一种马钱子总碱的提取及纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种马钱子总碱的提取及纯化方法，属于药物的技术领域。该方法包括：采用 Box‑Behnken 响应面法设计优化回流提取工艺，得到液料比、提取时间、pH值等参数的回归模型，在据此分析得到的最佳提取工艺条件下，将马钱子粗粉经酸水回流提取、浓缩得到膏状提取物，再通过大孔树脂柱层析分离方法进行富集纯化。本发明专利技术的有益效果是：通过使用本发明专利技术的方法，可以很好的预测并优化酸水回流提取工艺，简便快速地从马钱子中提取并分离纯化马钱子总碱，提高生物总碱的富集量和纯度。

Method for extracting and purifying total alkaloids of a horse's money

The invention discloses a method for extracting and purifying a total base of a horse's money, belonging to the technical field of drugs. The method includes: using Box Behnken response surface method design optimization of the extraction process, the regression model of liquid-solid ratio, extraction time, pH value and other parameters in analyzing the optimal extraction conditions obtained, the coarse powder Strychnos by the acid water reflux extraction, concentrated paste extraction, enrichment and purification the separation method of macroporous resin column chromatography. The beneficial effect of the invention is: using the method of the invention can well predict and optimize the acid water reflux extraction process, simple and rapid extraction and purification from Strychnos nux vomica alkaloids, improve the enrichment of quantity and purity of total alkaloids.

