and tuberculous infection in the application of latent activity

The invention discloses a miR 31 5p and miR 99A 5p distinguish pulmonary tuberculosis and tuberculous infection in the application of latent activity. The expression of miR 31 5p the amount of material for the detection of miR using quantitative PCR 31 expression of 5P reagents and equipment required amount and detection of miR using RNA Seq 31 expression of 5P reagents and instruments required; to detect the expression of miR 99A 5p amount of material for the use of quantitative detection of PCR miR the expression of 5P 99A reagents and instruments required amount of detection of miR 99A and expression of 5P reagent and instrument required by RNA Seq. The use of miR 31 5p and miR 99A 5p to distinguish patients with active pulmonary tuberculosis and latent tuberculosis infection of AUC was greater than 0.8, the specificity is good, can be used to distinguish between tuberculosis and pulmonary tuberculosis latent infection activity.

【技术实现步骤摘要】
miR-31-5p与miR-99a-5p区分活动性肺结核和结核潜伏感染中的应用
本专利技术涉及生物
中，miR-31-5p与miR-99a-5p区分活动性肺结核和结核潜伏感染中的应用。
技术介绍
结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)感染引发的慢性传染性疾病，严重威胁人类健康。全国第五次结核病流行病学调查显示我国现有超过500万名成人活动性肺结核患者。成人感染结核分枝杆菌后，部分呈现带菌生存状态，并不会发展为结核病，称为结核潜伏感染者(Latenttuberculosisinfection,LTBI)；约5-10％的潜伏感染者会继续发展为活动性结核病(Activetuberculosis,ATB)。活动性肺结核是指结核病灶属于活动期,胸片上常有斑片状阴影或是结核空洞,或者播散病灶,说明结核分枝杆菌繁殖活跃,毒力强。国内各地区流行病学调查结果显示，基于γ-干扰素释放试验(IGRA)得出的结核分枝杆菌感染率大约在20％-30％之间，即全国约有3-4亿人为结核分枝杆菌感染者，数目庞大的无临床症状的结核潜伏感染者是活动性肺结核的重要来源。此外，由于结核潜伏感染的预防性治疗方案与活动性肺结核的抗痨治疗方案显著不同。因此，如何实现结核分枝杆菌潜伏感染者与活动性肺结核病者的早期鉴别诊断至关重要。常用的结核分枝杆菌感染诊断方法包括传统的结核菌素实验(TST)以及γ-干扰素释放试验(IGRAs)，TST方法容易受到卡介苗接种和非结核分枝杆菌的干扰，结核分枝杆菌感染诊断不够明确，更无法区别结核潜伏感染和活动性肺结核。新近推行的IGRAs方法，虽然能够检测结核分枝杆菌感染，但无法区分结核杆菌潜伏感染和活动性肺结核。目前活动性肺结核的诊断金标准仍然是经典的痰涂片染色显微镜下查找抗酸杆菌以及结核杆菌培养法，已有近百年的历史。这两种检测方法的敏感性均不高，痰涂片染色法的敏感性约30％，结核杆菌培养法的敏感性约60％。痰涂片染色法虽然可以当天出结果，但不能区分结核杆菌和非结核分枝杆菌，也不能区分MTB是活菌还是死菌。结核杆菌培养法的敏感性虽高一些，但耗时较长，即使快速培养也需要1个月的时间才能得到结果。另外，对于临床上大量的涂阴、菌阴的活动性肺结核患者，金标准检测方法的应用受到限制，加剧了诊断的困难，给及时治疗带来了阻力。近年来虽然陆续出现了一些先进的基于核酸扩增的分子生物学检测技术(如XpertMTB/RIFassay)，但由于受到仪器设备和诊断费用的限制，还无法全面推广。因此，现行的结核病诊断方法或辅助诊断手段都无法实现快速有效的鉴别诊断结核分枝杆菌潜伏感染和活动性肺结核，使得临床上面临严重的治疗延误以及过度治疗等问题。基于此，寻找新的活动性肺结核特异标志物，鉴别诊断结核分枝杆菌潜伏感染和活动性肺结核，已经成为结核病临床诊断中一项亟待解决的难题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者。本专利技术还提供了检测miR-31-5p或/和miR-99a-5p表达量的物质在制备区分或辅助区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者产品中的应用。上述应用中，所述检测miR-31-5p表达量的物质可为下述M1)或M2)：M1)利用定量PCR检测miR-31-5p表达量所需的试剂和/或仪器；M2)利用RNA-Seq检测miR-31-5p表达量所需的试剂和/或仪器；所述检测miR-99a-5p表达量的物质可为下述N1)或N2)：N1)利用定量PCR检测miR-99a-5p表达量所需的试剂和/或仪器；N2)利用RNA-Seq检测miR-99a-5p表达量所需的试剂和/或仪器。