一种从甘草废渣中快速提取甘草素的方法技术

本发明专利技术属于中药提取领域，尤其涉及一种从甘草废渣中快速提取甘草素的方法。以碱提酸沉法提取甘草酸后的剩余废渣为原料，超声提取后，降温酶解；酶解液真空抽滤，滤液浓缩至干后，用乙醇溶解，得到浓缩液；将浓缩液注射于CHEETAH中高压快速制备液相色谱柱，分析色谱检测含甘草素浓度最大的馏分及前、后两侧共三个馏分合并，减压浓缩干燥后，得到高纯度甘草素产品。从甘草废渣中快速提取甘草素的方法，该方法操作简单、环保无污染、得到的产品纯度高。

Method for rapidly extracting glycyrrhizin from waste residue of licorice

The invention belongs to the field of traditional Chinese medicine extraction, in particular to a method for rapidly extracting glycyrrhizin from the waste residue of licorice. By alkali extraction and acid extraction of glycyrrhizic acid waste residue as raw material after precipitation, ultrasonic extraction, enzymolysis enzymolysis liquid cooling; vacuum filtration, the filtrate was concentrated to dryness and dissolved in alcohol, concentrated liquid; the concentrated liquid is injected into the high pressure rapid CHEETAH preparation liquid chromatography column chromatography analysis, including the maximum concentration of glycyrrhizin fraction and the anterior and posterior sides of a total of three fractions with vacuum concentration after drying to obtain high purity products of glycyrrhizin. This method is simple, environmental friendly, free of pollution and high purity.

