一种高效筛选马铃薯对根结线虫的抗性方法技术

一种高效筛选马铃薯对根结线虫的抗性方法，它涉及一种马铃薯对根结线虫的抗性评价方法。为了解决马铃薯资源材料和栽培品种对根结线虫抗感性筛选没有一套简单高效的评价方法的问题。方法：首先培养马铃薯试管苗，待马铃薯试管苗长到6‑7片叶时将试管苗直接移栽到营养钵中，培养60天后接种根结线虫。线虫大约完成一个生活周期后调查植株上卵块数量，卵量和虫瘿指数，块茎上雌虫数量，根据评价指标判定马铃薯植株对根结线虫的抗感情况。本方法节约空间和基质材料，根据实际情况可同时评价大量资源材料，形成一套简单有效的评价方法，而且鉴定的高感材料可以作为今后研究的感病对照。

A highly efficient method for screening Potato Resistance to root knot nematodes

The invention relates to a method for efficiently screening Potato Resistance to root knot nematodes, which relates to a method for evaluating the resistance of potato to root knot nematodes. In order to solve the problems of Potato Germplasm and cultivars, there is no simple and efficient method for evaluating the resistance of root knot nematode. Methods: first, cultivation of potato plantlets, the potato seedlings grow to 6 7 leaves when the plantlets transplanting directly into the pots, after 60 days of culture with root knot nematodes. Investigation of plant nematode egg masses number about to complete a life cycle, eggs and gall index, tuber female number, according to the evaluation index of potato plants of resistant and susceptible to root knot nematode. This method can save the space and the matrix material, and evaluation of a large number of materials according to the actual situation, forming a set of simple and effective evaluation method, and high sense of identification of materials can be used as the future research of disease control.

