一种白毛夏枯草有效物质提取方法技术

本发明专利技术属于化学提取分离技术领域。目的是提供一种高效的白毛夏枯草有效物质提取方法。本发明专利技术所采用的技术方案是：提取方法包括白毛夏枯草的预处理、微波灭菌、溶剂提取、分离纯化。其中，预处理包括挑选药材、抢水洗和切段；微波灭菌能够对药材进行彻底清洁并破坏植物细胞壁；分离纯化分别采用柱层析法、大孔树脂法和高效液相色谱法对木犀草素、克罗烷二萜和杯苋甾酮三种成分进行分离纯化。本发明专利技术成本低廉、效率高，能够充分提取白毛夏枯草中的多种有效成分。

Method for extracting effective substance of Prunella vulgaris

The invention belongs to the technical field of chemical extraction and separation. The aim is to provide an efficient method for extracting effective substances from Prunella vulgaris. The technical proposal of the invention is that the extraction method comprises pretreatment of white Prunella vulgaris, microwave sterilization, solvent extraction, separation and purification. Among them, the pretreatment including the selection of herbs, grab the washed and cut section; microwave sterilization can be cleaned thoroughly and destroy the cell walls of plants for medicinal materials; separation and purification by column chromatography, macroporous resin method and HPLC method of luteolin, two neoclerodane diterpenes and cyasterone three compounds were separated and purified. The invention has the advantages of low cost and high efficiency, and can fully extract various effective components in the Prunella vulgaris.