【技术实现步骤摘要】
一种从甘草废渣中快速提取甘草素的方法
本专利技术属于中药提取领域，尤其涉及一种从甘草废渣中快速提取甘草素的方法。
技术介绍
甘草为豆科甘草属植物，其根茎是常用的中草药和经济植物。甘草中含有大量活性成分，具有抗炎、抗变态反应、抗溃疡、抗HIV病毒、抗SARS病毒、抗氧化和抗癌等药理活性；从甘草中提取活性成分甘草酸等萜类产品后，剩余物中主要含有黄酮类化合物，早期作为废渣丢弃。近年来，随着对中药的深入研究，人们发现黄酮类成分也具有重要的药理作用，而甘草黄酮类化合物中主要的活性成分有甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素等。甘草素是甘草苷的苷元，为白色针状晶体，分子式为C15H12O4，分子量256.25。据研究报道，甘草中甘草苷含量约为3.6%，而甘草素的含量仅为0.1%左右，有些甘草甚至检测不出该成分，从甘草中直接分离提取高纯度的甘草素十分困难，并且现有技术中公开的提取方法，均存在提取率较低的问题。例如，中国专利CN102112142A，用于提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法，是先用水或有机溶剂提取，配合酸水解提高甘草素含量，不仅提取效率低，而且产物中甘草素的含量较低；中国专利CN102391232B，从甘草中提取甘草素，使用聚酰胺和大孔树脂的混合柱，在一定程度上提高了甘草素的纯度，但纯化后需经两次8小时的析晶过程，才能得到甘草素产品，该操作过程比较繁琐，对工艺参数要求比较严格，不易控制。综上所述，研究一种可以高效率提取甘草素的提取方法，对于其药物应用十分有必要。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供从甘草废渣中快速提取甘草素的方法，该方法操作简单、环保无污染、得到的产品纯度高。为了实现上述目的，本专利技术提供的从甘草废渣中快速提取甘草素的方法，包括以下步骤。步骤1、以碱提酸沉法提取甘草酸后的剩余废渣为原料，加入5-10倍体积的蒸馏水，混合均匀后，90℃条件下超声提取2小时；降温至50-60℃后加入原料重量的2-5%的纤维素酶酶解。步骤2、将酶解液真空抽滤，取滤渣重复步骤1操作两次，将酶解液真空抽滤；合并三次抽滤得到的滤液，浓缩至干后，用1-2倍体积的95%乙醇溶解两次，得到浓缩液。步骤3、将浓缩液注射于CHEETAH中高压快速制备液相色谱柱，该制备液相色谱配有二元溶剂混合系统、监测系统和馏分自动收集系统，可在不超过10Mpa压力下操作，洗脱流速设定范围为0-100mL/min；本专利技术所用色谱柱内填充YWGC18和MCI混合固定相，进样体积为3.5-7mL，设定制备色谱仪的检测波长为276nm，洗脱流速5mL/min，洗脱流动相为30%-70%乙醇溶剂，每20分钟自动收集一个馏分，将通过分析色谱检测含甘草素浓度最大的馏分及前、后两侧共三个馏分合并，减压浓缩在60℃下干燥30min-1h后，得到高纯度甘草素产品。所述步骤1中酶解得温度为50-60℃，酶解时间为4小时。所述步骤2中浓缩为真空旋转蒸发浓缩，浓缩温度为60℃。所述步骤3中色谱柱的规格为40g，结构为上粗下细台柱型结构；所述的YWGC18和MCI混合固定相为两种填料顺序填充至色谱柱，体积比为1:2-4，其中YWGC18填料的颗粒粒径为15μm，MCI颗粒粒径为10μm。所述的顺序填充是指先填充YWGC18固定相，再填充MCI固定相，且两种固定相的体积比为1:2或1:3或1:4。本专利技术的有益效果。本专利技术从提取甘草酸剩余废渣中提取甘草素，不仅避免了原料资源的浪费，而且甘草总黄酮得到了富集，更有利于利用酶解和色谱分离方法，得到更多具有更高纯度的甘草素产品；本专利技术使用碱提酸沉法提取甘草酸后的剩余废渣为原料，提高了甘草资源的利用率，碱提酸沉法提取甘草酸及萜类等比较彻底，得到的总黄酮含量更高，也更利于制备甘草素，并且如前所述从甘草中直接分离提取高纯度的甘草素十分困难，如果直接以甘草为原料进行提取，杂质含量过高，色谱分离中容易产生过载效应和谱峰重叠现象，很难得到具有一定质量和较高纯度的甘草素产品；提取和制备过程中使用水-乙醇为溶剂，并且严格控制乙醇的用量，避免了诸如甲醇、三氯甲烷等毒性有机试剂的应用，工艺绿色，无有机溶剂残留，属于环保型提取方法；本专利技术采用纤维素酶对原料进行酶解，使得甘草总黄酮中的苷类水解生成苷元甘草素，因而甘草素含量大大提高，从原料含量的3%提高到30%，降低了甘草素分离纯化的难度。本专利技术在提取过程中在CHEETAH中高压快速纯化制备色谱仪器，采用成熟的工业部件，全自动的软件控制，操作人员只需要输入建立的方法，系统自动实现从溶剂注入到馏分收集，制备过程自动化程度高，直接提高了提取效率。本专利技术经快速制备得到的甘草素产品纯度高（90%-100%），最高可制得甘草素纯品。色谱柱采用顺序混合制备填料，相比完全采用C18固定相，生产成本降低了1/3，甘草素的纯度提高了近1.2倍；而相比两种填料完全混合后填充色谱柱再进行分离纯化，甘草素的纯度提高超过1.5倍，同时该工艺简单，可实现大规模生产。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例1。取100g提取甘草酸后的剩余废渣原料，加入5倍量蒸馏水，混匀，90℃超声提取2小时，降温至50℃，加入5%重量的纤维素酶酶解，酶解4小时。将酶解液真空抽滤，滤渣重复上述操作两次，合并滤液，在60℃下真空旋转蒸发浓缩至干，用少量95%乙醇溶解。取溶解液4mL注射入CHEETAH制备色谱仪的色谱柱端口，色谱柱内固定相是顺序填充的体积比为1:4的YWGC18和MCI混合填料。设定制备检测波长为276nm，流动相流速5mL/min，用30%乙醇水流动相洗脱，收集目标馏分，在60℃下减压浓缩得纯化后甘草素产品。甘草素纯度为95.4%。实施例2。取100g提取甘草酸后的剩余废渣原料，加入6倍量蒸馏水，混匀，90℃超声提取2小时，降温至50℃，加入5%重量的纤维素酶酶解，酶解4小时。将酶解液真空抽滤，滤渣重复上述操作两次，合并滤液，在60℃下真空旋转蒸发浓缩至干，用少量95%乙醇溶解。取溶解液4mL注射入CHEETAH制备色谱仪的色谱柱端口，色谱柱内固定相是顺序填充的体积比为1:4的YWGC18和MCI混合填料。设定制备检测波长为276nm，流动相流速5mL/min，用45%乙醇水流动相洗脱，收集目标馏分，在60℃下减压浓缩得纯化后甘草素产品。甘草素纯度为92.1%。实施例3。取100g提取甘草酸后的剩余废渣原料，加入5倍量蒸馏水，混匀，90℃超声提取2小时，降温至50℃，加入5%重量的纤维素酶酶解，酶解4小时。将酶解液真空抽滤，滤渣重复上述操作两次，合并滤液，在60℃下真空旋转蒸发浓缩至干，用少量95%乙醇溶解。取溶解液3.5mL注射入CHEETAH制备色谱仪的色谱柱端口，色谱柱内固定相是顺序填充的体积比为1:2的YWGC18和MCI混合填料。设定制备检测波长为276nm，流动相流速5mL/min，用30%乙醇水流动相洗脱，收集目标馏分，在60℃下减压浓缩得纯化后甘草素产品。甘草素纯度为89.4%。实施例4。取100g提取甘草酸后的剩余废渣原料，加入5倍量蒸馏水，混匀，90℃超声提取2小时，降温至50℃，加入5%重量的纤维素酶酶解，酶解4小时。将酶解液真空抽滤，滤渣重复上述操作两次，合并滤液，在60℃下真空旋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从甘草废渣中快速提取甘草素的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、超声提取和酶解处理；步骤2、酶解液真空抽滤并浓缩；步骤3、将浓缩液注射于CHEETAH中高压快速制备液相色谱柱，将通过分析色谱检测含甘草素浓度最大的馏分及前、后两侧共三个馏分合并，减压浓缩在60℃下干燥30min‑1h后，得到高纯度甘草素产品。