【技术实现步骤摘要】
一种高效筛选马铃薯对根结线虫的抗性方法
本专利技术涉及一种马铃薯对根结线虫抗性评价方法。
技术介绍
随着马铃薯主粮化战略的提出，市场对马铃薯的需求量越来越大，马铃薯种植面积也在扩大。根结线虫(Meloidogynespp.)是一种重要植物病害，寄主范围广泛，包括马铃薯在内的许多种类蔬菜，由于国内蔬菜大量种植，导致根结线虫迅速传播，根结线虫在南方发生尤其严重，目前根结线虫病害的发生已扩展到东北，势必严重影响马铃薯的生产，而且这种病害一旦发现，几乎没有根治的可能。目前培育抗病品种是防治该病的重要手段，但是现有的马铃薯栽培品种和资源材料几乎没有明确对根结线虫的抗感性，因而在马铃薯的引种和育种中存在盲目性。国内没有马铃薯对根结线虫抗感筛选的文章，也没有相关的筛选标准。只有吴庆丽等(2006)，做了不同光温条件对马铃薯繁殖根结线虫效果的影响和马铃薯培养根结线虫效果的研究试验，马铃薯材料是块茎，种植方式是用140cm×140cm的花盆，这种试验方法对于处理少的试验可行，不适于同时开展大量材料对根结线虫抗感筛选。然而我国现有的马铃薯资源材料主要的保存形式是马铃薯试管苗，有些重要的资源材料没有保存块茎，因此开展我国马铃薯资源材料对根结线虫的抗感评价需要建立一套用马铃薯试管苗为试验材料，并且有相应的栽培管理方法和评价标准的评价体系，并且确保试验方法准确、简单可行。2003年法国Berthou做了马铃薯群体对南方根结线虫抗性筛选，筛选方法是将实生籽种在400cc的营养钵中，接种2龄幼虫10天后，用品红染色，只要2龄幼虫在根内发育就认为是感病品种，但线虫在马铃薯材料根上的繁殖情况不清楚，此外目前国内马铃薯资源材料对根结线虫的抗感没有报道。综上所述目前缺少一种简单可行的同时进行大量的马铃薯材料对根结线虫抗性筛选方法。
技术实现思路
本专利技术的目的要解决的问题：国内外马铃薯资源材料和栽培品种对根结线虫抗感性筛选没有一套简单高效的评价方法。本专利技术的一种高效筛选马铃薯资源材料对根结线虫的抗性方法，它是按照以下步骤进行的：首先在组培室内扩繁马铃薯试管苗，将培养的株高和茎粗都一致的试管苗直接移栽到营养钵内，然后每周浇一次营养液，培养60天后接种根结线虫；根结线虫完成一个生活周期后根据植株的评价结果以及块茎的评价结果，判定马铃薯材料对根结线虫的抗感性；所述的植株的评价结果是依据马铃薯根上的卵块数量、卵量和虫瘿指数进行评价：1)卵块数量评价级别：0级：没有卵块；1级：1-2个卵块；2级：3-10个卵块；3级：11-30个卵块；4级：31-100个卵块；5级：≥100个卵块；抗性评价：0-3级为抗病材料，≥4级为感病材料；2)卵量评价：依据繁殖系数法进行评价，具体如下：RF＝Pf/Pi；其中，Pf为每株根上卵量，Pi为最初的接种量；当RF≥1时为的感病材料，当RF<1时为抗病材料；3)虫瘿指数评价：0级：无根结；1级：<10％的根系有根结；2级：11-20％的根系有根结；3级：21-30％的根系有根结；4级：31-40％的根系有根结；5级：41-50％的根系有根结；6级：51-60％的根系有根结；7级：61-70％的根系有根结；8级：71-80％的根系有根结；9级：81-100％根系受侵染，有可见根；10级：100％根系受侵染，没有根，植株死亡；抗性评价：0-3级是抗病材料，≥4级为感病材料；结合卵块数量、卵量和虫瘿指数3项评价指标，3个指标都为抗病的材料，则判定为抗病马铃薯材料；3个指标有一项为感病材料，则判定为感病马铃薯材料；所述的块茎的评价结果是依据马铃薯块茎上的雌虫数量进行评价：块茎收获后清洗、切片、染色、镜检；抗性评价：块茎上有雌虫的为感病材料，无雌虫为抗病材料。最后，若植株的评价结果为抗病材料，块茎的评价结果为抗病材料，则判定为抗病马铃薯材料；若植株的评价结果为感病材料，直接判定为感病马铃薯材料。本专利技术的根结线虫完成一个生活周期具体指：根结线虫完成一个生活周期的时间大约为30天左右，但是其生活周期和温度密切相关。为了保证一个生活周期的完成，马铃薯接种南方根结线虫和爪哇根结线虫40天后收获，北方根结线虫45天收获，然后调查虫瘿指数、卵块数量和卵量；在试验中，为了保证准确判定块茎对根结线虫的抗感性，将参试的马铃薯材料根据熟期进行分组，晚熟材料培养80天接种根结线虫，其它材料培养60天接种，并根据熟期选择合适的对照。本专利技术包含以下有益效果：试验材料用马铃薯试管苗，不仅试验材料容易得到而且培养容器大大缩小，占地面积是常规用块茎做试验材料的1/90，同时基质用量是传统方法的1/90。用经过脱毒的试管苗做试验材料，避免了块茎可能带有其他杂菌或线虫的可能性，影响评价结果的准确性，对马铃薯材料的植株和块茎同时进行评价，增加了抗性筛选的准确性。附图说明图1为试验二接种植物在温室中的生长情况图片；图2为试验二收获时的马铃薯植株图片；图3为试验一为马铃薯块茎被品红染色图；图4为试验二被亮蓝染色的植株根系图；其中A为卵块。具体实施方式具体实施方式一：本实施方式的一种高效筛选马铃薯对根结线虫的抗性方法，它是按照以下步骤进行的：首先在组培室内按常规方法培养马铃薯试管苗，待马铃薯试管苗培养20d左右，长到6-7片叶时，挑选株高和茎粗整齐一致的壮苗作为试验材料；在温室内放置2d完成马铃薯试管苗的适应性培养后进行移栽，移栽到一次性的16cm×14cm的塑料营养钵中，基质为经过121℃，90min高温高压灭菌的沙土混合物(体积比为2:1)；每个营养钵中移栽1株苗，每份材料移栽5盆；温度控制在23-28℃，定植1周缓苗后，每周浇一次营养液；培养60天接种根结线虫，接种量为5000卵/株，整个试验需要重复2-3次。接种后40天通过调查马铃薯根上的虫瘿指数、卵块数量和卵量，马铃薯块茎上的雌虫数量，来评价马铃薯材料的抗感反应。评价方法：对马铃薯植株的评价1)卵块数量(卵块的数量/根鲜重)评价。级别：参照Nyczepir等(1982)方法略有改动，0级：没有卵块；1级：1-2个卵块；2级：3-10个卵块；3级：11-30个卵块；4级：31-100个卵块；5级：≥100个卵块。0-3级为是抗病(ResistanceR)，≥4级为感病(SusceptibleS)2)卵量评价：参照Mwaura等(2015)的方法。繁殖系数(ReproductionfactorRF)法：RF＝Pf/Pi(Pf每株根上卵量，Pi为最初的接种量)当RF≥1时为的感病，当RF<1时为抗病3)虫瘿指数：参照BridgeandPage(1980)和Wangetal.(2006)的方法略有改动。0级：无根结；1级：<10％的根系有根结；2级：11-20％的根系有根结；3级：21-30％的根系有根结；4级：31-40％的根系有根结；5级：41-50％的根系有根结；6级：51-60％的根系有根结；7级：61-70％的根系有根结；8级：71-80％的根系有根结；9级：81-100％根系受侵染，有可见根；10级：100％根系受侵染，没有根，植株死亡；0-3级为抗病(ResistanceR)，≥4级为感病(SusceptibleS)。结合3项评价指标，3个指标都为R的为抗病，三个指标中有一项本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效筛选马铃薯对根结线虫的抗性方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：首先在组培室内扩繁马铃薯试管苗，将培养的株高和茎粗都一致的试管苗直接移栽到营养钵内，然后每周浇一次营养液，培养60天后接种根结线虫；根结线虫完成一个生活周期后根据植株的评价结果以及块茎的评价结果，判定马铃薯对根结线虫的抗感性；所述的植株的评价结果是依据马铃薯根上的卵块数量、卵量和虫瘿指数进行评价：1)卵块数量评价级别：0级：没有卵块；1级：1‑2个卵块；2级：3‑10个卵块；3级：11‑30个卵块；4级：31‑100个卵块；5级：≥100个卵块；抗性评价：0‑3级为抗病材料，≥4级为感病材料；2)卵量评价：依据繁殖系数法进行评价，具体如下：RF＝Pf/Pi；其中，Pf为每株根上卵量，Pi为最初的接种量；当RF≥1时为感病材料，当RF<1时为抗病材料；3)虫瘿指数评价：0级：无根结；1级：<10％的根系有根结；2级：11‑20％的根系有根结；3级：21‑30％的根系有根结；4级：31‑40％的根系有根结；5级：41‑50％的根系有根结；6级：51‑60％的根系有根结；7级：61‑70％的根系有根结；8级：71‑80％的根系有根结；9级：81‑100％根系受侵染，有可见根；10级：100％根系受侵染，没有根，植株死亡；抗性评价：0‑3级是抗病材料，≥4级为感病材料；结合卵块数量、卵量和虫瘿指数3项评价指标，3个指标都为抗病的材料，则判定为抗病马铃薯材料；3个指标有一项为感病材料，则判定为感病马铃薯材料；所述的块茎的评价结果是依据马铃薯块茎上的雌虫数量进行评价：块茎收获后清洗、切片、染色、镜检；抗性评价：块茎上有雌虫的为感病材料，无雌虫为抗病材料。最后，若植株的评价结果为抗病材料，块茎的评价结果为抗病材料，则判定为抗病马铃薯材料；若植株的评价结果为感病材料，直接判定为感病马铃薯材料。...