M1)可为包含针对miR-31-5p序列的DNA探针的AssayID*002279，N1)可为包含针对miR-99a-5p序列的DNA探针的AssayID*000435，AssayID*002279和AssayID*000435均为美国ABI公司产品。上述应用中，所述miR-31-5p表达量可为血液中miR-31-5p的表达量；所述miR-99a-5p表达量可为血液中miR-99a-5p的表达量。所述miR-31-5p表达量具体可为外周血单个核细胞中miR-31-5p的表达量；所述miR-99a-5p表达量为外周血单个核细胞中miR-99a-5p的表达量。所述M1)和M2)还均可包括数据处理装置1，所述数据处理装置1用于将来自待测对象的miR-31-5p的表达量转换为所述待测对象的诊断值，根据所述待测对象的诊断值确定所述待测对象是否为活动性肺结核患者或结核潜伏感染者。所述N1)和N2)还均可包括数据处理装置2，所述数据处理装置2用于将来自待测对象的miR-99a-5p的表达量转换为所述待测对象的诊断值，根据所述待测对象的诊断值确定所述待测对象是否为活动性肺结核患者或结核潜伏感染者。所述待测对象可为结核分枝杆菌感染者。本专利技术还提供了以检测miR-31-5p或/和miR-99a-5p作为标志物的区分或辅助区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者的物质在制备区分或辅助区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者产品中的应用。上述应用中，所述区分或辅助区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者的物质可为X1)或/和X2)：X1)M1)或M2)所述检测miR-31-5p表达量的物质；X2)N1)或N2)所述检测miR-99a-5p表达量的物质。本专利技术还提供了miR-31-5p或/和miR-99a-5p作为区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者的标志物在区分或辅助区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者中的应用。本专利技术还提供了区分或辅助区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者的物质，为X1)或/和X2)：X1)M1)或M2)所述检测miR-31-5p表达量的物质；X2)N1)或N2)所述检测miR-99a-5p表达量的物质。本专利技术还提供了非诊断目的的区分或辅助区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者的方法，包括检测待测对象miR-31-5p或/和miR-99a-5p的表达量，根据miR-31-5p或/和miR-99a-5p的表达量确定待测对象是活动性肺结核患者还是结核潜伏感染者。上述方法中，所述待测对象可为结核分枝杆菌感染者。所述miR-31-5p或/和miR-99a-5p表达量可为血液中miR-31-5p或/和miR-99a-5p的表达量。所述miR-31-5p或/和miR-99a-5p表达量具体可为外周血单个核细胞中miR-31-5p或/和miR-99a-5p的表达量。本专利技术中，所述活动性肺结核患者第一诊断为活动性肺结核(ICD-10：A15.001)，符合以下条件：具有活动性结核病临床症状、胸部X线有结核病变、痰培养阳性或连续两次以上痰涂片阳性。结核潜伏感染者可符合以下条件：无任何结核病临床症状，胸片无异常，结核菌素皮试TST硬结直径大于10mm，γ－干扰素释放试验IGRA检测阳性。以结核潜伏感染者为对照、活动性肺结核患者为疾病患者，miR-31-5p的表达量的曲线下面积AUC＝0.923。此时，判定为活动性肺结核患者的阈值为miR-31-5p的表达水平≤31.6506，敏感性为74.5％、本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测miR‑31‑5p或/和miR‑99a‑5p表达量的物质在制备区分或辅助区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测miR-31-5p或/和miR-99a-5p表达量的物质在制备区分或辅助区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测miR-31-5p表达量的物质为下述M1)或M2)：M1)利用定量PCR检测miR-31-5p表达量所需的试剂和/或仪器；M2)利用RNA-Seq检测miR-31-5p表达量所需的试剂和/或仪器；所述检测miR-99a-5p表达量的物质为下述N1)或N2)：N1)利用定量PCR检测miR-99a-5p表达量所需的试剂和/或仪器；N2)利用RNA-Seq检测miR-99a-5p表达量所需的试剂和/或仪器。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述miR-31-5p表达量为血液中miR-31-5p的表达量；所述miR-99a-5p表达量为血液中miR-99a-5p的表达量。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述miR-31-5p表达量为外周血单个核细胞中miR-31-5p的表达量；所述miR-99a-5p表达量为外周血单个核细胞中miR-99a-5p的表达量。5.以检测miR-31-5p或/和miR-99a-5p作为标志物的区分或辅助区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者的物质在制备区分或辅助区分活动性肺结核患者和结核潜伏感染者产品中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘丽萍，张宗德，贾红彦，孙会姗，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京胸科医院，北京市结核病胸部肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11