【技术特征摘要】
1.一种从甘草废渣中快速提取甘草素的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、超声提取和酶解处理；步骤2、酶解液真空抽滤并浓缩；步骤3、将浓缩液注射于CHEETAH中高压快速制备液相色谱柱，将通过分析色谱检测含甘草素浓度最大的馏分及前、后两侧共三个馏分合并，减压浓缩在60℃下干燥30min-1h后，得到高纯度甘草素产品。2.如权利要求1所述的从甘草废渣中快速提取甘草素的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、以酸提酸沉法提取甘草酸后的剩余废渣为原料，加入5-10倍体积的蒸馏水，混合均匀后，90℃条件下超声提取2小时；降温至50-60℃后加入原料重量的2-5%的纤维素酶酶解；步骤2、将酶解液真空抽滤，取滤渣重复步骤1操作两次，将酶解液真空抽滤；合并三次抽滤得到的滤液，浓缩至干后，用1-2倍的95%乙醇溶解两次，得到浓缩液；步骤3、将浓缩液注射于CHEETAH中高压快速制备液相色谱柱，该制备液相色谱配有二元溶剂混合系统、监测系统和馏分自动收集系统，可在不超过10pa压力下操作，洗脱流速设定范围为0-100mL/min；所用色谱柱内填充YWGC1...

【专利技术属性】
技术研发人员：丛景香，王绍艳，张伟，唐晓丹，王现利，
申请(专利权)人：辽宁科技大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21