【技术特征摘要】
1.一种高效筛选马铃薯对根结线虫的抗性方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：首先在组培室内扩繁马铃薯试管苗，将培养的株高和茎粗都一致的试管苗直接移栽到营养钵内，然后每周浇一次营养液，培养60天后接种根结线虫；根结线虫完成一个生活周期后根据植株的评价结果以及块茎的评价结果，判定马铃薯对根结线虫的抗感性；所述的植株的评价结果是依据马铃薯根上的卵块数量、卵量和虫瘿指数进行评价：1)卵块数量评价级别：0级：没有卵块；1级：1-2个卵块；2级：3-10个卵块；3级：11-30个卵块；4级：31-100个卵块；5级：≥100个卵块；抗性评价：0-3级为抗病材料，≥4级为感病材料；2)卵量评价：依据繁殖系数法进行评价，具体如下：RF＝Pf/Pi；其中，Pf为每株根上卵量，Pi为最初的接种量；当RF≥1时为感病材料，当RF<1时为抗病材料；3)虫瘿指数评价：0级：无根结；1级：<10％的根系有根结；2级：11-20％的根系有根结；3级：21-30％的根系有根结；4级：31-40％的根系有根结；5级：41-50％的根系有根结；6级：51-60％的根系有根结；7级：61-70％的根系有根结；8级：71-80％的根系有根结；9级：81-100％根系受侵染，有可见根；10级：100％根...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛彦芝，王从丽，李春杰，宋继玲，杨耿斌，
申请(专利权)人：黑龙江省农业科学院克山分院，中国科学院东北地理与农业生态研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23