【技术实现步骤摘要】
一种白毛夏枯草有效物质提取方法
本专利技术属于化学提取分离
，具体涉及一种白毛夏枯草有效物质提取方法。
技术介绍
白毛夏枯草，又名金疮小草、筋骨草，是唇形科植物筋骨草的全株。药味苦甘，药性偏寒，具有止咳化痰、清热、凉血、消肿、解毒等作用，能够治疗气管炎、吐血、赤痢、淋病、咽喉肿痛、疔疮、痈肿等。生长于路旁、河岸、山脚下、荒地上，分布几遍全国，是一种常见的中草药。白毛夏枯草含有新克罗烷又萜类、黄酮类和甾体类等化学成分，从中能够提取出木犀草素、克罗烷二萜和杯苋甾酮等有效成分，但由于缺乏高效的提取、纯化方法，这种资源丰富的中药材一直没有得到充分的利用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高效的白毛夏枯草有效物质提取方法。为实现上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种白毛夏枯草有效物质提取方法，包括白毛夏枯草的预处理、微波灭菌、溶剂提取、分离纯化，其具体步骤如下：预处理：挑选9～10月采收的新鲜白毛夏枯草，以茎细、质柔韧且四棱明显者为佳；抢水洗：将白毛夏枯草投入清水，经快速洗涤后立即取出；切段：将清洗完成的白毛夏枯草切为0.6～0.9cm的小段，晒至含水量为7％～9％。微波灭菌：放入微波灭菌机中，摊放厚度为4～6cm，灭菌完成后使之自然冷却，待温度降至室温后进行低温粉碎。溶剂提取：在提取溶剂中加入十二烷基磺酸钠，将粉碎后的药材在提取溶剂中浸泡40～50min；对药材和溶剂进行超声处理后，加热回流并减压抽滤，滤液浓缩得到提取浸膏。分离纯化：用水溶解提取浸膏，先后用丁酮、醋酸丁酯和石油醚进行萃取，用丁酮对水溶液进行萃取的体积比为2～4：1，用醋酸丁酯和石油醚对水溶液进行萃取的体积比例为1:1；然后将丁酮部分萃取物浓缩，过300～400目硅胶柱，用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂进行洗脱，得到高纯度克罗烷二萜；将醋酸丁酯部分萃取物浓缩后过大孔树脂吸附纯化得到木犀草素；将萃取后的水溶液浓缩干燥后用甲醇溶解，经高效液相色谱柱纯化得到杯苋甾酮。优选的：所述的微波灭菌的微波频率为2000～2500MHz，时间为40～60s。优选的：所述的低温粉碎的温度为-50～-80℃，粉碎粒度为100～200目。优选的：所述的提取溶剂为体积分数为55％～65％的乙醇，提取溶剂与药材的质量比为5～8:1。优选的：所述的提取溶剂中，十二烷基磺酸钠的质量百分数为0.9％～1.2％。优选的：所述的超声功率为400～500W，时间为120s～180s。优选的：所述的加热回流选用体积分数为60％的乙醇，在温度65～80℃条件下回流3次，每次时间2～2.5h。优选的：所述的丁酮部分洗脱过柱洗脱剂比例为乙酸乙酯：正己烷＝7:5。优选的：所述的大孔树脂选用AB-8，用无水乙醇溶解醋酸丁酯部分浓缩物上样，吸附条件为5～14℃，PH保持在6，解吸条件为25～33℃，解吸剂体积分数为70％的乙醇。优选的：所述的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合相色谱柱，流动相乙腈：水比例为22:78，流速：1ml/min。本专利技术具有以下有益效果：成本低廉、效率高，能够充分提取白毛夏枯草中的多种有效成分。具体来说，本专利技术通过研究白毛夏枯草中的多种有效成分的物理化学性质，结合微波灭菌等方法，既能够彻底清洁药材，又能破碎植物细胞壁，提高了提取效率，低温粉碎技术能够地保留白毛夏枯草中的有效成分，避免其变质。且白毛夏枯草经过微波灭菌、低温粉碎和加热回流，其有效成分在加热回流的升温过程中快速溶出，使提取效率更高。同时，本专利技术根据多种有效成分的极性、溶解度等不同分别采用不同的萃取剂进行萃取分离和纯化，从而顺利提取出木犀草素、克罗烷二萜和杯苋甾酮。由于白毛夏枯草资源丰富，能够有效降低提取成本，且本专利技术选用的溶剂均为常用溶剂，提取溶剂在提取液浓缩后可回收再利用，提高溶剂的利用率，进一步降低了生产成本。具体实施方式下面具体提供优选的实施例，以使本领域技术人员更加清楚本专利技术的技术方案和效果。实施例一一种白毛夏枯草有效物质提取方法，包括白毛夏枯草的预处理、微波灭菌、溶剂提取、分离纯化，其具体步骤如下：预处理：挑选9～10月采收的新鲜白毛夏枯草6kg，以茎细、质柔韧且四棱明显者为佳。抢水洗：将白毛夏枯草投入清水，经快速洗涤后立即取出，这样可以避免药材中的有效成分溶解在水中而随水流失。切段：将清洗完成的白毛夏枯草切为0.6～0.9cm的小段，晒至含水量为8％，以便于后续加工。微波灭菌：放入微波灭菌机中，摊放厚度为4～6cm，在微波频率为2200MHz下灭菌时间为50s，灭菌完成后使之自然冷却，待温度降至室温后进行低温粉碎，在温度为-50～-80℃的条件下，将药材粉碎为粒度100～200目的颗粒。溶剂提取：用体积分数为60％的乙醇作为提取溶剂，在41L的提取溶剂中加入十二烷基磺酸钠360g，混合均匀。将粉碎后的药材在提取溶剂中浸泡45min，然后对药材和溶剂进行超声处理，超声功率为450W，时间为150s。再用体积分数为60％的乙醇对其加热回流，在温度65～80℃条件下回流3次，每次时间135min，对提取液减压抽滤，滤液浓缩得到提取浸膏，浓缩过程中回收的溶剂通过调节浓度后可再次使用。分离纯化：用水溶解提取浸膏，先后用丁酮、水饱和的正丁醇和石油醚进行萃取，用丁酮对水溶液进行萃取的体积比为3：1，由于丁酮溶解于4倍的水，因此要使丁酮的用量在水的2倍以上。用水饱和的正丁醇对水溶液进行萃取的体积比例为2:1，用石油醚对水溶液进行萃取的体积比例为1:1。然后将丁酮部分萃取物浓缩，过300～400目硅胶柱，用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂进行洗脱，洗脱剂比例为乙酸乙酯：正己烷＝7:5，得到纯度为85％的克罗烷二萜93g。将正丁醇部分萃取物浓缩后过大孔树脂吸附纯化，大孔树脂选用AB-8，用无水乙醇溶解正丁醇部分浓缩物上样，吸附条件为5～14℃，PH保持在6，解吸条件为25～33℃，解吸剂体积分数为70％的乙醇，得到木犀草素74g。将萃取后的水溶液浓缩干燥后用甲醇溶解，用高效液相色谱法纯化，色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合相色谱柱，流动相乙腈：水比例为22:78，流速：1ml/min，收集245nm时的流出液，浓缩得到杯苋甾酮112g。实施例二一种白毛夏枯草有效物质提取方法，包括白毛夏枯草的预处理、微波灭菌、溶剂提取、分离纯化，其具体步骤如下：预处理：挑选9～10月采收的新鲜白毛夏枯草5kg，以茎细、质柔韧且四棱明显者为佳。抢水洗：将白毛夏枯草投入清水，经快速洗涤后立即取出。切段：将清洗完成的白毛夏枯草切为0.6～0.9cm的小段，晒至含水量为7％，以便于后续加工。微波灭菌：放入微波灭菌机中，摊放厚度为4cm，在微波频率为2000MHz下灭菌时间为40s，灭菌完成后使之自然冷却，待温度降至室温后进行低温粉碎，在温度为-50～-80℃的条件下，将药材粉碎为粒度100～200目的颗粒。溶剂提取：用体积分数为55％的乙醇作为提取溶剂，在28L的提取溶剂中加入十二烷基磺酸钠225g，混合均匀。将粉碎后的药材在提取溶剂中浸泡40min，然后对药材和溶剂进行超声处理，超声功率为400W，时间为120s。再用体积分数为60％的乙醇对其加热回流，在温度65～80℃条件下回流3次，每次时间120min，对提取液减压抽滤，滤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白毛夏枯草有效物质提取方法，其特征在于：包括白毛夏枯草的预处理、微波灭菌、溶剂提取、分离纯化，其具体步骤如下：预处理：挑选9～10月采收的新鲜白毛夏枯草，以茎细、质柔韧且四棱明显者为佳；抢水洗：将白毛夏枯草投入清水，经快速洗涤后立即取出；切段：将清洗完成的白毛夏枯草切为0.6～0.9cm的小段，晒至含水量为7％～9％；微波灭菌：放入微波灭菌机中，摊放厚度为4～6cm，灭菌完成后使之自然冷却，待温度降至室温后进行低温粉碎；溶剂提取：在提取溶剂中加入十二烷基磺酸钠，将粉碎后的药材在提取溶剂中浸泡40～50min；对药材和溶剂进行超声处理后，加热回流并减压抽滤，滤液浓缩得到提取浸膏；分离纯化：用水溶解提取浸膏，先后用丁酮、醋酸丁酯和石油醚进行萃取，用丁酮对水溶液进行萃取的体积比为2～4：1，用醋酸丁酯和石油醚对水溶液进行萃取的体积比例为1:1；然后将丁酮部分萃取物浓缩，过300～400目硅胶柱，用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂进行洗脱，得到高纯度克罗烷二萜；将醋酸丁酯部分萃取物浓缩后过大孔树脂吸附纯化得到木犀草素；将萃取后的水溶液浓缩干燥后用甲醇溶解，经高效液相色谱柱纯化得到杯苋甾酮。