【技术实现步骤摘要】
一种马钱子总碱的提取及纯化方法
本专利技术涉及一种马钱子总碱的提取及纯化方法，属于药物的

技术介绍
马钱子为马钱科植物马钱（Strychnosnux-vomicaL.）或云南马钱（StrychnospierrianaA.W.Hill）的干燥成熟种子，主要活性成分为生物碱类，含量为生药的1.5%~5%，其中士的宁和马钱子碱约占总碱量的80%。在我国马钱子作为药用具有悠久的历史，其性苦味温，归肝脾经，具有通络止痛、散结消肿的功效，可用于风湿顽痹、跌打损伤、小儿麻痹后遗症、类风湿性关节炎、各种神经系统疾病、癌症、慢性支气管炎和慢性再生障碍性贫血等方面的治疗。但马钱子活性成分作为一个中成药用于临床治疗上述各类病症的数据还很少，主要是因为从中药马钱子分离出各活性成分很困难，所得的提取物组成复杂，难以就马钱子活性成分定性定量研究以便进行临床观察。因此，利用现代分离技术把生物碱从天然产物中分离出来并对其进行纯化，开发其药用价值，提高天然产物的经济和社会效益均具有非常重要的意义。目前关于生物碱的提取方法主要有回流法、微波法、超声法、超临界提取法等，其中回流提取法出膏量最大，单位质量药材中提取的生物总碱量也最多。回流提取法可采用的提取溶剂一般有水、乙醇、酸性乙醇、50%乙醇、酸水、氨性氯仿等，实验研究表明，采用酸水提取法得到的提取物总量以及马钱子碱和士的宁碱单体量均高于其他溶剂。因而研究酸水回流提取马钱子总碱的工艺条件及其优化很有必要。前期文献调研发现，马钱子提取工艺优化主要以单因素考察，正交设计为主，对多因素的关联研究较少。传统的柱层析色谱分离方法采用硅胶柱分离纯化马钱子总碱，有机溶剂消耗量大，且分离周期长，洗脱得到的总碱量较少，无法满足高效快速制备纯品的要求。离子交换树脂预处理过程复杂，洗脱率也不理想。大孔吸附分离技术是一种中药深加工技术，具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、速度快、选择性好，解吸条件温和，再生处理方便，使用周期长，易构成闭路循环，节省费用等诸多优点，已被广泛用于中草药有效成分的分离纯化。据此，本专利技术提供了一种简便快速地从马钱子中提取并分离纯化马钱子总碱，提高生物总碱的富集量和纯度的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种马钱子总碱的提取及纯化方法，包括如下步骤：（1）通过Box-Behnken响应面法设计优化酸水回流提取马钱子总碱工艺，得到液料比、提取时间、pH值等参数的回归模型，并据此分析预测最佳的提取工艺条件；（2）称取马钱子制品，用粉碎机粉碎，将粗粉装入圆底烧瓶，以6-12倍量加入酸水溶液，在步骤（1）得到的最佳工艺条件下加热回流1-2h，过滤提取液，浓缩成膏；（3）将步骤（2）中所得的膏状提取物粉碎研磨，搅拌溶解于蒸馏水中，倒入装填有大孔吸附树脂的玻璃柱内，用洗脱液进行洗脱，洗脱4倍柱体积，洗脱液流速为1.0ml/min，浓缩烘干，得到马钱子总碱的纯化物。回流提取工艺中所用的酸水pH=1-3，优选盐酸溶液。以马钱子碱含有量的40%、士的宁含有量的60%为综合效应值，得到液料比、提取时间、pH值等参数的回归模型为：相关系数r=0.9257，整体模型达到显著水平(P<0.05)。由上述模型得到的最佳提取工艺条件为：酸水与制马钱子最优液料比为10：1，提取时间1.5h，酸水pH值为1。所用大孔吸附树脂型号为LSA-10、HPD-500、AB-8、D101，优选AB-8型大孔吸附树脂。分离纯化过程中使用的洗脱液为乙醇溶液，优选乙醇浓度为30%-50%的溶液。本专利技术的有益效果是：通过Box-Behnken响应面法关联多因素模型，能够很好的预测并优化酸水回流提取工艺，得到最佳的提取工艺条件，提高马钱子总碱的出膏量；同时采用大孔吸附树脂柱和合适浓度的洗脱液，能够最大限度地富集并分离纯化马钱子总碱。通过本专利技术的方法，可简便快速地从马钱子中提取并分离纯化马钱子总碱，提高马钱子总碱的富集总量和纯度。附图说明图1至图3是具体实施方式中采用Box-Behnken响应面法设计优化回流提取工艺，得到液料比、提取时间、pH值等参数的回归模型，采用Design-ExpertV.8.0.6软件，根据回归方程的分析结果作出的综合效应随各因素变化的效应面图。具体实施方式（一）马钱子提取工艺的确定1.马钱子药材来源的确定（1）对照品的制备：精密称取对照品马钱子碱1.55mg，士的宁1.19mg，分别置于10ml容量瓶内，加入甲醇定容。（2）供试品的制备：精密称取生马钱子和制马钱子粗粉各1.5g，置于100ml锥形瓶内，精密加入50ml的甲醇-水-浓盐酸（50:50:1），称定重量，超声提取30min，取出，放凉，再称重补足重量，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品。（3）色谱条件：色谱柱:ODS250mm×4.6mm，5μm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；流动相：0.05%磷酸溶液（A）：乙腈（B）=12:88（4）测量结果如下：表1马钱子药材测量结果由此可以得出制马钱子中生物碱的含量高于生马钱子中的含量，之后的实验中均选取制马钱子进行实验。2.提取方法的确定（1）回流法：称取马钱子制品100g，用粉碎机粉碎2~3s，将粗粉装入1000ml圆底烧瓶并加入600ml的蒸馏水，经过回流装置安装，打开电热套回流提取1h，取蒸发皿洗净烘干，贴上标签水提，然后称重分别为234.348g，将所得提取液抽滤倒入蒸发皿内，并置于水浴锅上设置温度为99℃进行浓缩，当溶液挥干至膏状后，放入烘箱内烘干，取出放冷之后称重为230.322g。（2）超声辅助提取法：称取马钱子制品100g，用粉碎机粉碎2~3s，至1000ml平底烧瓶中，加入50%乙醇600ml，至超声仪内，每次20min，间隔5min共三次1h，取出静置，进行抽滤，浓缩成膏重量为5.993g。（3）微波辅助提取法：称取马钱子制品100g，用粉碎机粉碎2~3s，至900ml的烧杯中，加入600nl蒸馏水，用保鲜膜盖住扎孔。放入微波炉中火，每次提取3min共10次30min。抽（4）超临界提取法：称取制马钱子和生马钱子粗粉各200g。检查柱子是否干净并进行装柱，一次约40g粗粉，按照超临界CO2萃取仪正规操作流程一次打开各个机器，装柱，检查是否漏气，设定温度为79℃，压力为34.47MPa，CO2静态萃取30min，动态萃取30min，生马钱子和制马钱子各萃取约120g。（5）对照品的制备：精密称取对照品士的宁2.13mg，马钱子碱1.73mg，加氯仿溶解，并定容至10ml。（6）供试品的制备：精密称取他们的提取物0.5g，放入容量瓶内加入约40ml的甲醇-水-浓盐酸（50:50:1）溶剂超声30min，取出静置放凉定容至50ml。（7）色谱条件：色谱柱：ODS250mm×4.6mm，5μm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；流动相：采用0.05%磷酸溶液（A）：乙腈（B）为12:88。（8）测定结果如下：表2不同提取工艺测量结果由上述结果可以看出，加热回流提取的出膏量最大，所含马钱子碱和士的宁总量也最高，故选择加热回流法提取马钱子。3.提取溶剂的确定（1）水提取:称取马钱子粗粉100g，放入1000ml圆底烧瓶内，加入600本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种马钱子总碱的提取及纯化方法，其特征在于，主要包括以下步骤：（1）通过 Box‑Behnken 响应面法设计优化酸水回流提取马钱子总碱工艺，得到液料比、提取时间、pH值等参数的回归模型，并据此分析预测最佳的提取工艺条件；（2）称取马钱子制品，用粉碎机粉碎，将粗粉装入圆底烧瓶，以6‑12倍量加入酸水溶液，在步骤（1）得到的最佳工艺条件下加热回流1‑2h，过滤提取液，浓缩成膏；（3）将步骤（2）中所得的膏状提取物粉碎研磨，搅拌溶解于蒸馏水中，倒入装填有大孔吸附树脂的玻璃柱内，用洗脱液进行洗脱，洗脱4倍柱体积，洗脱液流速为1. 0ml/min，浓缩烘干，得到马钱子总碱的纯化物。

【技术特征摘要】
1.一种马钱子总碱的提取及纯化方法，其特征在于，主要包括以下步骤：（1）通过Box-Behnken响应面法设计优化酸水回流提取马钱子总碱工艺，得到液料比、提取时间、pH值等参数的回归模型，并据此分析预测最佳的提取工艺条件；（2）称取马钱子制品，用粉碎机粉碎，将粗粉装入圆底烧瓶，以6-12倍量加入酸水溶液，在步骤（1）得到的最佳工艺条件下加热回流1-2h，过滤提取液，浓缩成膏；（3）将步骤（2）中所得的膏状提取物粉碎研磨，搅拌溶解于蒸馏水中，倒入装填有大孔吸附树脂的玻璃柱内，用洗脱液进行洗脱，洗脱4倍柱体积，洗脱液流速为1.0ml/min，浓缩烘干，得到马钱子总碱的纯化物。2.根据权利要求1中所述的马钱子总碱的提取及纯化方法，其特征在于，所述酸水pH为1-3，优选盐酸溶液。3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵建平，任桦，李耀平，冯玛莉，赵怡蕊，仝立国，王泽，李跃进，
申请(专利权)人：山西中医学院中西医结合医院，
类型：发明
国别省市：山西,14