【技术特征摘要】
1.一种白毛夏枯草有效物质提取方法，其特征在于：包括白毛夏枯草的预处理、微波灭菌、溶剂提取、分离纯化，其具体步骤如下：预处理：挑选9～10月采收的新鲜白毛夏枯草，以茎细、质柔韧且四棱明显者为佳；抢水洗：将白毛夏枯草投入清水，经快速洗涤后立即取出；切段：将清洗完成的白毛夏枯草切为0.6～0.9cm的小段，晒至含水量为7％～9％；微波灭菌：放入微波灭菌机中，摊放厚度为4～6cm，灭菌完成后使之自然冷却，待温度降至室温后进行低温粉碎；溶剂提取：在提取溶剂中加入十二烷基磺酸钠，将粉碎后的药材在提取溶剂中浸泡40～50min；对药材和溶剂进行超声处理后，加热回流并减压抽滤，滤液浓缩得到提取浸膏；分离纯化：用水溶解提取浸膏，先后用丁酮、醋酸丁酯和石油醚进行萃取，用丁酮对水溶液进行萃取的体积比为2～4：1，用醋酸丁酯和石油醚对水溶液进行萃取的体积比例为1:1；然后将丁酮部分萃取物浓缩，过300～400目硅胶柱，用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂进行洗脱，得到高纯度克罗烷二萜；将醋酸丁酯部分萃取物浓缩后过大孔树脂吸附纯化得到木犀草素；将萃取后的水溶液浓缩干燥后用甲醇溶解，经高效液相色谱柱纯化得到杯苋甾酮。2.根据权利要求1所述的白毛夏枯草有效物质提取方法，其特征在于：所述的微波灭菌的微波频率为2000～2500MHz，时间为40～60s。3.根据权利要求1所述的白毛夏枯草有效物...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪培钧，程传付，汪海晖，许建国，汪世元，
申请(专利权)人：黄山市天目药业有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34